梅之南，尹雪霏，丁 昕，熊 慧，鄭亞男

(中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢 430074)

獨(dú)一味[Lamiophlomisrotata(Benth.) Kudo]為唇形科獨(dú)一味屬唯一物種，多年生草本植物，其性微寒，味苦，有小毒，有活血化瘀、消腫止痛、抗菌消炎、扶正固本和提高免疫力之功效[1].它是青藏高原特有，廣泛分布于西藏，在青海、甘肅、四川和云南亦有分布.獨(dú)一味中主要有效成分為環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類和苯乙醇苷類化合物[2]，為了尋找新型抗炎鎮(zhèn)痛類活性物質(zhì)，進(jìn)一步明確其藥效基礎(chǔ)，本文對(duì)其地上部分的乙酸乙酯部位進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究.

1 材料與方法

1.1 儀器和試藥

高效液相色譜儀(Ultimate 3000半制備型, 戴安中國(guó)有限公司)，分析型高效液相色譜柱(HC-C18, 4.6 mm×250.0 mm, 5 μm, Agilent)，制備型高效液相色譜柱(5U-C18-100A,10.0 mm×250.0 mm, 5 μm, Luna)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE-52型, 上海亞榮生化儀器廠)，循環(huán)水真空泵(SHZ-DIII型, 鞏義市子華儀器有限公司)，三用紫外分析儀(ZF-I型, 上海顧村電光儀器廠)，摩爾超純水機(jī)(分析型1015a, 上海摩勤科學(xué)儀器有限公司)，薄層色譜硅膠板G254、100～200目層析硅膠、200～300目層析硅膠(青島海洋化工廠)，MCI色譜柱(CHP20P,120 μm, 日本三菱化學(xué)株式會(huì)社).甲醇、乙腈為色譜純(美國(guó)天地試劑公司)，其他試劑均為分析純(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，試驗(yàn)用蒸餾水與超純水為實(shí)驗(yàn)室自制.

獨(dú)一味藥材由西藏奇正藏藥股份有限公司提供，由張櫻山高級(jí)工程師鑒定為唇形科獨(dú)一味屬獨(dú)一味[Lamiophlomisrotata(Benth.) kudo]的干燥地上部分.

1.2 提取和分離

取獨(dú)一味地上部分19 kg，粉碎后放入容器中，以7倍量70%乙醇冷浸，室溫放置48 h，取浸出液，再加入新的70%乙醇浸泡提取，共3次.過(guò)濾并合并浸出液，減壓濃縮回收乙醇至浸膏(黑色粘稠狀)，取浸膏的2/3用于化學(xué)成分測(cè)定，共4935 g.浸膏以水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑后得4個(gè)部分.取乙酸乙酯部位190 g，選用硅膠柱色譜(3000 g, 12 cm×120 cm)，以環(huán)己烷-乙酸乙酯梯度洗脫(20∶1，10∶1，5∶1，3∶1，1∶1，1∶3，1∶5，純乙酸乙酯，純甲醇)，通過(guò)薄層色譜分析合并相似組份，標(biāo)記為A-R組.清洗O、N兩組份沉淀，得到化合物1、2；純化D組結(jié)晶得化合物3；O組除去沉淀部分經(jīng)反復(fù)硅膠色譜(二氯甲烷-甲醇梯度洗脫)及HPLC得到化合物4、5；取H組，經(jīng)MCI色譜(水-乙醇梯度洗脫)、重結(jié)晶、HPLC等方法進(jìn)行分離，得到化合物6～10.

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色粉末，m.p.250～253℃，UVλmax(MeOH，nm): 256，349.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 12.97(1H，s，5-OH)，10.03(1H，s，3′-OH)，9.46(1H，s，4′-OH)，7.43(1H，dd，J= 8.4，2.0 Hz，H-6′)，7.40(1H，d，J= 1.9 Hz，H-2′)，6.88(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5′)，6.77(1H，d，J= 1.9 Hz，H-8)，6.74(1H，s，H-3)，6.42(1H，d，J= 1.9 Hz，H-6)，5.06(1H，d，J= 7.3 Hz，Glu H-1).13C NMR(100 MHz，DMSO)δ: 181.9(C-4)，164.5(C-7)，163.0(C-2)，161.2(C-9)，157.0(C-5)，149.9(C-4′)，145.8(C-3′)，121.4(C-1′)，119.2(C-6′)，116.0(C-5′)，113.6(C-2′)，105.4(C-10)，103.2(C-3)，99.9(C-6)，99.5(Glu C-1)，94.7(C-8)，77.2(Glu C-5)，76.4(Glu C-3)，73.1(Glu C-2)，69.5(Glu C-4)，60.6(Glu C-6).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物1為木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-glucoside).

