王晨陽(yáng)，孫衛(wèi)衛(wèi)，徐 鵬，劉海燕，曹雪濱

紅景天是景天科景天屬多年生草本植物，大多生長(zhǎng)在海拔1600～5000 m的高寒地區(qū)，形成了獨(dú)特的生物活性成分?，F(xiàn)代中醫(yī)藥理學(xué)研究明確紅景天主要藥理活性成分包括紅景天苷(Salidroside，SAL)、苷元酪醇、酪薩維、紅景天素、多糖、黃酮、皂苷等［1］。其中主要有效成分SAL具有抗缺氧、促進(jìn)造血功能［2］、抗心肌缺血、抑制心肌細(xì)胞凋亡、抑制氧化應(yīng)激［3］、調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用，被廣泛應(yīng)用于防治冠心病、高血壓、腦血管病、更年期綜合征等疾病。離體血管舒縮功能的調(diào)節(jié)包括血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO等血管舒張因子、血管平滑肌細(xì)胞通過(guò)外鈣內(nèi)流及內(nèi)鈣釋放調(diào)控細(xì)胞內(nèi)Ca2+的變化等發(fā)揮舒縮血管的作用［4］。由于外周阻力血管收縮功能在血壓調(diào)節(jié)中有重要作用，尤其是外周阻力血管在慢性心力衰竭(心衰)動(dòng)物模型中舒縮功能的研究對(duì)疾病治療有重要意義，故本研究重點(diǎn)探討SAL對(duì)慢性心衰大鼠離體腸系膜動(dòng)脈舒縮作用的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 設(shè)備:610M DMT微血管張力測(cè)定儀(AD Instrumengts公司)，Powerlab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)(AD Instrumengts公司)。

1.1.2 藥物與試劑:SAL購(gòu)于上海英軒生化試劑有限公司。去氧腎上腺素(Phenylephrine，PE)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:雄性SD大鼠20只，體重160～170 g，購(gòu)于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào):SCXK-2012-0004。

1.2 方法

1.2.1 心衰動(dòng)物模型的建立及分組:將20只大鼠隨機(jī)分為心衰組、假手術(shù)組，每組10只。心衰組采用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)制備壓力超負(fù)荷心衰大鼠模型。模型建立參照Conrad等［5］的方法并做改進(jìn):大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)l周，術(shù)前12 h禁食，自由飲水。測(cè)量體重后予戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉。麻醉成功后，經(jīng)左脊肋角區(qū)去毛、備皮，1%聚維酮碘消毒，縱向切開(kāi)皮膚，切口長(zhǎng)約2 cm，鈍性分離肌層，暴露腹主動(dòng)脈，分離左腎動(dòng)脈起始部上段腹主動(dòng)脈約l cm，據(jù)腹主動(dòng)脈粗細(xì)以直徑為0．7～0．8 mm的不銹鋼探針(或使用7或8號(hào)注射器針，磨圓針頭)與腹主動(dòng)脈一起使用4#絲線結(jié)扎，抽出探針形成腹主動(dòng)脈狹窄(50% ～60%)，6#絲線縫合肌層，4#絲線縫合手術(shù)切口，同時(shí)腹腔一次性注射青霉素10萬(wàn)單位預(yù)防感染。假手術(shù)組腹主動(dòng)脈只穿過(guò)線而不進(jìn)行縮窄。大鼠心衰模型建立成功的標(biāo)準(zhǔn)為大鼠左心室射血分?jǐn)?shù)顯著下降40%，與假手術(shù)組有顯著差異。

