李靜，聶繼云，毋永龍

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所，遼寧興城125199）

Folin-Ciocalteus法測(cè)定馬鈴薯中的總多酚

李靜，聶繼云*，毋永龍

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所，遼寧興城125199）

本文建立了紫外分光光度計(jì)法準(zhǔn)確測(cè)定馬鈴薯中的總多酚。對(duì)影響Folin-Ciocalteus法測(cè)定馬鈴薯中總多酚含量的主要因素進(jìn)行了研究，確定了在1.0 mL樣品提取液或標(biāo)液中依次加入5.0 mL水、1.0 mL顯色劑和3.0 mL 7.5%碳酸鈉溶液，搖勻，顯色2 h后在765 nm測(cè)定吸光度的最佳檢測(cè)條件，并對(duì)馬鈴薯樣品進(jìn)行了測(cè)定，精密度為7.7%，回收率為100%～108%。本方法適用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室馬鈴薯總多酚的測(cè)定。

馬鈴薯；總多酚；Folin-Ciocalteus法

馬鈴薯的多酚含量較高，在加工過(guò)程中，馬鈴薯中含有的多酚類物質(zhì)與多酚氧化酶（PPO）作用氧化成醌，在進(jìn)一步縮合成黑色素，引起褐變，影響制品的風(fēng)味和營(yíng)養(yǎng)[1,2]，因此在加工和育種中需要對(duì)多酚含量進(jìn)行測(cè)定和監(jiān)控。常用的植物中多酚測(cè)定方法有皮粉法、高錳酸鉀滴定法、酒石酸亞鐵螯合法、香草醛法、正丁醇-鹽酸法、Folin-酚法、鐵氰化鉀分光光度法（PB法）和液相色譜法等[3-10]。測(cè)定蔬菜中總多酚常采用Folin－酚法，包括Folin-Denis法（即FD法）和Folin-Ciocalteus法（即FC法），F(xiàn)C法是FD法的改進(jìn)方法，它是在FD試劑中加入鋰鹽，克服了FD試劑的不穩(wěn)定性，較之更為靈敏[7,8]。雖已用于馬鈴薯中總多酚的測(cè)定[9,10]，但未見對(duì)其最佳測(cè)定的條件篩選，不利于馬鈴薯中總多酚的準(zhǔn)確測(cè)定。本試驗(yàn)對(duì)用Folin-Ciocalteus法測(cè)定馬鈴薯中總多酚含量的測(cè)定條件進(jìn)行了研究，篩選了最佳測(cè)定條件，獲得了很好的精密度和準(zhǔn)確度，為馬鈴薯中總多酚的準(zhǔn)確測(cè)定提供了一定的參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 馬鈴薯樣品

市售馬鈴薯，洗凈晾干，取可食部分切碎，液氮冷凍研磨，-80℃冷凍備用。

1.1.2 試劑

鎢酸鈉、鉬酸鈉、硫酸鋰、磷酸、鹽酸、溴水和乙醇為分析純。一水合沒食子酸標(biāo)樣，Sigma－Aldrich公司。水為蒸餾水。

1.1.3 試劑的配制

FC顯色劑：稱取50 g±0.01 g鎢酸鈉(Na2WO4· 2H2O)，12.5 g±0.01 g鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)，用350 mL蒸餾水溶于1 000 mL回流瓶中，加入25 mL磷酸(H3PO4≥85%)及50 mL濃鹽酸，充分混勻，小火加熱回流2 h，再加入75 g硫酸鋰，25 mL蒸餾水，0.5 mL溴水，然后開口繼續(xù)沸騰15 min，冷卻后定容500 mL，過(guò)濾，置于棕色瓶中，用時(shí)加入1倍蒸餾水。

7.5 %碳酸鈉溶液：稱取37.5 g±0.01 g無(wú)水碳酸鈉（Na2CO3）溶于250 mL溫水中，混勻，冷卻，稀釋至500 mL。室溫下至多保持1個(gè)月。

一水合沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.110 g± 0.001 g一水合沒食子酸，用70%乙醇溶液溶解并定容到100 mL容量瓶中，此溶液一水合沒食子酸濃度為1 000 mg/L；用5 mL分度吸管從此標(biāo)準(zhǔn)溶液吸取0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL到100 mL容量瓶中，用70%乙醇定稀釋到刻度線，即相當(dāng)于0.0,10,20,30, 40,50 μg/mL的一水合沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.1.4 主要儀器

紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、天平（日本島津）、冷凍研磨機(jī)（美國(guó)SPEX）、恒溫水浴鍋。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 馬鈴薯中總多酚的提取

取馬鈴薯可食部分，液氮冷凍后，用冷凍研磨機(jī)研磨成粉末狀，稱取樣品粉末5 g，精確到0.01 g，用40 mL 70%乙醇溶液洗入50 mL棕色離心管中，30℃超聲30 min，9 000 r/min離心5 min，上清液倒入100 mL容量瓶中，殘?jiān)儆?0%乙醇溶液35 mL重復(fù)提取1次，合并2次上清液，用70%乙醇溶液定容，備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

用分度吸管從0.0，10，20，30，40，50 μg/ mL的一水合沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液系列中吸取1.0 mL，分別加5 mL水，1 mL FC顯色劑，3 mL 7.5%碳酸鈉溶液，顯色，此時(shí)相當(dāng)于0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 μg/mL的一水合沒食子酸。放置2 h后，在765 nm波長(zhǎng)下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。

