張楠淇，吳迪，陳金鸞，李平亞

(吉林大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春 130021)

狗舌草[(Tephroseriskirilowii(Turcz.ex DC.)Holub.]是菊科(Asteraceae)狗舌草屬(Tephroseris)多年生草本植物。性寒，味苦，微甘，全草有小毒。多分布于我國(guó)東北以至華東、西南各地，俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)、朝鮮、日本也有分布。狗舌草普遍生長(zhǎng)于草地山坡、塘邊及路邊濕地，海拔250m～2000m處[1]。根及全草入藥。據(jù)《中藥大辭典》記載，其具有清熱、利水、殺蟲等功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，狗舌草有較好的抗?jié)兒涂鼓[瘤作用[2]，并具有多種活性成分。本文通過(guò)整理國(guó)內(nèi)、外研究報(bào)道，對(duì)狗舌草的化學(xué)成分和生物活性研究進(jìn)行了歸納總結(jié)，為其進(jìn)一步深入研究和開發(fā)利用提供參考。

1 化學(xué)成分

國(guó)內(nèi)、外研究表明，狗舌草屬植物主要含有雙稠吡咯啶生物堿。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究人員開始關(guān)注狗舌草的其他化學(xué)成分。發(fā)現(xiàn)狗舌草中主要化學(xué)成分包括黃酮類、多種雙稠吡咯生物堿類、揮發(fā)油類和蛋白質(zhì)類等。

1.1 黃酮類化合物

陳進(jìn)軍等[3]用分項(xiàng)試管預(yù)試法和圓形濾紙層析法對(duì)狗舌草的化學(xué)成分進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，狗舌草中含有黃酮類化合物。

邱燕燕等[4～6]對(duì)狗舌草中的總黃酮進(jìn)行了研究，認(rèn)為其含有黃酮類、黃酮醇類及異黃酮。同時(shí)采用了單因素和正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法，確定了狗舌草中總黃酮的最佳提取工藝，即提取溫度為80℃、料液比為1∶10、提取時(shí)間為3h、提取次數(shù)2次。

司紅麗等[7]對(duì)狗舌草中黃酮進(jìn)行提取和毒性試驗(yàn)，再次驗(yàn)證了狗舌草中含有黃酮類化合物，且確定其主要為黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮醇類和異黃酮類，并測(cè)定其黃酮類化合物含量為5.71%。狗舌草總黃酮的LD50為1 392.52mg/kg±94.62mg/kg，屬于中等毒性。

1.2 生物堿類

Miranda C L等[8～10]報(bào)道，狗舌草屬植物主要成分為多種雙稠吡咯啶生物堿。陳進(jìn)軍等[11]發(fā)現(xiàn)，狗舌草中雙稠吡咯啶生物堿的含量早花期為0.174%，與Buckmaster等[12]報(bào)道的結(jié)果0.181%相近；盛花期為0.104%，與Alpin[13]報(bào)道的結(jié)果0.107%相似。由此證明，盛花期狗舌草中雙稠吡咯啶生物堿含量明顯低于早花期。

王建華等[14]利用溶劑萃取法從狗舌草中得到總生物堿，并通過(guò)色譜和波譜技術(shù)對(duì)總生物堿進(jìn)行了分離和鑒定。通過(guò)TLC及GC-MS判斷發(fā)現(xiàn)，狗舌草中至少含有4個(gè)雙稠吡咯啶生物堿，并確定了這4個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，分別為千里光寧、千里光非靈、全緣千里光堿和當(dāng)歸酰天芥菜定。當(dāng)歸酰天芥菜定水解產(chǎn)物之一經(jīng)TLC分離得到化合物為天芥菜定。

1.3 揮發(fā)油類

周玉順等[15]采用水蒸氣蒸餾法從狗舌草中提取到揮發(fā)油，并采用GC-MS聯(lián)用儀對(duì)揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行分析，對(duì)鑒定出的21種化合物歸類分析發(fā)現(xiàn)，不飽和烯類的種類最多(共13種)，其次是苯類、烷類、醇類、薁類、酸類、酮類、酯類。主要揮發(fā)油成分為(E)-7，11-二甲基-3-亞甲基-1，6，10-十二碳三烯(27.37%)、[3aS-(3aα，3bβ，4β，7α，7aS*)]-八氫-7-甲基-3-亞甲基-4-(1-甲基乙基)-1H-環(huán)戊(1，3)環(huán)丙(12)苯(25.25%)、2，6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯基)-二環(huán)(3.1.1)庚-2-烯(18.36%)、石竹烯(10.27%)、α-金合歡烯(6.50%)等。