1.2.2 腸系膜動(dòng)脈環(huán)制備［6］:術(shù)后16周，取假手術(shù)組(n=8)和心衰組(n=5)大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，大鼠處死后，迅速取出帶系膜的腸管，顯微鏡下分離血管2級(jí)動(dòng)脈分支，剪取1．5～2.0 mm的動(dòng)脈環(huán)。將腸系膜動(dòng)脈環(huán)固定于DMT浴槽內(nèi)傳感器的鉗夾上，已加入Krebs-Henseleit(K-H)液(mmol/L:NaCl 118，KCl 4.7，KH2PO41．2，MgSO4·7H2O 1．2，NaHCO325，CaCl22．5，Glucose 10，pH=7．4)的浴槽中恒速通以95%O2和5%CO2混合氣體，保持溫度在37℃，動(dòng)脈環(huán)在K-H液中平衡20 min后標(biāo)準(zhǔn)化，經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的動(dòng)脈環(huán)孵育45 min，每隔15 min換1次K-H液。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 腸系膜動(dòng)脈環(huán)張力:對(duì)假手術(shù)組(n=8)、心衰組(n=5)大鼠腸系膜動(dòng)脈環(huán)予PE 1μmol/L預(yù)收縮，以不同累積濃度的 SAL(10－8、10－7、10－6、10－5、10－4mol/L，每 2 min 遞增 SAL 濃度)直接作用預(yù)收縮的腸系膜動(dòng)脈環(huán)，應(yīng)用610M DMT微血管張力測(cè)定儀測(cè)定比較兩組腸系膜動(dòng)脈環(huán)張力的變化［7］。

1.3.2 最大舒張反應(yīng)(Emax)及半數(shù)有效濃度(EC50):Emax為血管張力下降幅度占PE(1μmol/L)誘發(fā)最大收縮幅度的最大百分比;應(yīng)用Graphpad Prism 5．0軟件 計(jì)算 EC50［8］，以 PEC50表示 － log［EC50］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用 t檢驗(yàn)及單因素方差分析，α=0．05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 不同累積濃度SAL對(duì)兩組大鼠PE預(yù)收縮腸系膜動(dòng)脈環(huán)的作用 不同累積濃度SAL作用下心衰組腸系膜動(dòng)脈環(huán)張力均大于假手術(shù)組，腸系膜動(dòng)脈環(huán)張力隨著SAL濃度的增加而增大，SAL濃度在10－7mol/L以上時(shí)，兩組腸系膜動(dòng)脈環(huán)的張力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表1。

表1 不同累積濃度SAL對(duì)PE預(yù)收縮的心衰組和假手術(shù)組大鼠腸系膜動(dòng)脈環(huán)張力的影響(x ± s，N)

2.2 SAL對(duì)兩組大鼠PE預(yù)收縮腸系膜動(dòng)脈環(huán)Emax和EC50的影響 心衰組Emax及PEC50均高于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，見(jiàn)表2。

3 討論

目前SAL對(duì)心血管的作用研究主要集中在抑制動(dòng)脈粥樣硬化和改善心肌缺血方面，SAL在動(dòng)脈張力調(diào)控方面的研究在國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道，筆者所在課題組研究發(fā)現(xiàn)，SAL在靜息狀態(tài)下對(duì)腸系膜動(dòng)脈有一定的收縮作用，本研究結(jié)果顯示，SAL在PE預(yù)收縮狀態(tài)下對(duì)正常大鼠和心衰大鼠動(dòng)脈有舒張效果，可見(jiàn)SAL對(duì)阻力血管具有收縮和舒張雙重調(diào)節(jié)作用。

表2 紅景天苷對(duì)兩組大鼠腸系膜動(dòng)脈環(huán)最大舒張反應(yīng)及半數(shù)有效濃度的影響(x±s)

壓力負(fù)荷性心衰大鼠是研究充血性心衰的主要模型，壓力負(fù)荷造成的高血壓會(huì)使阻力血管的管壁張力增加，心臟壓力負(fù)荷增大，心肌細(xì)胞代償性肥大［9］。目前對(duì)機(jī)體如何維持阻力血管舒張功能的機(jī)制尚不清楚，因此了解如何保持阻力血管的血流及保障心肌供血的代償機(jī)制就很有必要。PE激活α1－腎上腺素受體，促進(jìn)細(xì)胞膜上的鈣通道開(kāi)放并通過(guò)第二信使IP3的作用使細(xì)胞內(nèi)鈣釋放引起肌張力升高［10］，而心衰大鼠腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞上交感縮血管纖維分布較多［11］，因此，引起腸系膜動(dòng)脈的收縮主要是通過(guò)增加平滑肌細(xì)胞內(nèi)的Ca2+來(lái)實(shí)現(xiàn)的。故本研究以PE為激動(dòng)劑使腸系膜動(dòng)脈平滑肌收縮，以觀察SAL對(duì)壓力負(fù)荷性心衰大鼠阻力血管的治療作用。本研究發(fā)現(xiàn)，SAL對(duì)心衰組PE預(yù)收縮大鼠腸系膜動(dòng)脈的舒張作用明顯強(qiáng)于假手術(shù)組，說(shuō)明SAL對(duì)于病理性血管的張力有一定修復(fù)作用。SAL對(duì)PE拮抗作用的機(jī)制為:SAL可劑量依賴性地抑制PE對(duì)內(nèi)源性鈣釋放及外源性鈣內(nèi)流所引起的腸系膜動(dòng)脈環(huán)的收縮。有研究者認(rèn)為SAL在體內(nèi)可能通過(guò)升高NO含量、提高SOD活性發(fā)揮降壓作用［12］，也可能通過(guò)調(diào)節(jié)鈣通道及NO代謝途徑而抑制胸主動(dòng)脈環(huán)收縮［13］，但在腸系膜阻力血管中，SAL是否通過(guò)NO起作用還需要進(jìn)一步研究。

