李 華，王仁俊，歐陽(yáng)菲，高雨飛

(吉林師范大學(xué)，生命科學(xué)學(xué)院,吉林 四平 136000)

蟾酥對(duì)蟾蜍心電活動(dòng)的影響

李 華，王仁俊，歐陽(yáng)菲，高雨飛

(吉林師范大學(xué)，生命科學(xué)學(xué)院,吉林 四平 136000)

利用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)用不同濃度的蟾酥溶液處理后的蟾蜍的心率和心電圖各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定和分析，結(jié)果表明：在一定范圍內(nèi)，隨著蟾酥濃度的增大，蟾蜍的心率加快；心電圖中R波的電壓峰值降低、Q-T間期的時(shí)值縮短；而P-R間期、QRS期的時(shí)值延長(zhǎng)．并且這些變化在給藥后1～1.5 h達(dá)到最大，在2 h時(shí)，各指標(biāo)均有所恢復(fù)．由此可見，蟾酥對(duì)蟾蜍的心電活動(dòng)有一定的影響．

蟾酥；蟾蜍；心率；心電圖

0 引言

蟾酥是一種動(dòng)物毒素，主要由蟾蜍耳后腺分泌．主要成分是多肽，其中包含神經(jīng)肽、麻醉劑、激素、抗微生物、抗真菌等成分．蟾酥具有強(qiáng)心、抗腫瘤、局部麻醉、鎮(zhèn)痛、抗炎等多種功效[1]．蟾酥為《中華人民共和國(guó)藥典》二零零零年版一部標(biāo)注毒性的15味常用有毒中藥之一[2]，在心肌毒性方面，對(duì)豚鼠進(jìn)行離體心臟灌流實(shí)驗(yàn)，結(jié)果蟾酥可誘導(dǎo)心臟出現(xiàn)房室傳導(dǎo)阻滯、室速、室顫多種心律失?，F(xiàn)象，當(dāng)給藥量累積達(dá)(60±11．5) μg時(shí)致其停跳[3]；蟾酥還對(duì)心肌細(xì)胞的收縮力以及心肌細(xì)胞的ATP酶有影響，蟾酥通過控制心肌細(xì)胞內(nèi)外Na+和Ca2+的濃度使心肌細(xì)胞的收縮力加大[4]；在神經(jīng)系統(tǒng)方面，蟾酥可降低神經(jīng)纖維的興奮性，減慢神經(jīng)系統(tǒng)的傳導(dǎo)速度[5]．本文以中華大蟾蜍為研究對(duì)象，對(duì)蟾酥影響下蟾蜍的心電活動(dòng)變化進(jìn)行測(cè)定，以期進(jìn)一步探討蟾酥對(duì)心臟的急性毒性作用，為客觀評(píng)價(jià)蟾酥的藥理作用提供資料積累．

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

中華大蟾蜍(Bufogargarizans)屬蟾蜍科、蟾蜍屬,由沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.選取體重基本一致、活性良好的蟾蜍成體置于玻璃缸內(nèi)靜養(yǎng),48 h后用于試驗(yàn)．

1.2 儀器和藥品

BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司),聯(lián)想臺(tái)式計(jì)算機(jī)，標(biāo)準(zhǔn)任氏液，常規(guī)解剖器械，竹制刮刀等．

1.3 處理方法

(1)提取蟾酥.首先將辣椒或者大蒜等辛辣物塞進(jìn)蟾蜍的口中，過10 min開始刮漿，刮漿時(shí)用左手握住蟾蜍的4條腿，只露出頭部，右手用鑷子對(duì)準(zhǔn)蟾蜍隆起的耳后腺的包塊，夾取白色的漿液，刮下的漿放在培養(yǎng)皿中曬干備用．

