陶兆燕，程媛，唐熠，譚億民，李涓

·藥理毒理·

吳茱萸堿對高尿酸血癥動物模型的影響

陶兆燕1，程媛2，唐熠2，譚億民2，李涓2

目的：通過建立大鼠及雞高尿酸血癥動物模型，觀察吳茱萸堿的降血尿酸作用。 方法：將大鼠灌胃次黃嘌呤(100 mg．kg-1)，再皮下注射氧嗪酸鉀鹽(20 mg．kg-1)致尿酸增高模型，觀察吳茱萸堿的降血尿酸作用；通過喂食雞高蛋白高鈣飼料建立雞高尿酸血癥模型，觀察吳茱萸堿在給藥7 d和14 d后的降血尿酸作用。結果：與模型組比較，吳茱萸堿高低劑量組均有降低大鼠血清尿酸值的作用，且低劑量組降血尿酸作用效果顯著；在給藥后第7 d和第14 d，與模型組比較，吳茱萸堿低劑量組能顯著降低雞高尿酸血癥動物模型的血清尿酸值。結論：吳茱萸堿具有一定的降血尿酸作用，為臨床進一步研究吳茱萸堿對高尿酸血癥的治療作用提供了實驗依據。

]吳茱萸堿；高尿酸血癥；降血尿酸

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸、石虎或疏毛吳茱萸的干燥近成熟果實。始載于《神農本草經》，味辛、苦，性熱；具有散寒止痛，降逆止嘔，助陽止泄之功；其主要活性成分為吳茱萸堿。藥理實驗研究表明吳茱萸堿具有抗炎鎮(zhèn)痛、促進消化、保護心血管、強心、降壓、抗菌、減肥、降尿酸、收縮子宮及抑制睪酮分泌等作用[1～2]。高尿酸血癥是長期嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄減少引起血尿酸水平增高及尿酸鹽在組織沉積所致的疾病。通過前期實驗研究表明吳茱萸堿有明顯降血尿酸的作用[3]，為了進一步深入研究其降血尿酸作用，本次實驗我們采用不同的高尿酸血癥動物模型對其進行研究，以期為以后臨床應用提供更全面的實驗參考和理論依據。

1 材料與儀器

1.1 藥物

吳茱萸堿，西安冠宇生物技術有限公司生產，批號Ev120418，純度98.26%。別嘌醇片，重慶科瑞制藥（集團）有限公司生產，批號512002。

1.2 動物

SD大鼠，雄性，體重200～250g，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供，許可證號為SCXK(川)2008-11；羅曼蛋雞，體重450～550 g，由成都正大畜禽有限公司提供。常規(guī)飼料由成都市新津希望飼料廠提供；造模飼料由四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場提供，其中造模飼料(底料為常規(guī)飼料，補充魚粉、骨粉)蛋白質含量大于20%、含鈣量大于4%。

1.3 試劑

氧嗪酸鉀，Sigma-Aldrich 公司生產，批號STBC1486V；次黃嘌呤，Sigma -Aldrich公司生產，批號037K06854；尿酸測定試劑盒，四川邁克生物科技股份有限公司生產，批號0812061、0113011。

1.4 儀器

LXJ-Ⅱ型離心沉淀機，上海醫(yī)用分析儀器廠；電熱恒溫水溫箱，上海醫(yī)療器械七廠；BASIC 70VB 0370型半自動生化分析儀，法國西克曼公司；R180D型賽多利斯電子分析天平，d=0.01mg，德國Sartorius公司；T-l000型電子天平，d=0.1g，美國雙杰兄弟(集團)有限公司。

2 方法

2.1 大鼠降血尿酸實驗[4～6]