1.4 蛋白質(zhì)類

黃國(guó)文[16]用堿提酸沉法提取出狗舌草中的蛋白質(zhì)，并確定了提取狗舌草中蛋白質(zhì)的最佳工藝條件，發(fā)現(xiàn)料液比為1∶35，pH 8.5，溫度45℃，時(shí)間20min；當(dāng)提取液在pH為6時(shí)，蛋白沉淀率為67.5%，即為蛋白質(zhì)的最佳提取條件。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，影響狗舌草蛋白質(zhì)提取率的主次因素依次為浸提溫度>浸提時(shí)間>料液比>水提液pH。

1.5 其他物質(zhì)

白麗明等[17]采用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜等方法對(duì)狗舌草進(jìn)行分離純化，根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得到的理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)來(lái)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，從狗舌草中分離并鑒定了5種化合物，分別為正二十六烷醇、β-谷甾醇、白樺脂酸、對(duì)羥基苯乙酮和東莨菪內(nèi)酯。這5個(gè)化合物均為首次從狗舌草中得到。

2 生物活性

《全國(guó)中草藥匯編》記載狗舌草可作藥用，具有清熱解毒、利尿等功效，用于肺膿瘍、尿路感染、小便不利、白血病、口腔炎、癤腫等。民間采集和利用狗舌草用于治療發(fā)熱、貧血、肝脾和淋巴結(jié)腫大?，F(xiàn)代藥理學(xué)對(duì)其提取物的活性的大量研究發(fā)現(xiàn)，其提取物具有抗淋巴性白血病、抗腫瘤和抗癌等活性。但狗舌草中的生物堿具有毒性，盡管含量很低，但應(yīng)該注意控制和防護(hù)。

2.1 抗淋巴性白血病作用

孔慶波等[18]利用淋巴性白血病L1210細(xì)胞荷瘤DBA/2小鼠為模型，研究狗舌草提取物對(duì)供試小鼠生存期的影響發(fā)現(xiàn)，狗舌草60%乙醇提取物對(duì)供試小鼠的生存期有延長(zhǎng)作用，可將其作為進(jìn)一步研究抗淋巴性白血病的材料。

陳進(jìn)軍等[19]對(duì)狗舌草提取物進(jìn)行體內(nèi)抗淋巴性白血病效果研究，發(fā)現(xiàn)狗舌草60%乙醇提取物與單豬屎豆堿和懈皮素在體內(nèi)抑制淋巴性白血病方面具有一致性。陳進(jìn)軍等[20]報(bào)道了利用淋巴性白血病L1210細(xì)胞，以單豬屎豆堿、槲皮素和環(huán)磷酰胺為參照，研究狗舌草60%乙醇提取物對(duì)L1210細(xì)胞的體外作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：一定劑量的狗舌草60%乙醇提取物具有明顯的體外抑制淋巴性白血病L1210細(xì)胞的作用，且這種作用具有明顯的劑量依賴性；并且狗舌草60%乙醇提取物在體外對(duì)L1210細(xì)胞的細(xì)胞毒性較小。司紅麗等[21]研究狗舌草總黃酮對(duì)L1210細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞周期的影響發(fā)現(xiàn)，狗舌草中的總黃酮呈濃度依賴性抑制L1210細(xì)胞生長(zhǎng)，對(duì)L1210細(xì)胞的增殖具有顯著抑制作用，從而阻斷了細(xì)胞周期的正常發(fā)展。王建娜[22]研究狗舌草總黃酮對(duì)L1210細(xì)胞體外生長(zhǎng)和細(xì)胞周期的影響，結(jié)果表明，狗舌草總黃酮對(duì)L1210細(xì)胞體外生長(zhǎng)、增殖有抑制作用，對(duì)細(xì)胞周期有阻滯作用，顯示出了抗淋巴性白血病的作用。

