梁觀明，許 軍，謝燕飛，黃黎敏，劉燕華，唐 禎（江西中醫(yī)藥大學(xué)藥物化學(xué)學(xué)科組，南昌 330004）

隨著生活水平的提高，由高脂血癥導(dǎo)致的動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等心血管疾病發(fā)病率逐年升高，并伴有年輕化趨勢(shì)，尋找低毒有效的新降血脂藥物已成為藥物研究的重點(diǎn)之一[1]。氯苯氧異丁酸甲氧基苯丙烯酸酯{（E）-3-[4-[2-（4-chlorophenoxy）-2-methylpropanoyloxy]-3-methoxyphenyl]acrylic acid，AZ}系將化學(xué)成分阿魏酸為母核通過(guò)化學(xué)結(jié)構(gòu)篩選及結(jié)構(gòu)改造所得的有降血脂活性的全新化合物[2]；而AZ衍生物是以AZ為先導(dǎo)化合物，經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)改造篩選，通過(guò)化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾，所設(shè)計(jì)合成的一系列全新化合物，對(duì)開發(fā)新的降血脂藥物有重大意義。通過(guò)臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，AZ能較好地從胃腸道吸收，進(jìn)入血液后代謝為氯苯氧異丁酸[3]。通過(guò)對(duì)其藥效學(xué)的深入研究，已證明AZ為一種有效的降血脂候選藥物[4]，對(duì)高脂飼料所致大鼠高脂血癥有著顯著的改善作用[5]。本實(shí)驗(yàn)篩選出5個(gè)AZ衍生物（AZ甲醇酯、AZ乙醇酯、AZ苯酚酯、AZ對(duì)氯苯酚酯、AZ對(duì)甲基苯酚酯），通過(guò)觀察其對(duì)高脂血癥模型大鼠的血清生化指標(biāo)和超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、過(guò)氧化氫酶（CAT）活性的影響，研究AZ衍生物的降血脂及抗氧化作用，為系統(tǒng)研究AZ 及其衍生物藥效提供數(shù)據(jù)參考，為進(jìn)一步尋找更加穩(wěn)定有效的AZ衍生物奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

Dimension RXL Max 全自動(dòng)生化分析儀（德國(guó)Siemens 公司）；XL2100K 制備型超速離心機(jī)（美國(guó)Beck-Coulter Optima公司）；酶標(biāo)儀（美國(guó)Biotek公司）。

1.2 藥品與試劑

AZ、AZ 甲醇酯、AZ 乙醇酯、AZ 苯酚酯、AZ 對(duì)氯苯酚酯、AZ 對(duì)甲基苯酚酯（江西中醫(yī)藥大學(xué)藥物化學(xué)學(xué)科組提供，批號(hào)：20121208、20121225、20121230、20130110、20130112、20130120，純度：均大于99%）；非諾貝特片（上海黃海制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20110921，規(guī)格：每片0.1 g）；血清總膽固醇（TC）、高脂血癥（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測(cè)定試劑盒（美國(guó)Siemens公司）；SOD測(cè)定試劑盒（批號(hào)：20120917）、MDA 測(cè)定試劑盒（批號(hào)：20120920）、CAT 測(cè)定試劑盒（批號(hào)：20120920）均購(gòu)自南京建成生物研究所。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠90只，♀♂各半，體質(zhì)量180～220 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（湘）2009-0004。

1.4 飼料

高脂飼料的配方：基礎(chǔ)飼料87.3%（由江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供），豬油10%、膽固醇2%、膽鹽0.5%、丙基硫氧嘧啶0.2%（上海藍(lán)季科技有限公司）。

2 方法

2.1 建模與分組[6-8]