選擇體重為200～250 g的健康雄性SD大鼠50只，按體重隨機分為5組，即空白對照組，模型組，別嘌醇組，吳茱萸堿高、低劑量組?？瞻讓φ战M和模型組灌胃給予等容量的0.5% CMC-Na溶液，其余各組動物按表1所列劑量分別灌胃給予相應藥物，給藥容量均為1 mL．100g-1，每天給藥1次，連續(xù)7 d。末次給藥30 min后，模型組和各藥物組進行高尿酸血癥的造模，先灌胃給予劑量為100 mg．kg-1次黃嘌呤，給藥容量為1 mL．100g-1，再皮下注射劑量為20 mg．kg-1氧嗪酸鉀鹽，給藥容量為0.5 mL．100g-1?？瞻讓φ战M同法操作給予等容量的0.5%CMC-Na溶液和等容量的生理鹽水。造模后3 h從大鼠眼眶靜脈叢取血，3000 rpm離心10 min，分離血清，用尿酸測定試劑盒規(guī)定的檢測方法測定血清尿酸值。

2.2 雞高尿酸血癥實驗[7～10]

2.2.1 模型制作 根據預試結果，選取100日齡羅曼蛋雞50只，在實驗室適應性喂養(yǎng)5d后，隨機抓取10只作為空白對照組，并給予常規(guī)飼料，自由飲水。其余40只每天每只給予高蛋白高鈣飼料進行造模，并且每只雞每日控制進水量100 mL，單籠喂養(yǎng)。于造模第14 d抽取雞翅靜脈血，取血前動物禁食不禁水8 h，3000 rpm離心10 min，分離血清，按試尿酸測定試劑盒規(guī)定的檢測方法測定血清尿酸值，若血清尿酸值與空白對照組比較顯著升高，且差異具有顯著性，則說明造模成功。

2.2.2 分組給藥 根據血清尿酸值將成模雞隨機分為4組，即模型組，別嘌醇組，吳茱萸堿高、低劑量組?？瞻讓φ战M，給予常規(guī)飼料，自由飲水。模型組繼續(xù)給予高蛋白高鈣飼料，并控制進水量每只雞每日100 mL。其余組除每只雞每天給予高蛋白高鈣飼料和控制進水量100 mL外，并按表2劑量給予相應藥物，每日灌胃1次，連續(xù)給藥14 d?？瞻讓φ战M和模型組同法操作給予等容量的0.5%CMC-Na溶液。在給藥后第7 d、14 d分別稱體重1次，于雞翅靜脈取血，取血前動物禁食不禁水8 h，3000 rpm離心10 min，分離血清，按試劑盒規(guī)定檢測方法測定血清尿酸值。

2.2.3 取血方法 將雞翅展開暴露翼根靜脈，7號針頭以45°角刺破血管，1.5 mL離心管收集流出的血液，完畢后壓迫止血。

2.3 統(tǒng)計學方法

3 結果

3.1 對大鼠血清尿酸值的影響

結果顯示，與空白對照組比較，模型組血清尿酸值顯著升高。與模型組比較，吳茱萸堿高、低劑量組對灌胃給予次黃嘌呤再皮下注射氧嗪酸鉀鹽致血清尿酸值增高均有降低作用，且低劑量組降血尿酸作用效果顯著。由此表明吳茱萸堿具有降血尿酸的作用，結果見表1。

表1 吳茱萸堿對大鼠血清尿酸值的影響(±s，n = 10)

表1 吳茱萸堿對大鼠血清尿酸值的影響(±s，n = 10)

注：與模型組比較* P＜0.05；** P＜0.01

組別 劑量（mg．kg-1） 血清尿酸值（μmol．L-1）空白對組 － 87.80±11.66**模型組 － 165.70±39.97吳茱萸堿低劑量組 9 111.70±19.98**吳茱萸堿高劑量組 18 120.90±30.82*別嘌醇組 18 99.40±11.73**