化合物2：淡黃色粉末，m.p.180～181℃，UVλmax(MeOH，nm): 260，340.1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ: 7.93(2H，d，J= 8.8 Hz，H-2′，6′)，6.96(2H，d，J= 8.8 Hz，H-3′，5′)，6.84(1H，d，J= 2.0 Hz，H-8)，6.71(1H，s，H-3)，6.51(1H，d，J= 2.1 Hz，H-6)，5.10(1H，d，J= 7.2 Hz，Glu-H-1).13C NMR(125 MHz，MeOD)δ: 183.9(C-4)，166.5(C-7)，164.7(C-2)，162.9(C-4′)，162.8(C-9)，158.9(C-5)，129.7(C-2′，6′)，123.0(C-1′)，117.2(C-3′，5′)，107.1(C-10)，104.3(C-3)，101.6(C-6)，101.1(Glu C-1)，96.1(C-8)，78.5(Glu C-5)，77.9(Glu C-3)，74.7(Glu C-2)，71.2(Glu C-4)，62.4(Glu C-6).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物2為芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(apigenin-7-O-β-D-glucoside).

化合物3：白色針晶，m.p.137～139℃.13C NMR(126 MHz，MeOD)δ: 141.4(C-5)，121.9(C-6)，71.7(C-8)，57.3(C-14)，56.6(C-17)，50.7(C-9)，46.4(C-24)，42.8(C-13)，42.3(C-4)，40.2(C-16)，37.8(C-1)，37.0(C-10)，36.6(C-20)，34.4(C-22)，32.4(C-8)，32.3(C-7)，31.6(C-2)，29.6(C-25)，28.7(C-12)，26.5(C-23)，24.7(C-15)，23.5(C-28)，21.5(C-11)，20.0(C-27)，19.6(C-26)，19.3(C-19)，19.1(C-21)，12.2(C-18)，12.1(C-29).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物3為β-谷甾醇(β-sitosterol).

化合物4：淡黃色粉末，m.p.232℃.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: aglycone moiety: 2.78(2H，t，J= 7.0 Hz，H-α)，3.91～4.04(2H，m，H-β)，6.55(1H，dd，J= 8.0 ，1.6 Hz，H-6)，6.66(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5)，6.68(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2); caffeic moiety: 6.27(1H，d，J= 15.9 Hz，H-β′ )，6.77(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5) ，6.95(1H，d，J= 8.2 Hz，H-6) ，7.05(1H，s，H-2)，7.58(1H，d，J= 15.9 Hz，H-α); glucose moiety: 3.26 ～ 4.07(5H，m，H-2-6)，4.37(1H，d，J= 7.9 Hz，H-1); rhamnose moiety: 1.08(3H，d，J= 6.1 Hz，H-6)，3.26～4.04(5H，m，H-2-6)，5.18(1H，s，H-1).13C NMR(100 MHz，MeOD)δ: aglycone moiety: 36.6(C-7)，116.5(C-5)，116.3(C-2)，121.2(C-6)，131.4(C-1)，146.1(C-4)，144.7(C-3); caffeic moiety: 114.6(C-8)，115.2(C-2)，117.1(C-5)，123.2(C-6)，127.6(C-1)，146.8(C-3)，148.0(C-7)，149.8(C-4)，168.3(C-9); glucose moiety: 62.3(C-6)，70.4(C-4)，76.2(C-2)，76.0(C-5)，81.6(C-3)，103.1(C-1); rhamnose moiety: 18.4(C-6)，70.5(C-2)，72.0(C-5)，72.3(C-3)，72.3(C-4)，104.2(C-1).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物4為毛蕊花糖苷(verbascoside).

化合物5：無(wú)色針晶(乙醇)，m.p.158～159 ℃.1H NMR(500 MHz，MeOD)δ: 7.08(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2，6)，6.70(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，5)，4.29(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′)，2.83(2H，t，J=7.0 Hz，H-7)，3.67(2H，t，J= 7.0 Hz，H-8)，3.15～4.05(6H，m，H-2′～6′).13C NMR(125 MHz，MeOD)δ: 156.9(C-4)，131.0(C-2，6)，130.7(C-1)，116.2(C-3，5)，104.4(C-1′)，78.1(C-5′)，78.0(C-3′)，75.1(C-2′)，72.0(C-4′)，71.6(C-8)，62.7(C-6′)，36.4(C-7).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物5為紅景天苷(salidroside).