圖1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 1Standard curve of gallic acid

1.2.3 樣品的測(cè)定

吸取1.0 mL樣品溶液，分別加入5.0 mL水，1 mL FC顯色劑，3 mL 7.5%碳酸鈉溶液，顯色，放置2 h后，在765 nm波長(zhǎng)下測(cè)定樣品的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線分別求出樣品中總多酚的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 顯色波長(zhǎng)的選擇

對(duì)5.0 mg/L沒食子酸和馬鈴薯樣品提取液在相同條件下顯色，顯色后分別進(jìn)行光譜掃描（圖2），從圖2可見，樣品提取物和沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品具有相同的光譜圖，說(shuō)明，樣品提取液同標(biāo)準(zhǔn)品是一類物質(zhì)。樣品提取物和沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品顯色后的在765 nm處有最大吸收峰，因此選擇測(cè)定波長(zhǎng)為765 nm。

圖2 沒食子酸和馬鈴薯樣品光譜掃描圖Figure 2Scan of gallic acid solutionand extraction of potato

2.2 顯色時(shí)間的選擇

對(duì)5.0 mg/L沒食子酸標(biāo)樣和馬鈴薯樣品提取液顯色后進(jìn)行時(shí)間掃描（圖3），從圖3可見，標(biāo)樣及樣品提取液在顯色初期吸光度變化較大，而在2 h（120 min）后顯色較穩(wěn)定，因此選擇2 h后比色，測(cè)定，減小誤差。

2.3 方法回收率試驗(yàn)

對(duì)馬鈴薯進(jìn)行2個(gè)不同梯度的添加，每個(gè)梯度平行測(cè)定5次，回收率在100%～108%范圍內(nèi)（表1），說(shuō)明此方法具有較好的準(zhǔn)確性。

2.4 馬鈴薯中總多酚含量的測(cè)定

圖3 沒食子酸和馬鈴薯顯色穩(wěn)定性Figure 3Standing time of coloring by FC method ingallic acid solution and potato

表1 馬鈴薯的添加回收率Table 1Result of recovery experimentation in potatoes

對(duì)馬鈴薯進(jìn)行平行測(cè)定，各9次，平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.7%（表2），說(shuō)明該方法測(cè)定結(jié)果具有較好的精密度。

3 討論

利用紫外可見分光光度計(jì)Folin－酚顯色法測(cè)定馬鈴薯中總多酚時(shí)，測(cè)定的最佳波長(zhǎng)和顯色時(shí)間往往影響檢測(cè)的靈敏度和測(cè)定的穩(wěn)定性。本文通過(guò)對(duì)馬鈴薯提取液和標(biāo)準(zhǔn)品提取液的波長(zhǎng)掃描篩選出馬鈴薯的最佳檢測(cè)波長(zhǎng)為765 nm與周勝男和陸寧[9]測(cè)定馬鈴薯中總多酚時(shí)選擇的測(cè)定波長(zhǎng)相同，而同曹艷萍等[10]檢測(cè)波長(zhǎng)779 nm有所不同。本試驗(yàn)通過(guò)馬鈴薯樣品提取液和標(biāo)準(zhǔn)品顯色后的穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)，顯色穩(wěn)定時(shí)間為2 h以上，這與周勝男和陸寧[9]以及曹艷萍等[10]選擇的顯色1 h后測(cè)定均有所不同。

通過(guò)對(duì)Folin－Ciocalteus顯色法測(cè)定馬鈴薯中總多酚測(cè)定條件的摸索，確定馬鈴薯中總多酚的測(cè)定最佳測(cè)定條件為使用70%乙醇提取馬鈴薯中的總多酚，吸取1.0 mL樣品提取溶液，分別加入5.0 mL水，1 mL FC顯色劑，3 mL 7.5%碳酸鈉溶液，顯色，放置2 h后，在765 nm波長(zhǎng)下測(cè)定，此方法準(zhǔn)確，回收率為100%～108%；精密度高，變異系數(shù)僅為7.7%，完全適用于馬鈴薯中總多酚的測(cè)定。

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Determination of Total Polyphenols in Potato Using Folin-Ciocalteus Method

LI Jing,NIE Jiyun＊,WU Yonglong
(Institute of Pomology,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Xingcheng,Liaoning 125199,China)

An improved UV spectrophotometry method was developed for analysis of total polyphenols in potato. Folin-Ciocalteus method for total polyphenols determination in potato was studied.After a series of optimization experiments, thebestdeterminationprocedureofFolin-Ciocalteusmethodwasputforward,thatis,5.0mLwater,1.0mLcolorationreagent, and 3.0 mL7.5%sodium carbonate solution were added orderly into 1.0 mLextraction of sample or standard gallic acid,then blended,andmeasuredat765nmaftercolorationfor2h.Underthisprocedure,relativestandarddeviationofthemethodwas 7.7%,and average recovery rate was 100%-108%.This method is applicable to conventional laboratory determination of total polyphenolsinpotato.

potato;total polyphenols;Folin-Ciocalteus

S532

B

1672－3635（2014）01-0027-03

2013-07-10

農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目(2013300）。

李靜（1972-），女，副研究員，從事食品品質(zhì)與營(yíng)養(yǎng)檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)研究。

聶繼云，研究員，博士，主要從事果品品質(zhì)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究，E-mail:jiyunnie@163.com。