段生慶，李東江，張家華，趙其毅，歐積能，邵慶勇

（1．云南省龍陵縣畜牧工作站，龍陵 678300；2．云南省畜牧獸醫(yī)科學院，昆明 650224）

FSH不同注射方式對龍陵黃山羊超數(shù)排卵效果的影響

段生慶1，李東江2，張家華1，趙其毅1，歐積能1，邵慶勇2

（1．云南省龍陵縣畜牧工作站，龍陵 678300；2．云南省畜牧獸醫(yī)科學院，昆明 650224）

使用美國產(chǎn)FSH，采用減量和等量2種注射方式分別對8只龍陵黃山羊進行超排。結(jié)果表明：減量注射組的排卵數(shù)、回收總數(shù)、可用胚胎數(shù)分別為14.88個±3.87個、13.25枚±4.83枚、12.63枚± 5.37枚，等量注射組排卵數(shù)、回收總數(shù)、可用胚胎數(shù)分別為10.38個±3.46個、9.25枚±2.31枚、8.75枚±2.12枚，減量注射組的排卵數(shù)、回收總數(shù)均顯著高于等量注射組（P<0.05）；兩組間卵巢上卵泡數(shù)、回收率、可用胚胎數(shù)、回收胚胎可用率均無顯著差異（P>0.05）。

FSH；超數(shù)排卵；龍陵黃山羊

超數(shù)排卵后獲得胚胎是開展種質(zhì)（胚胎）資源保存的基礎(chǔ)。山羊超數(shù)排卵常用外源促性腺激素為FSH（促卵泡素），盡管FSH用于牛羊超數(shù)排卵已廣泛使用多年，但山羊超數(shù)排卵還存在許多問題，如激素來源、注射劑量、注射方式、注射部位、超排程序均會影響其超數(shù)排卵效果。龍陵黃山羊是在云南省保山市龍陵縣特殊的自然環(huán)境下，經(jīng)過長期的自然選擇和人工選擇形成的皮肉兼用型地方優(yōu)良品種，具有耐熱耐濕，耐粗放飼養(yǎng)管理，體格大，生長快，繁殖率高，易育肥，屠宰率高、膻味輕，肌肉纖維嫩等特點。為開展龍陵黃山羊胚胎冷凍保存，本試驗用美國產(chǎn)FSH采用不同注射方式對龍陵黃山羊進行超數(shù)排卵處理，研究減量注射和等量注射對龍陵黃山羊超數(shù)排卵效果的影響。

1 材料與方法

1.1 羊只

超數(shù)排卵用羊為飼養(yǎng)在云南省保山市龍陵縣烏木山龍陵黃山羊繁育基地的16只經(jīng)產(chǎn)龍陵黃山羊，年齡2周歲，體重接近，隨機分為A、B兩組，每組8只。公羊為12只龍陵黃山羊成年公羊。

1.2 時間

2013年7 —8月進行超數(shù)排卵處理、胚胎回收和胚胎冷凍保存。

1.3 主要試劑和儀器

前列腺素（PG）：0.2 mg/支，上海市計劃生育研究所生產(chǎn)；孕激素（P）：又叫孕酮，做成硅膠栓（CIDR），每個CIDR含孕激素0.3 g，新西蘭產(chǎn)；垂體促卵泡素（FSH）：美國SIOUX生物化學公司生產(chǎn)，每瓶50 IU，批號3088，使用時用20 mL 0.9%生理鹽水稀釋，每只羊注射總量10 mL（25 IU）；Vade注射液：西鄉(xiāng)長江動物藥品有限責任公司生產(chǎn)；胚胎回收液（PBS液）：美國Sigma公司生產(chǎn)；胚胎保存液（Holding液）：美國Bioniche公司生產(chǎn)；體視顯微鏡：SZX10型，日本Olympus公司生產(chǎn)。

1.4 超數(shù)排卵處理

龍陵黃山羊為“放牧+補飼”飼養(yǎng)方式，為確保試驗羊只空懷，埋栓處理前30 d母羊統(tǒng)一注射PG 0.2 mg，注射PG后強化飼養(yǎng)管理。30 d后用“P+FSH”法對16只龍陵黃山羊進行超數(shù)排卵處理，即在發(fā)情周期中的任意一天埋植第一個CIDR硅膠栓并肌注Vade 5 mL，第一次埋栓當天計算為超排程序的第0天，第8天更換新的CIDR硅膠栓，從第14天開始A組采用減量注射法在4 d內(nèi)肌注FSH 10 mL（2次/d，間隔12 h，每次注射量詳見表1），B組采用等量注射法在4 d內(nèi)肌注FSH 10 mL（2次/d，間隔12 h，每次注射1.25 mL）。在第7次注射FSH時撤栓并肌注Vade 5 mL，撤栓后24 h發(fā)情，母羊發(fā)情后用公羊本交配種，早晚各配種一次，直至母羊不發(fā)情。超數(shù)排卵FSH注射流程詳見表1。

表1 龍陵黃山羊超數(shù)排卵FSH注射流程mL

1.5 胚胎回收

于發(fā)情后的第7天回收胚胎，手術(shù)前空腹24 h，注射

麻醉后保定于專用手術(shù)架，創(chuàng)口刮毛、消毒處理并覆蓋創(chuàng)巾，采用手術(shù)法于腹部乳房下2～4 cm處腹中線部位切口，拉出兩側(cè)子宮和卵巢，統(tǒng)計卵巢上黃體數(shù)量（黃體數(shù)等于排卵數(shù)），用專用胚胎回收管從子宮角處回收發(fā)育到桑椹胚至囊胚期的胚胎，胚胎回收至直徑90 mm培養(yǎng)皿中。