化合物6：淡藍(lán)色晶體，m.p.191～193 ℃，UVλmax(MeOH，nm): 218，240，325.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 7.53(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7)，7.03(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2)，6.93(1H，dd，J=8.1，1.6 Hz，H-6)，6.77(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5)，6.21(1H，d，J= 15.8 Hz，H-8).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 171.1(C-9)，149.5(C-4)，147.1(C-7)，146.8(C-3)，127.8(C-1)，122.9(C-5)，116.5(C-2)，115.5(C-6)，115.1(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物6為咖啡酸[3-(3,4-dihydroxy-phenyl)-acrylic acid].

化合物7：白色針晶，m.p.204～205 ℃，UVλmax(MeOH，nm): 205，217，260.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 7.44～7.40(2H，m，H-2，6)，6.79(1H，d，J= 8.4 Hz，H-6).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 170.3(COOH)，151.5(C-4)，146.1(C-3)，123.9(C-1)，123.2(C-6)，117.7(C-2)，115.7(C-5). 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物7為3,4-二羥基苯甲酸(3,4-dihydroxybenzoic acid).

化合物8：黃色結(jié)晶，m.p.204～205 ℃，UVλmax(MeOH，nm): 210，327.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 7.24(1H，d，J= 3.0 Hz，H-6)，6.94(1H，dd，J= 8.9，3.0 Hz，H-4)，6.76(1H，d，J= 8.9 Hz，H-3).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 173.5(COOH)，156.4(C-2)，150.5(C-5)，124.5(C-4)，118.8(C-6)，116.0(C-3)，114.0(C-1).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物8為龍膽酸(2,5-dihydroxy-benzoic acid).

化合物9：褐色油狀，UVλmax(MeOH，nm): 197，282.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 6.68(1H，d，J= 8.0 Hz，H-6)，6.64(1H，d，J= 1.6 Hz，H-2)，6.52(1H，dd，J= 7.9，1.8 Hz，H-5)，3.67(1H，t，J= 7.3 Hz，H-8)，2.66(2H，t，J= 7.3 Hz，H-7).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 146.1(C-4)，144.6(C-3)，131.7(C-1)，121.2(C-6)，117.0(C-5)，116.3(C-2)，64.6(C-8)，39.7(C-7).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道對(duì)照基本一致，故鑒定化合物9為3,4-二羥基苯乙醇(3,4-dihydroxyphenylethanol).

化合物10：灰色針晶，UVλmax(MeOH，nm): 203，227，345.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 7.78(1H，d，J= 9.4 Hz，H-7)，6.93(1H，s，H-6)，6.75(1H，s，H-3)，6.18(1H，d，J= 9.4 Hz，H-8).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 164.3(COOH)，152.0(C-2)，150.5(C-4)，146.1(C-7)，144.6(C-5)，113.0(C-8)，112.8(C-1)，112.5(C-6)，103.6(C-3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物10為2,4,5-三羥基肉桂酸(2,4,5-trihydroxycinnamic acid).

化合物11：黃色油狀，UVλmax(MeOH，nm): 208.1H NMR(400 MHz，MeOD)δ: 6.90(1H，dd，J= 15.6，5.0 Hz，H-3)，5.97(1H，dd，J= 15.6，1.0 Hz，H-2)，4.15(1H，q，J=5.6 Hz，H-4)，1.58(1H，m，H-5)，0.96(3H，t，J= 7.4 Hz，H-6).13C NMR-DEPT(100 MHz，MeOD)δ: 170.3(C-1)，152.2(C-3)，121.4(C-2)，72.9(C-4)，30.3(C-5)，10.3(C-6).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)照基本一致，故鑒定化合物11為2E-4-羥基己烯酸[(E)-4-hydroxyhex-2-enoic acid].

3 結(jié)語(yǔ)

本文對(duì)獨(dú)一味的乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行了分離，獲得了11個(gè)化合物，分別鑒定為木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、β-谷甾醇(3)、毛蕊花糖苷(4)、紅景天苷(5)、咖啡酸(6)、3,4-二羥基苯甲酸(7)、龍膽酸(8)、3,4-二羥基苯乙醇(9)、2,4,5-三羥基肉桂酸(10)、2E-4-羥基己烯酸(11).其中化合物5和8～11為首次從該植物中分離得到.此外，紅景天苷(5)在獨(dú)一味中的分離，為獨(dú)一味的抗氧化功能[13]提供了一定的物質(zhì)基礎(chǔ)，說(shuō)明獨(dú)一味存在抗疲勞、抗氧化損傷的功效[14]，提示其進(jìn)一步的研究開(kāi)發(fā)方向.本課題組將繼續(xù)深入分析獨(dú)一味的化學(xué)成分，以期望分離獲得更多新的有效成分，為獨(dú)一味的藥效基礎(chǔ)及其作為主要原料的民族藥物開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù).

參 考 文 獻(xiàn)

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