吳海燕

（吉林省遼源市東遼縣人民醫(yī)院,吉林 遼源 136200）

龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別方法改進(jìn)分析

吳海燕

（吉林省遼源市東遼縣人民醫(yī)院,吉林 遼源 136200）

目的對(duì)龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別方法的改進(jìn)進(jìn)行分析探討，為今后的研究工作提供可靠的參考依據(jù)。方法采用醇提法對(duì)樣品進(jìn)行處理，經(jīng)10%硫酸乙醇進(jìn)行顯色，在365nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢視，同時(shí)對(duì)梔子、龍膽、地黃、甘草展開薄層色譜鑒別；采取出提法處理樣品，在254nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢視，對(duì)柴胡、當(dāng)歸進(jìn)行薄層色譜鑒別。結(jié)果改進(jìn)的方法具有操作簡(jiǎn)單、斑點(diǎn)完全分離、顯示清晰等優(yōu)勢(shì)。結(jié)論上述改進(jìn)方式相對(duì)于《中國(guó)藥典（一部）》2010年版中所示方法更加適合龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別，值得關(guān)注并推廣。

龍膽瀉肝丸；薄層色譜鑒別；改進(jìn)；《中國(guó)藥典（一部）》2010年版

在中醫(yī)古方《醫(yī)方集解》中早有記載龍膽瀉肝湯,其方劑組成為:龍膽、柴胡、梔子、黃岑、炙甘草等10味藥材,對(duì)肝膽實(shí)火、三焦?jié)駸峋哂辛己玫闹委熜Ч?臨床應(yīng)用十分廣泛,臨床療效顯著,目前臨床應(yīng)用的劑型較多,以丸劑最為常見。在《中國(guó)藥典（一部）》[1]2010年版中龍膽瀉肝丸薄層鑒別的前處理相對(duì)復(fù)雜繁瑣,在日?？焖俦O(jiān)督檢驗(yàn)中不適合,本次研究中對(duì)龍膽瀉肝丸的薄層色譜鑒別方法進(jìn)行了改進(jìn),現(xiàn)匯報(bào)結(jié)果如下。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

本次實(shí)驗(yàn)中所需儀器包括:Reprostar 3型薄層數(shù)碼成像系統(tǒng),940型TLC紫外燈箱,TLC pLate HeaterⅢ薄層加熱板；F80 型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)；XT型電子天平；KQ2200B型超聲清洗儀器；HH-6型恒溫水浴鍋、GF254薄層板等。

1.2 實(shí)驗(yàn)試藥

三個(gè)不同常見龍膽瀉肝丸、龍膽苦苷對(duì)照品、梔子苷對(duì)照品、梓醇對(duì)照品、柴胡皂苷d、甘草對(duì)照藥材、當(dāng)歸對(duì)照藥材,均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；所需試劑和試藥均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 龍膽、梔子、甘草、地黃的薄層鑒別

取3個(gè)不同常見的龍膽瀉肝丸樣品各10 g,研細(xì)后加入40 mL石油醚,在60～90 ℃條件下超聲處理20 min,靜置晾涼后過濾,在藥渣中加入30 mL甲醇超聲處理30 min,靜置晾涼后過濾,將濾液濃縮至1 mL作為供試品；按照同樣方法自制陰性對(duì)照品溶液；取梓醇對(duì)照品精密稱定后加入甲醇,制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作為對(duì)照品溶液；取梔子苷對(duì)照品精密稱定,加甲醇制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作為對(duì)照品溶液；取龍膽苦苷對(duì)照品精密稱定,加入甲醇制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作為對(duì)照品溶液；取甘草對(duì)照藥材粉末0.5 g,加入5 mL的甲醇后超聲處理10 min,取濾液作為對(duì)照藥材溶液,以薄層色譜法[2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB][2]試驗(yàn)為依據(jù),吸取上述所制溶液各10 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上,展開劑為乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶0.3）為展開劑,展開,取出,晾干,以10%硫酸乙醇作為顯色劑,在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,在紫外光燈（365 nm）下觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn),上述所制的供試品溶液色譜中,在梔子苷對(duì)照品、梓醇對(duì)照品、甘草對(duì)照藥材、龍膽苦苷對(duì)照品色譜相應(yīng)位置出現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2 柴胡、當(dāng)歸的薄層色譜鑒別