取大鼠90只，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)取10只作為空白對(duì)照組，♀♂分籠飼養(yǎng)，每籠5 只，給予普通飼料喂養(yǎng)；剩余80只大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)4周，禁食12 h（不禁水）后靜脈取血分離血清，于自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定血清生化指標(biāo)（TC、TG、LDL-C、HDL-C），根據(jù)血脂水平將大鼠隨機(jī)分為模型組、AZ（83 mg/kg）組、AZ 甲醇酯（86.3 mg/kg）組、AZ 乙醇酯（89.3 mg/kg）組、AZ 苯酚酯（99.5 mg/kg）組、AZ 對(duì)氯苯酚酯（106.8 mg/kg）組、AZ對(duì)甲基苯酚酯（102.5 mg/kg）組和陽(yáng)性對(duì)照（非諾貝特100 mg/kg）組，每組10只，♀♂分籠飼養(yǎng)，每籠5只。

2.2 給藥

空白對(duì)照組大鼠一直灌胃給予普通飼料，從第5周開始在其他組大鼠給藥時(shí)灌胃給予等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉生理氯化鈉溶液；其余各組大鼠持續(xù)給予高脂飼料，從第5 周（29 d）開始，各給藥組大鼠分別灌胃給予相應(yīng)藥物，模型組大鼠灌胃給予等體積0.5%羧甲基纖維素鈉生理氯化鈉溶液。給藥周期為2周（第5、6周），每日1次，自由攝食飲水。每周稱體質(zhì)量2次，根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整給藥劑量。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

給藥期間，密切觀察記錄各組大鼠的行為活動(dòng)、飲食、排便和排尿情況。末次給藥后禁食12 h 靜脈取血，采用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清生化指標(biāo)，測(cè)定試劑盒測(cè)定血清中SOD、MDA、CAT活性變化。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 大鼠高脂血癥模型的鑒定

與空白對(duì)照組比較，高脂飼料飼養(yǎng)的大鼠血清中TC、TG、LDL-C 含量均明顯升高，HDL-C 含量明顯降低（P＜0.01），表明大鼠高脂模型建立成功。

3.2 AZ衍生物對(duì)高脂血癥大鼠基本情況和體質(zhì)量的影響

給藥期間，各組大鼠毛色光潔、行為活動(dòng)、食欲及二便情況均正常，未出現(xiàn)異常體征，未發(fā)生自然死亡。與空白對(duì)照組比較，其余各組大鼠體質(zhì)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具體結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量變化（，g，n＝10）Tab 1 The changes of body weight of rats in each group（，g，n＝10）

表1 各組大鼠體質(zhì)量變化（，g，n＝10）Tab 1 The changes of body weight of rats in each group（，g，n＝10）

3.3 AZ衍生物對(duì)高脂血癥大鼠血清生化指標(biāo)的影響

與模型組比較，AZ 組、AZ 甲醇酯組、AZ 乙醇酯組、AZ 苯酚酯組、AZ對(duì)氯苯酚酯組、AZ對(duì)甲基苯酚酯組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；各AZ 組大鼠血清中HDL-C 含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清中HDL-C 含量明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明，AZ、AZ 甲醇酯、AZ乙醇酯、AZ苯酚酯、AZ對(duì)氯苯酚酯和AZ對(duì)甲基苯酚酯對(duì)高脂血癥模型大鼠有降低血清TC、TG和LDL-C含量的作用，但對(duì)增加血清HDL-C 的效果不明顯。AZ 降低大鼠血清TC、TG和LDL-C含量的作用與非諾貝特相當(dāng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。AZ衍生物降低大鼠血清TC、TG和LDL-C含量的作用與AZ相當(dāng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠血清生化指標(biāo)的比較見表2。

3.4 AZ 衍生物對(duì)高脂血癥大鼠血清中SOD、MDA、CAT 活性的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中SOD、CAT活性均降低，MDA 活性升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，各AZ 組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清中SOD、CAT 活性均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；各AZ組大鼠血清中MDA 活性均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清中MDA 活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠血清中SOD、MDA和CAT活性比較見表3。

表2 各組大鼠血清生化指標(biāo)的比較（，n＝10）Tab 2 Comparison of biochemical indicators of rats in each grou（，n＝10）