2.2 抗腫瘤作用

狗舌草含有以天芥菜定為結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的雙稠吡咯啶生物堿，預(yù)示其可能有抗腫瘤活性[23]。馬志剛等[24]采用多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞株與狗舌草提取物共同培養(yǎng)，電鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)，研究狗舌草提取物對(duì)U266細(xì)胞的細(xì)胞凋亡作用及其機(jī)制。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，狗舌草提取物對(duì)人類骨髓瘤細(xì)胞U266有細(xì)胞凋亡作用，且存在劑量依賴關(guān)系；并且，可以改變U266細(xì)胞的細(xì)胞周期[25]，其可能的機(jī)制有2種：①動(dòng)員細(xì)胞進(jìn)入周期，在S期、G2/M期誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡/殺傷細(xì)胞；②將細(xì)胞阻滯在S期、G2/M期。具體分子機(jī)制需進(jìn)一步研究。徐俊卿[26]等則將U266細(xì)胞株與狗舌草提取物共同培養(yǎng)，采用CCK-8試劑檢測(cè)細(xì)胞毒作用，結(jié)果表明，體外實(shí)驗(yàn)中狗舌草提取物對(duì)人類骨髓瘤細(xì)胞U266有細(xì)胞毒作用，且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，其半數(shù)抑制(質(zhì)量)濃度約為3.2mg/L。

2.3 抗癌作用

白麗明等[17]從狗舌草中分離得到白樺脂酸，并進(jìn)行了其對(duì)人體肺癌細(xì)胞、人體肝癌細(xì)胞毒活性試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，白樺脂酸對(duì)人體肺癌細(xì)胞VA-13、人體肝癌細(xì)胞HepG2表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒活性，其半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為12.1μmol/L和22.2μmol/L，表明狗舌草具有一定的抗癌作用。

2.4 毒性研究

Cheeke P R[27]報(bào)道了狗舌草中含有數(shù)種致癌的雙稠吡咯啶生物堿。

陳進(jìn)軍[28]用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的狗舌草飼料喂豬144d，在短短近5個(gè)月的試驗(yàn)中，豬的肝臟已出現(xiàn)結(jié)締組織和膽管大量增生，并形成許多假小葉，已顯示出肝硬化的趨勢(shì)。并且出現(xiàn)了肝細(xì)胞的異形性，例如巨肝細(xì)胞、胞漿淡染、胞漿內(nèi)陷等癌變的特征。所以，可以初步推斷，狗舌草對(duì)動(dòng)物有肝毒性，能引起肝硬化和原發(fā)性肝癌，而且二者之間可同時(shí)或交叉發(fā)生。

王躍虎等[29]對(duì)狗舌草中生物堿LD50進(jìn)行測(cè)定及毒性成分分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)狗舌草有較大的毒性，其原因可能與狗舌草中存在具有大環(huán)雙酯結(jié)構(gòu)的千里光寧、千里光非靈和全緣千里光堿有關(guān)。盡管狗舌草中生物堿含量很低，但其毒性很大，LD50為74.52mg/kg，屬于高毒范圍[30]，應(yīng)注意對(duì)其控制和防除。

3 結(jié)語(yǔ)

狗舌草具有廣泛的藥理作用和臨床應(yīng)用價(jià)值，具有巨大的藥用潛力，值得科學(xué)界特別注意，但目前對(duì)其研究尚少。隨著現(xiàn)代分離技術(shù)的提高，逐漸從狗舌草中分離出多種化合物，為其開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)，具有現(xiàn)實(shí)意義。為了將狗舌草中分離到的化合物開發(fā)成現(xiàn)代藥物來(lái)控制各種疾病，有必要對(duì)其生物活性、作用機(jī)制、藥物動(dòng)力學(xué)以及臨床試驗(yàn)之后的毒副作用進(jìn)行更加深入地研究。

[1]陳藝林.中國(guó)植物志:第77卷第1分冊(cè)[M].北京:科學(xué)出版社,1999:155-158.

[2]傅坤俊.黃土高原植物志[M].北京:科學(xué)出版社,1987:350-356.

[3]陳進(jìn)軍.狗舌草提取物對(duì)L1210細(xì)胞的作用及毒性研究[D].陜西:西北農(nóng)林科技大學(xué),2001.

[4]邱燕燕,牛泱平.狗舌草中總黃酮的提取工藝研究[J].浙江化工,2009,40(10):5-7.