取3個(gè)常見的龍膽瀉肝丸樣品,研細(xì)后精密稱定5 g,加入30 mL甲醇后超聲處理30 min,靜置晾涼后過濾,濾液濃縮至1 mL后作為供試品溶液,按照同樣方法自制陰性對(duì)照品溶液；取柴胡皂苷d對(duì)照品,精密稱定后加入甲醇,制成每1 mL含0.5 mg的對(duì)照品溶液；取當(dāng)歸對(duì)照藥材粉末,精密稱定0.5 g,加入5 mL甲醇超聲處理10 min后靜置晾涼后過濾,取濾液作為對(duì)照藥材溶液。以薄層色譜法[2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)為依據(jù),吸取上述所制溶液各10 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上,展開劑為氯仿-甲醇（8.5∶1.5）,展開,取出,晾干,在紫外光燈（254 nm）下觀察。結(jié)果觀察到:供試品溶液色譜中,與柴胡皂苷d對(duì)照品溶液色譜和當(dāng)歸對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。

3 討 論

近幾年中醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展十分迅速,使得中藥現(xiàn)代研究逐漸熱門化。目前對(duì)中藥有效成分的研究不斷深入,紫外分光光度法、高效液相色譜法、薄層色譜法等技術(shù)在中藥研究工作中發(fā)揮了重要作用,得到了廣泛的應(yīng)用[3]。由于受到高效液相色譜法的啟示,通過對(duì)已有文獻(xiàn)報(bào)道薄層色譜法的篩選,對(duì)同時(shí)分離、鑒別多種中藥有效成分的薄層色譜法進(jìn)行尋找可謂一次新型和有意義的常識(shí),使得薄層色譜法對(duì)相似化合物同時(shí)進(jìn)行鑒別的研究更加深入。本次實(shí)驗(yàn)中是對(duì)全信息薄層鑒別理論付諸實(shí)踐的一種新的常識(shí),全信息薄層鑒別理論期望可以使薄層板的多層次、多成分分離檢出性能得以充分發(fā)揮[4]。在對(duì)硅膠GF254薄層板進(jìn)行展開后,首先在365 nm紫外光燈下對(duì)具熒光的成分進(jìn)行觀察,而后放置在254 nm紫外光燈下對(duì)熒光熄滅作用的成分進(jìn)行觀察,最后放置在日光下對(duì)各種帶顏色的成分進(jìn)行觀察,通過增熒光處理后,再次放置在365 nm紫外光燈下對(duì)增熒光的成分或者是254 nm紫外光燈下的熒光熄滅成分進(jìn)行觀察,最后與顯色劑反應(yīng)顯色后,再次在365 nm紫外光燈下觀察反應(yīng)后呈現(xiàn)熒光的成分,日光下對(duì)反應(yīng)顯色后的各種顏色成分進(jìn)行觀察[6]。該方法可以采用1塊薄層板展開1次,盡管性質(zhì)不同的化學(xué)成分會(huì)存在重疊現(xiàn)象,但是其在各自的檢視條件下可以互不干擾,能夠表現(xiàn)出各自的斑點(diǎn)特征,同時(shí)收集了多個(gè) 層次的不同信息量[7]。本次實(shí)驗(yàn)中在同一展開條件下可對(duì)龍膽、梔子、甘草、地黃以及各樣品的對(duì)照品進(jìn)行展開分層處理,1塊薄層板上承載的信息量增加,這對(duì)于今后的檢驗(yàn)、監(jiān)督等工作均具有重要意義。相對(duì)于《中國(guó)藥典（一部）》2010年版中龍膽瀉肝丸薄層鑒別方法而言,該方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果清晰等優(yōu)勢(shì)十分突出。通過本次研究我們體會(huì)到,薄層色譜法在鑒別方面相對(duì)于纖維鑒別更加容易掌握,且人才培養(yǎng)的周期較短,可以適應(yīng)目前藥學(xué)檢驗(yàn)、監(jiān)督工作人力資源短缺的現(xiàn)狀,滿足了研究需求,同時(shí)使薄層色譜鑒別技術(shù)的發(fā)展得到了一定的推動(dòng)作用,值得對(duì)其給予關(guān)注并推廣[8-9]。

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R286；R284.1

B

1671-8194（2014）25-0093-02