表2 各組大鼠血清生化指標(biāo)的比較（，n＝10）Tab 2 Comparison of biochemical indicators of rats in each grou（，n＝10）

與空白對(duì)照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01vs.blank control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01

表3 各組大鼠血清中SOD、MDA 和CAT 活性比較（，n＝10）Tab 3 Comparison of SOD，MDA and CAT activity in serum of rats in each grou（，n＝10）

表3 各組大鼠血清中SOD、MDA 和CAT 活性比較（，n＝10）Tab 3 Comparison of SOD，MDA and CAT activity in serum of rats in each grou（，n＝10）

與空白對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.blank control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

4 討論

心腦血管疾病及高血脂是近年來(lái)威脅人類生命的主要疾患，預(yù)防心腦血管疾病及降血脂藥物的研制一直是醫(yī)藥科技工作者關(guān)注的熱點(diǎn)，大量流行病學(xué)、病理學(xué)觀察及臨床干預(yù)研究表明，血脂水平升高是心腦血管疾病的主要獨(dú)立危險(xiǎn)因素。高脂血癥是誘發(fā)心血管病和動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素之一，而動(dòng)脈粥樣硬化和高血黏度是腦血管病和冠心病的首要誘因。當(dāng)血清LDL-C 濃度升高時(shí)，動(dòng)脈壁內(nèi)脂質(zhì)特別是膽固醇酯增多，沉積到一定程度時(shí)可引起中膜平滑肌組織大量增殖，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展[9]。而HDL-C被稱為血管清道夫，能將外圍組織和血液中的膽固醇運(yùn)送至肝臟進(jìn)行代謝，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。

對(duì)于本文各衍生物的給藥劑量的確認(rèn)：首先AZ作為全新結(jié)構(gòu)的先導(dǎo)化合物，亦可看作對(duì)氯苯氧異丁酸結(jié)構(gòu)改造而來(lái)，故選用藥物對(duì)氯苯氧異丁酸衍生物氯貝特為標(biāo)準(zhǔn)等摩爾質(zhì)量換算出給藥劑量；其次前期實(shí)驗(yàn)證明AZ的給藥劑量83 mg/kg（擬定臨床給藥劑量的10 倍）也有較好的降血脂活性，其各衍生物則也以這個(gè)劑量等摩爾質(zhì)量換算出來(lái)[4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，AZ、AZ 甲醇酯、AZ 乙醇酯、AZ 苯酚酯、AZ 對(duì)氯苯酚酯、AZ 對(duì)甲基苯酚酯能顯著降低高脂血癥模型大鼠的血清TC、TG和LDL-C含量水平，但對(duì)增加血清HDL-C的效果不明顯，原因可能為需要更高劑量和（或）更長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)周期才能明顯增加血清HDL-C含量。

SOD 是體內(nèi)最重要的抗氧化酶之一，被譽(yù)為自由基的清除劑，其通過(guò)抑制過(guò)氧化脂質(zhì)反應(yīng)，減少M(fèi)DA 和自由基的產(chǎn)生。MDA 為氧自由基氧化細(xì)胞膜上磷脂形成的脂質(zhì)過(guò)氧化物的穩(wěn)定存在形式，可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度。當(dāng)血脂升高時(shí)，氧自由基生成增加，脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強(qiáng)，MDA產(chǎn)生增多，SOD 消耗增多，活力降低，造成氧自由基堆積。CAT是清除H2O2的主要酶，減少自由基的生成。其與SOD 發(fā)生協(xié)同作用減少氧自由基的產(chǎn)生，防止脂質(zhì)過(guò)氧化對(duì)機(jī)體造成的損害。而本實(shí)驗(yàn)中5 個(gè)AZ 衍生物能顯著升高血清SOD、CAT活性，顯著降低MDA 活性，由此可見，AZ 衍生物可增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，其進(jìn)一步提示AZ衍生物的降血脂作用可能與其增強(qiáng)抗氧化活力、預(yù)防脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)。

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