[5]李巧玲.黃酮類化合物提取分離工藝的研究進(jìn)展[J].山西食品工業(yè),2003,(4):6-7.

[6]Hung CP,Park JB,BaeKH.Pbarmas cological effcets of methanolie extract from the root of Scute1lariabaicalensis and its flavonoids on human gingival fibroblast[J].PlantaMed，1995,61(2):150.

[7]司紅麗,王建華,王躍虎.狗舌草總黃酮的提取及其毒性試驗(yàn)[J].畜牧與獸醫(yī),2003,35(7):9-10.

[8]Miranda C L,Cheeke P R,Schmtiz J A.Toxicity ofSeneciojacobaeain rats[J].Toxicol Appl Pharmacol,1980,59:432.

[9]Mclean E K.The toxic actions of pyrrolizidine alkaloids[J].Pharmacol Rev,1976,22:429-483.

[10]Huxtable R J.Activation and pulmonary toxicity of pyrrolizidine alkaloids[J].Pharmacol Ther,1990,47:371-381.

[11]陳進(jìn)軍,王建華.早花期和盛花期狗舌草中雙稠吡咯啶生物堿對(duì)大白鼠的毒性試驗(yàn)[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,1998,28(10):8-9.

[12]Buckmaster G W.Pyrrolizidine alkaloid poisoning in rats:protective effects of dietary cysteine[J].Ani Sci,1976,3(2):464-473.

[13]Alpin R T,Mattocks A R.Poisonous alkaloids in the body tissues of the cinnibar moth[J].Nature,1968,219:747.

[14]王建華,王躍虎,司紅麗.狗舌草生物堿成分分析[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2004,32(1):93-95.

[15]周玉順,陳利軍,馬俊義,等.狗舌草揮發(fā)油化學(xué)GC-MS分析[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,50(15):3194-3196.

[16]黃國(guó)文.狗舌草蛋白提取工藝的研究[J].輕工科技,2013,(11):26.

[17]白麗明,原偉偉,于海霞.狗舌草化學(xué)成分及其細(xì)胞毒活性研究[J].化工時(shí)刊,2012,26(10):28-30.

[18]孔慶波,陳進(jìn)軍,王建華.狗舌草化學(xué)成分及其抗淋巴性白血病效果試驗(yàn)[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2004,20(4):9-11.

[19]陳進(jìn)軍,王建華,史志誠(chéng).狗舌草提取物體內(nèi)抗淋巴性白血病效果研究[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,29:92-96.

[20]陳進(jìn)軍,王建華,史志誠(chéng).狗舌草提取物對(duì)L1210細(xì)胞的體外作用研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2003,19(6):29-32.

[21]司紅麗,王建娜,胡延春,等.狗舌草總黃酮對(duì)L1210細(xì)胞的體外作用研究[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志,2009,(S):234-238.

[22]王建娜,司紅麗.狗舌草總黃酮對(duì)L1210細(xì)胞的體外作用研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2010,37(9):1788-1790.

[23]Kelley H A,Robins D J.Pyrrolizidine alkaloids fromLindelofialongiflora[J].Fitoterapia,1990,61(1):89-90.

[24]馬智剛,張曉錄,范小莉,等.狗舌草提取物對(duì)多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞株細(xì)胞凋亡的研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2010,28(6):1278-1280.

[25]馬智剛,王笑蕾,秦友平,等.狗舌草提取物對(duì)多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞周期的作用[J].山西醫(yī)藥雜志,2012,41(11):1100.

[26]徐俊卿,馬智剛,張曉錄,等.狗舌草提取物對(duì)多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞株細(xì)胞毒作用研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2011,39(1):11-12.

[27]Cheeke P R.Toxicity and metabolism of pyrrolizidine alkaloids[J].Ani Sci,1988,66:2343-2350.

[28]陳進(jìn)軍,王建華,薛登民.豬狗舌草中毒的病理學(xué)研究[J].西北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1999,27(2):53-57.

[29]王躍虎,王建華,司紅麗.狗舌草生物堿LD50測(cè)定及毒性成分分析[J].飼料工業(yè),2003,24(5):34-35.

[30]魯超.實(shí)驗(yàn)毒理學(xué)基礎(chǔ)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1987:117-118.