陳吉漢等

摘 要 建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLCMS/MS）測(cè)定雞肉與雞蛋中6種他汀類藥物殘留量的方法。采用BEH C18色譜柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸銨為流動(dòng)相， 梯度洗脫分離， 在電噴霧正負(fù)離子模式下以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方式檢測(cè)， 外標(biāo)法定量。6種他汀類藥物檢出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分別為0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg濃度范圍內(nèi)線性良好， 相關(guān)系數(shù)大于0.9910；雞肉和雞蛋樣品中20 μg/kg水平的加標(biāo)回收率分別為80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法應(yīng)用于市場(chǎng)實(shí)際樣品檢測(cè)， 尚未檢出陽(yáng)性樣品。

關(guān)鍵詞 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜； 他汀類藥物； 藥物殘留； 雞肉； 雞蛋

1 引 言

他汀類藥物泛指羥甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶抑制劑， 此類藥物通過競(jìng)爭(zhēng)性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶（HMGCoA）還原酶， 阻斷細(xì)胞內(nèi)羥甲戊酸代謝途徑， 使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少， 從而反饋性刺激細(xì)胞膜表面（主要為肝細(xì)胞）低密度脂蛋白受體數(shù)量和活性增加， 降低血清膽固醇水平。因?yàn)樗☆愃幬锞哂薪档脱?、肝臟、主動(dòng)脈中膽固醇功效， 近幾年， 他汀類藥物開始用于降低家禽肌肉和蛋中膽固醇含量， 研究表明， 喂食他汀類藥物能顯著降低家禽血漿和蛋中膽固醇的含量 [1～4 ]。相比較β內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和氟喹諾酮類抗菌素這些經(jīng)常使用并且殘留檢測(cè)也很成熟的獸藥而言 [5，6 ]， 他汀類藥物在動(dòng)物生產(chǎn)方面的應(yīng)用較少， 國(guó)內(nèi)外對(duì)于他汀類藥物在動(dòng)物源性食品中殘留的情況也鮮有報(bào)道。動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)與人類臨床試驗(yàn)表明， 服用他汀類藥物后， 該類藥物可以較長(zhǎng)時(shí)間以原藥形式存在于血漿之中 [7 ]， 且他汀類藥物在高溫、光照情況下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀類藥物的禽類產(chǎn)品后， 有可能導(dǎo)致他汀類藥物在人體內(nèi)富集， 由于他汀類藥物在降脂的同時(shí)， 使用不當(dāng)也可能會(huì)影響肝腎功能，也可能引發(fā)橫紋肌溶解癥等 [10～14 ]， 甚至?xí)袑?dǎo)致腎衰竭的風(fēng)險(xiǎn) [15 ]， 這使得建立起一套對(duì)肉蛋制品中他汀類藥物的檢測(cè)技術(shù)勢(shì)在必行。

本研究以雞肉與雞蛋為基質(zhì)， 建立超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLCMS/MS）同時(shí)檢測(cè)雞肉和雞蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6種他汀類藥物殘留的方法。本方法簡(jiǎn)便、快速， 可滿足其它家禽肉蛋制品中他汀類藥物的檢測(cè)， 可為建立其它動(dòng)物源性食品中他汀類藥物殘留檢測(cè)提供參考。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

TQS超高效液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Waters公司）；MilliQ純水儀（美國(guó)Millipore公司）；高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Sigma公司）；R205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀鈉、氟伐他汀鈉鹽、普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣（德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作配制

將各標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液， 并根據(jù)需要用甲醇稀釋成適當(dāng)質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液， 于棕色儲(chǔ)存瓶中保存。

2.3 樣品前處理

稱取切碎勻漿過的雞肉樣品或者是100 ℃水煮5 min固態(tài)雞蛋碎末2.000 g 于50 mL 離心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。渦旋振蕩5 min至充分混勻， 超聲提取10 min， 10000 r/min離心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸銨（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀釋， 用聚四氟乙烯過濾器進(jìn)行過濾， 供UPLCMS/MS測(cè)定。

2.3 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色譜柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：A為甲醇， B為5 mmol乙酸銨0.1%甲酸； 梯度洗脫：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；進(jìn)樣體積10 μL。

摘 要 建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLCMS/MS）測(cè)定雞肉與雞蛋中6種他汀類藥物殘留量的方法。采用BEH C18色譜柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸銨為流動(dòng)相， 梯度洗脫分離， 在電噴霧正負(fù)離子模式下以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方式檢測(cè)， 外標(biāo)法定量。6種他汀類藥物檢出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分別為0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg濃度范圍內(nèi)線性良好， 相關(guān)系數(shù)大于0.9910；雞肉和雞蛋樣品中20 μg/kg水平的加標(biāo)回收率分別為80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法應(yīng)用于市場(chǎng)實(shí)際樣品檢測(cè)， 尚未檢出陽(yáng)性樣品。