1.6 檢胚及胚胎質(zhì)量鑒定

用口吸管在顯微鏡下從培養(yǎng)皿中找出胚胎，按胚胎形態(tài)、透明帶完整性、內(nèi)細胞團結(jié)構(gòu)對胚胎進行質(zhì)量鑒定后，采樣常規(guī)慢速冷凍法冷凍胚胎，凍后胚胎置于液氮罐中長期保存。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析

統(tǒng)計排卵數(shù)、卵泡數(shù)、回收總數(shù)、回收率、可用胚胎數(shù)、可用胚率，采用t檢驗對試驗數(shù)據(jù)進行分析。

2 結(jié)果與分析

16只龍陵黃山羊經(jīng)超數(shù)排卵處理后全部發(fā)情，超排反應(yīng)率100%。統(tǒng)計試驗組間排卵和胚胎回收效果，結(jié)果顯示：減量注射組的排卵數(shù)、回收總數(shù)均顯著高于等量注射組（P<0.05）；兩試驗組間卵巢上卵泡數(shù)、回收率、可用胚胎數(shù)、回收胚胎可用率均無顯著差異（P>0.05）。結(jié)果詳見表2。

表2 不同方式注射FSH對龍陵黃山羊超排及胚胎回收效果的影響

4 小結(jié)與討論

山羊卵巢上卵泡的生長發(fā)育是一個極其復(fù)雜的動態(tài)過程，從原始卵泡庫的建立到優(yōu)勢卵泡的進一步發(fā)育至排卵或閉鎖退化，經(jīng)歷了募集、選擇、優(yōu)勢化以及成熟排卵/閉鎖等一系列連續(xù)的過程，受各種因子通過內(nèi)分泌、旁分泌、自分泌等多種途徑的嚴密調(diào)控［1］。FSH和LH是主導卵泡發(fā)育的兩個主要因素，地方品種山羊垂體自然分泌的FSH只能保證1～3個卵泡發(fā)育成熟，在發(fā)情前期給母羊注射大量的外源FSH就能誘導大量卵泡發(fā)育成熟，在LH的協(xié)同作用下排出超過正常排卵數(shù)若干倍的卵子［2］。本試驗使用的美國產(chǎn)FSH中含有一定量的LH，所以在母羊發(fā)情后未單獨注射LH，減量注射組第一天注射FSH的量為2.0 mL，而等量注射組為1.25 mL，第一次注射高劑量FSH能誘發(fā)卵巢上更多的原始卵泡募集，在高劑量FSH的持續(xù)作用下，卵巢上更多的卵泡發(fā)育成優(yōu)勢卵泡至排卵；減量注射組在后期FSH注射量小于等量注射組，但排卵數(shù)依然較高，是因為當原始卵泡生長至有腔卵泡后，對FSH的依賴程度降低所致。

本試驗結(jié)果顯示：在肉羊超數(shù)排卵過程中，采用減量注射法注射FSH可獲得較好的排卵和胚胎回收效果。

［1］吳延光，于元松，譚景和．哺乳動物卵泡發(fā)育模式及其調(diào)控機理［J］.動物學雜志，2002，37（6）：83-87．

［2］邵慶勇，成文敏，李衛(wèi)娟，等.山羊活體采卵的理論基礎(chǔ)［J］.中國草食動物，2007，27（6）：57-59.

《中國草食動物科學》雙月刊

《中國草食動物科學》是由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部主管、中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所主辦的國家級科技核心期刊。于2012年4月由《中國草食動物》更名而成?！吨袊菔硠游锟茖W》為美國《化學文摘》（CA）收錄期刊，中國科技核心期刊，中國農(nóng)業(yè)核心期刊，RCCSE中國核心（擴展板）學術(shù)期刊；是中國科學引文數(shù)據(jù)庫（CSCD）、中國科技論文與引文數(shù)據(jù)庫、中國學術(shù)期刊綜合評價數(shù)據(jù)庫（CAJCED）和中國生物學文獻數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計源期刊。

《中國草食動物科學》在原《中國草食動物》的基礎(chǔ)上，立足西部，充分利用研究所的區(qū)位優(yōu)勢，提高期刊核心競爭力，建立適應(yīng)市場經(jīng)濟體制的與國際接軌的全新辦刊理念，及時、準確地反映草食動物科技進步的方向，增強在國內(nèi)外同行中的影響力和競爭力，更好地滿足廣大科研、教學與畜牧生產(chǎn)者的需求，服務(wù)我國節(jié)糧型動物養(yǎng)殖和畜牧業(yè)發(fā)展。

《中國草食動物科學》主要刊登牛、羊、馬、駱駝、鹿、兔、鴨、鵝、駝鳥、魚等各種節(jié)糧型草食動物的最新科研成果和科技成就。主要欄目：遺傳育種，繁殖與生理，營養(yǎng)與飼料，草地與牧草，疾病防控，專論與綜述。

《中國草食動物科學》為雙月刊，大16開，80頁碼，彩色封面，每期定價8.00元，全年48.00元，雙月1日出版。國內(nèi)統(tǒng)一刊號：CN 62-1206/Q，國際標準刊號：ISSN 2095-3887,郵發(fā)代號:54—57,國外代號:BM5133。全國郵局和本刊編輯部均可訂閱。

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2013-11-27

國家現(xiàn)代肉羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-39）

段生慶（1969-），男，畜牧師。

邵慶勇（1975-），男，研究員。