3.2 對雞血清尿酸值的影響

結果顯示，與空白對照組比較，模型組血清尿酸值在給藥后第7 d和第14 d均明顯升高，且差異具有顯著性，說明該造模方法所建立的高尿酸血癥模型成立。在給藥后第7 d和第14 d，與模型組比較，吳茱萸堿低劑量組血清尿酸值顯著下降，且差異具有顯著性，由此說明吳茱萸堿確實具有一定的降血尿酸作用，結果見表2。

表2 吳茱萸堿對雞血清尿酸值的影響(±s，n = 10)

表2 吳茱萸堿對雞血清尿酸值的影響(±s，n = 10)

注：與模型組比較** P＜0.01

組別 劑量（mg．kg-1） 血清尿酸值（μ mol．L-1）給藥7 d 給藥14 d空白組 - 111.90±22.03** 170.90±28.52**模型組 - 323.00±64.29 370.50±56.96吳茱萸堿低劑量組 5 204.00±27.41** 226.50±33.41**吳茱萸堿高劑量組 10 257.10±103.02 338.40±78.21別嘌醇組 15 147.10±29.29** 172.00±25.12**

4 討論

吳茱萸為傳統(tǒng)中藥，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗血小板聚集、抑菌、促進消化、降壓、保護心血管等作用[11]。吳茱萸堿是吳茱萸中含有的一種色胺吲哚類生物堿，它具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、強心、增強機體免疫力、調節(jié)體溫等作用，它的藥理作用近些年來越來越受到科研人員的關注。痛風是嘌呤代謝障礙引起的代謝性疾病，其臨床表現(xiàn)主要為高尿酸血癥、反復發(fā)作的急性、慢性關節(jié)炎、痛風石沉積、關節(jié)畸形和組織損傷等。高尿酸血癥是痛風的主要生化基礎，痛風必然伴有高尿酸血癥。

近年來，隨著人們生活水平的提高，飲食結構的改變，高尿酸血癥及痛風的發(fā)病率同高血脂、高血壓、糖尿病一樣在逐年上升，且高尿酸血癥及痛風與肥胖、高血壓、冠心病、胰島素抵抗的發(fā)生等密切相關[12]，這使得人們對高尿酸血癥及痛風產生了更多的關注，而中醫(yī)藥在防治痛風及高血尿酸方面有著明顯的優(yōu)勢。動物模型作為研究疾病發(fā)病機制和藥理藥效的一種方法在科學發(fā)展中也有著重要的作用，從現(xiàn)有對高尿酸血癥動物模型的研究來看，目前還沒有公認的高尿酸血癥動物模型[13]。因此構建一個科學合理、持續(xù)穩(wěn)定的高尿酸血癥動物模型和為治療痛風及高尿酸血癥提供安全有效穩(wěn)定的中藥制劑尤為重要。

從本文大鼠降血尿酸實驗和雞高尿酸血癥實驗結果我們可以看出，吳茱萸堿具有明顯降血尿酸的作用。從表1吳茱萸堿對大鼠血清尿酸值的影響實驗結果顯示，與模型組比較，吳茱萸堿高低劑量組均有降血尿酸的作用，且低劑量組降血尿酸作用效果顯著。從表2吳茱萸堿對雞血清尿酸值的影響結果顯示，吳茱萸堿低劑量組有顯著降血尿酸的作用。本實驗通過不同的實驗方法及實驗動物建立的高尿酸血癥模型，均表明吳茱萸堿具有降血尿酸的作用。此外，通過本實驗的研究也為進一步研究吳茱萸堿降血尿酸的作用機制及其臨床應用提供了實驗參考，同時也為臨床開發(fā)治療痛風病新藥提供了理論依據。

[1] 劉溪,高世勇.吳茱萸堿藥理作用研究進展[C].第六屆肉蓯蓉暨沙生藥用植物學術研討會論文集,2012:346.

[2] 0gasawara M,Matsybaga T,Takahashi S.Anti-invasive and merastatic activities of evodiamine[J].Biol Pharm Bull, 2002，25(11):1491.