總之，SAL對(duì)心衰大鼠動(dòng)脈有直接作用，在具備血管收縮功能的同時(shí)還在很大程度上有舒張血管的效應(yīng)，這種舒張效應(yīng)具有濃度依賴性，其作用機(jī)制可能與平滑肌細(xì)胞的外鈣內(nèi)流或內(nèi)鈣釋放有關(guān)，這種雙向調(diào)節(jié)能力對(duì)于臨床休克狀態(tài)下靶器官功能的保護(hù)有重要意義。

［1］ 宋月英，閆玉仙，韓慧文．紅景天苷藥理研究進(jìn)展［J］．武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，17(7):635-637．

［2］ Zheng K Y，Zhang Z X，Guo A J，et al．Salidroside stimulates the accumulation of HIF-1αprotein resulted in the induction of EPOexpression:A signaling via blocking the degradation pathway in kidney and liver cells［J］．Eur JPharmacol，2012，679(1-3):34-39．

［3］ Li F，Tang H，Xiao F，et al．Protective Protective effect of salidrosid from Rhodiolae Radix on diabetes-induced oxidative stress in mice［J］．Molecules，2011，16(12):9912-9924．

［4］ Aalkjaer C，Boedtkjer D，Matchkov V．Vasomotion-what is currently thought?［J］．Acta Physiol(Oxf)，2011，202(3):253-269．

［5］ Conrad C H，Brooks W W，Robinson K G，et al．Impaired myocardial function in spontaneously hypertensive rats with heart failure［J］．Am J Physiol，199l，260(1 Pt 2):H136-H145．

［6］ Li L，Wu T，Wei C，et al．Exhaustive swimming differentially inhibits P2X1 receptor-andα1-adrenoceptor-mediated vasoconstriction in isolated rat arteries［J］．Acta Pharmacol Sin，2012，33(2):221-229．

［7］ 張博男，儲(chǔ)金秀，韓淑英．蕎麥花葉總黃酮的舒張血管作用及其機(jī)制［J］．中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2010，26(7):952-956．

［8］ 于童，白喜云，解曉晶，等．應(yīng)用GraphPad Prism 5．0軟件計(jì)算藥物的 EC50［J］．藥學(xué)進(jìn)展，2012，4(36):180-183．

［9］ Bugger H，Schwarzer M，Chen D，et al．Proteomic remodelling of mitochondrial oxidative pathways in pressure overloadinduced heart failure［J］．Cardiovascl Res，2010，85(2):376-384．

［10］ Sais G，Vidaller A，Jucgla A，et al．Colchicine in the treatment of cutaneous leukocytoclastic vasculitis．Resultsof a prospective，randomized controlled trial［J］．Arch Dermatol，2005，131(12):1399-1402．

［11］ Chung L，F(xiàn)unke A A，Chakravarty E F，et al．Successful use of rituximab for cutaneous vasculitis［J］．Arch Dermatol，2009，142(11):1407-1410．

［12］王孝琴，王保和，李玉紅，等．紅景天對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的調(diào)節(jié)及機(jī)制［J］．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(11):150-154．

［13］李煒．諾迪康主要有效成分紅景天苷含量測(cè)定及諾迪康對(duì)心血管作用機(jī)制［D］．南寧:廣西醫(yī)科大學(xué)，2006．