關(guān)鍵詞 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜； 他汀類藥物； 藥物殘留； 雞肉； 雞蛋

1 引 言

他汀類藥物泛指羥甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶抑制劑， 此類藥物通過競(jìng)爭(zhēng)性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶（HMGCoA）還原酶， 阻斷細(xì)胞內(nèi)羥甲戊酸代謝途徑， 使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少， 從而反饋性刺激細(xì)胞膜表面（主要為肝細(xì)胞）低密度脂蛋白受體數(shù)量和活性增加， 降低血清膽固醇水平。因?yàn)樗☆愃幬锞哂薪档脱?、肝臟、主動(dòng)脈中膽固醇功效， 近幾年， 他汀類藥物開始用于降低家禽肌肉和蛋中膽固醇含量， 研究表明， 喂食他汀類藥物能顯著降低家禽血漿和蛋中膽固醇的含量 [1～4 ]。相比較β內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和氟喹諾酮類抗菌素這些經(jīng)常使用并且殘留檢測(cè)也很成熟的獸藥而言 [5，6 ]， 他汀類藥物在動(dòng)物生產(chǎn)方面的應(yīng)用較少， 國(guó)內(nèi)外對(duì)于他汀類藥物在動(dòng)物源性食品中殘留的情況也鮮有報(bào)道。動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)與人類臨床試驗(yàn)表明， 服用他汀類藥物后， 該類藥物可以較長(zhǎng)時(shí)間以原藥形式存在于血漿之中 [7 ]， 且他汀類藥物在高溫、光照情況下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀類藥物的禽類產(chǎn)品后， 有可能導(dǎo)致他汀類藥物在人體內(nèi)富集， 由于他汀類藥物在降脂的同時(shí)， 使用不當(dāng)也可能會(huì)影響肝腎功能，也可能引發(fā)橫紋肌溶解癥等 [10～14 ]， 甚至?xí)袑?dǎo)致腎衰竭的風(fēng)險(xiǎn) [15 ]， 這使得建立起一套對(duì)肉蛋制品中他汀類藥物的檢測(cè)技術(shù)勢(shì)在必行。

本研究以雞肉與雞蛋為基質(zhì)， 建立超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLCMS/MS）同時(shí)檢測(cè)雞肉和雞蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6種他汀類藥物殘留的方法。本方法簡(jiǎn)便、快速， 可滿足其它家禽肉蛋制品中他汀類藥物的檢測(cè)， 可為建立其它動(dòng)物源性食品中他汀類藥物殘留檢測(cè)提供參考。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

TQS超高效液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Waters公司）；MilliQ純水儀（美國(guó)Millipore公司）；高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Sigma公司）；R205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀鈉、氟伐他汀鈉鹽、普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣（德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作配制

將各標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液， 并根據(jù)需要用甲醇稀釋成適當(dāng)質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液， 于棕色儲(chǔ)存瓶中保存。

2.3 樣品前處理

稱取切碎勻漿過的雞肉樣品或者是100 ℃水煮5 min固態(tài)雞蛋碎末2.000 g 于50 mL 離心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。渦旋振蕩5 min至充分混勻， 超聲提取10 min， 10000 r/min離心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸銨（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀釋， 用聚四氟乙烯過濾器進(jìn)行過濾， 供UPLCMS/MS測(cè)定。

2.3 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色譜柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：A為甲醇， B為5 mmol乙酸銨0.1%甲酸； 梯度洗脫：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；進(jìn)樣體積10 μL。

摘 要 建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLCMS/MS）測(cè)定雞肉與雞蛋中6種他汀類藥物殘留量的方法。采用BEH C18色譜柱， 以甲醇0.1%甲酸5 mmol乙酸銨為流動(dòng)相， 梯度洗脫分離， 在電噴霧正負(fù)離子模式下以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方式檢測(cè)， 外標(biāo)法定量。6種他汀類藥物檢出限（LOD， S/N=3）和定量限（LOD， S/N=10）分別為0.1～0.5 μg/kg和0.3～2.0 μg/kg， 在1.0～100 μg/kg濃度范圍內(nèi)線性良好， 相關(guān)系數(shù)大于0.9910；雞肉和雞蛋樣品中20 μg/kg水平的加標(biāo)回收率分別為80.9%～97.2%和79.0%～87.2%， 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.3%～10.2%和1.5%～10.7%。本方法應(yīng)用于市場(chǎng)實(shí)際樣品檢測(cè)， 尚未檢出陽(yáng)性樣品。