[3] 宋英,盛蓉,李涓,等.吳茱萸堿治療痛風的藥效學研究[J].中藥藥理與臨床,2011,27(6):17.

[4] 徐立,時樂.灌服與喂飼次黃嘌呤復制大鼠持續(xù)性高尿酸血癥模型方法初探[J].中國藥理學通報,2008,24(12):1671.

[5] 徐立,時樂.次黃嘌呤與氧嗪酸鉀不同劑量配伍制備高尿酸血癥大鼠模型[J].中國藥理學與毒理學雜志,2008,22( 4):306.

[6] 徐立,時樂,仲文欣.尿酸酶抑制劑在大鼠急性高尿酸血癥模型復制中的應用[J].中國比較醫(yī)學雜志,2007,17(3):142.

[7] 黃國鈞,黃勤挽.醫(yī)藥實驗動物模型制作與應用[M].北京:化學工業(yè)出版社,2007:512.

[8] 周敏,雒曉鳴,張巍,等.痹清膠囊對雞高尿酸血癥模型尿酸代謝的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2006,12(12):35.

[9] 黃麗霞,張慧,黃承初,等.通痹祛風湯對雞痛風病模型血尿酸代謝的影響[J].藥物與臨床,2008,(27):59.

[10] 匡紅艷,程太平,胡建兵,等.雞持續(xù)高尿酸血癥模型的制備方法研究[J].四川動物,2008,27( 4):555.

[11] 張鳳玲.吳茱萸的現(xiàn)代研究[J].北方藥學,2011,8(8):106．

[12] Akkasilpa S,Avihingsanon Y,Hanvivadhanakul P,et al.Clinical manifestations of patients with hyperuricemia[J].J Med Assoc Thai,2004,87(2):41.

[13] 楊會軍,李兆福,彭江云.高尿酸血癥動物模型研究概況[J].中醫(yī)學報,2013,28(176):60.

（責任編輯：陳思敏）

Effect of evodiamine on the animal model of Hyperuricemia

/TAO Zhao-yan1, CHENG Yuan2, TANG Yi2, TAN Yi-ming2,LI Juan2//(1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China;2.Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China )

Objective: Through the establishment animal model of hyperuricemia in rats and chickens to investigate the effects of evodiamine in reducing serum uric acid. Method: The model of hyperuricemia rat was established by intragastric administration of hypoxanthine (100mg．kg-1) frstly and then subcutaneous injection of oxygen hydrochloride acid potassium salt (20mg．kg-1), and the effects of Evodiamine in reducing serum uric acid was investigated. The chicken model of hyperuricemia as established through feeding chicken high protein and high calcium, and the effects of evodiamine in reducing serum uric acid after dosing 7d and 14d were investigated. Result: Compared with the model group, the high and low dosage groups of evodiamine had effect of reducing serum uric acid values in rats, while the low dose group could signifcantly reduced serum uric acid. being administered, 7d and 14d after, compared with the model group, the low dose group of evodiamine could signifcantly reduce the serum uric acid values of hyperuricemia chicken. Conclusion: Evodiamine has a certain role in reducing blood uric acid and provides an experimental basis for the further study on clinical therapeutic effects of evodiamine on hyperuricemia.

Evodiamine；hyperuricemia; reducing serum uric acid

R 285.5

A

1674-926X(2014)02-020-03

四川省科技廳科技基金（編號：2012G032）

1.成都中醫(yī)藥大學，四川 成都 610075；

2.成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，四川 成都 610072

陶兆燕（1987-），女，四川瀘州人，在讀碩士研究生，主要從事中藥藥效與毒理研究

Tel:13551079749 Email:taozhaoyan@126.com

李涓（1963-），女，重慶人，教授，主要從事藥理學、中藥藥理學研究以及新藥的開發(fā)研究

Tel:13668162880 Email:Li062@126.com

2013-07-26