關(guān)鍵詞 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜； 他汀類藥物； 藥物殘留； 雞肉； 雞蛋

1 引 言

他汀類藥物泛指羥甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶抑制劑， 此類藥物通過競(jìng)爭(zhēng)性抑制內(nèi)源性膽固醇合成限速酶（HMGCoA）還原酶， 阻斷細(xì)胞內(nèi)羥甲戊酸代謝途徑， 使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少， 從而反饋性刺激細(xì)胞膜表面（主要為肝細(xì)胞）低密度脂蛋白受體數(shù)量和活性增加， 降低血清膽固醇水平。因?yàn)樗☆愃幬锞哂薪档脱?、肝臟、主動(dòng)脈中膽固醇功效， 近幾年， 他汀類藥物開始用于降低家禽肌肉和蛋中膽固醇含量， 研究表明， 喂食他汀類藥物能顯著降低家禽血漿和蛋中膽固醇的含量 [1～4 ]。相比較β內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和氟喹諾酮類抗菌素這些經(jīng)常使用并且殘留檢測(cè)也很成熟的獸藥而言 [5，6 ]， 他汀類藥物在動(dòng)物生產(chǎn)方面的應(yīng)用較少， 國(guó)內(nèi)外對(duì)于他汀類藥物在動(dòng)物源性食品中殘留的情況也鮮有報(bào)道。動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)與人類臨床試驗(yàn)表明， 服用他汀類藥物后， 該類藥物可以較長(zhǎng)時(shí)間以原藥形式存在于血漿之中 [7 ]， 且他汀類藥物在高溫、光照情況下也不易分解 [8，9 ]， 因此在食用含有他汀類藥物的禽類產(chǎn)品后， 有可能導(dǎo)致他汀類藥物在人體內(nèi)富集， 由于他汀類藥物在降脂的同時(shí)， 使用不當(dāng)也可能會(huì)影響肝腎功能，也可能引發(fā)橫紋肌溶解癥等 [10～14 ]， 甚至?xí)袑?dǎo)致腎衰竭的風(fēng)險(xiǎn) [15 ]， 這使得建立起一套對(duì)肉蛋制品中他汀類藥物的檢測(cè)技術(shù)勢(shì)在必行。

本研究以雞肉與雞蛋為基質(zhì)， 建立超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLCMS/MS）同時(shí)檢測(cè)雞肉和雞蛋中辛伐他汀Simvastatin（SIM）、洛伐他汀Lovastatin（LOV）、西立伐他汀Cerivastatin（CER）、氟伐他汀Fluvastatin（FLV）、普伐他汀Pravastatin（PRA）以及阿托伐他汀Atorvastatin（ATO）6種他汀類藥物殘留的方法。本方法簡(jiǎn)便、快速， 可滿足其它家禽肉蛋制品中他汀類藥物的檢測(cè)， 可為建立其它動(dòng)物源性食品中他汀類藥物殘留檢測(cè)提供參考。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

TQS超高效液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Waters公司）；MilliQ純水儀（美國(guó)Millipore公司）；高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Sigma公司）；R205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士BCHI公司）；辛伐他汀、洛伐他汀、西立伐他汀鈉、氟伐他汀鈉鹽、普伐他汀鈉、阿托伐他汀鈣（德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作配制

將各標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液， 并根據(jù)需要用甲醇稀釋成適當(dāng)質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液， 于棕色儲(chǔ)存瓶中保存。

2.3 樣品前處理

稱取切碎勻漿過的雞肉樣品或者是100 ℃水煮5 min固態(tài)雞蛋碎末2.000 g 于50 mL 離心管中， 加入10 mL 5%氨化甲醇。渦旋振蕩5 min至充分混勻， 超聲提取10 min， 10000 r/min離心10 min。吸取5 mL上清液， 35 ℃下旋蒸至干。用1 mL乙腈5 mmol乙酸銨（1 ∶ 9， V/V）溶液溶解并稀釋， 用聚四氟乙烯過濾器進(jìn)行過濾， 供UPLCMS/MS測(cè)定。

2.3 色譜條件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18液相色譜柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：A為甲醇， B為5 mmol乙酸銨0.1%甲酸； 梯度洗脫：0～14 min， 90%～5%B；14～17 min， 5%B；17～18 min， 5%～90%B；18～20 min， 90%B。流速0.3 mL/min；進(jìn)樣體積10 μL。