(2)藥品的配置.以任氏液為溶劑，分別配制成0.1%的溶液，攪拌溶解，1 h后用4層紗布過濾作為供試原液．

(3)實(shí)驗(yàn)材料處理.使用蟾酥溶液的濃度是120,60,30及15 mg/kg，按照濃度的從低到高分成四組，每組5只蟾蜍，采用腹腔注射的辦法，將相應(yīng)濃度的蟾酥溶液2 ml注射到蟾蜍的體內(nèi)，對(duì)照組注射等量的標(biāo)準(zhǔn)任氏液，經(jīng)處理的蟾蜍放置在水桶內(nèi)，分別在0.5 h,1 h,1.5 h，2 h后，對(duì)每組中的5只蟾蜍進(jìn)行雙毀髓，用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，時(shí)間常數(shù)為0.1 s、平滑濾波、50 z抑制，記錄標(biāo)準(zhǔn)的二導(dǎo)聯(lián)心電圖．

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Mean±SD表示，通過一元回歸分析蟾酥溶液的濃度與蟾蜍的心率和心電活動(dòng)的各項(xiàng)指標(biāo)之間的關(guān)系[6]，所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0進(jìn)行處理．

2 結(jié)果

2.1 蟾酥處理后蟾蜍的心率變化

以給藥前的平均心率記為1,分別計(jì)算給藥后0.5,1.0,1.5和2.0 h的平均心率與給藥前心率的比值,得到給藥組相對(duì)心率變化(如圖1所示).

a. 15; b. 30; c.60; d. 120圖1 不同時(shí)間蟾酥對(duì)蟾蜍心率的影響

由心率的變化可以看出，在給藥后蟾蜍的心率即開始發(fā)生變化，各組蟾蜍給藥后的心率都有不同程度的加快,且給藥劑量越大,其心率加快程度越明顯.在1.0～1.5 h間達(dá)到最大,1.5 h后有明顯恢復(fù)趨勢(shì)， 在2 h時(shí),各組蟾蜍心率均有所恢復(fù),且隨著給藥劑量的增加,恢復(fù)程度也明顯變差．這表明蟾酥可使心臟出現(xiàn)心動(dòng)過速．

2.2 蟾酥處理后蟾蜍心電指標(biāo)的變化

與正常對(duì)照組相比，給藥組R波波幅降低，P-R間期延長(zhǎng)，QRS時(shí)程顯著增寬，Q-T間期縮短．與心率的變化一樣，R波、P-R間期、QRS時(shí)程和Q-T間期的變化也是在1.0～1.5 h間達(dá)到最大，1.5 h后有明顯的恢復(fù)趨勢(shì)，在2 h時(shí)，各組蟾蜍心電指標(biāo)均有所恢復(fù)，且隨著給藥劑量的增加,恢復(fù)程度也明顯變差(如圖2所示)．心電指標(biāo)的變化表明蟾酥可使心臟出現(xiàn)房室傳導(dǎo)阻滯，室性心律失?，F(xiàn)象．

a.15;b.30;c.60;d.120. 圖2 不同時(shí)間蟾酥對(duì)蟾蜍心電活動(dòng)的影響

2.3 蟾酥濃度與心率及心電各指標(biāo)之間的關(guān)系

記錄不同的濃度蟾酥溶液處理1.5 h后蟾蜍的心率和心電各項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)．可得到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)．通過單因子方差分析表明，蟾蜍的心率和心電的各項(xiàng)指標(biāo)組間差異達(dá)到顯著水平(FH=104.563，F(xiàn)R=131.570，F(xiàn)P-R=137.211，F(xiàn)QRS=48.363，F(xiàn)Q-T=65.435，P<0.01)分別對(duì)不同濃度的蟾酥溶液處理后蟾蜍的心率和心電各項(xiàng)指標(biāo)的差異進(jìn)行比較，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1．

SPSS13.0軟件中的一元線性回歸來分析蟾酥的濃度與蟾蜍的心率和心電圖的各項(xiàng)指標(biāo)之間的關(guān)系．由回歸分析可知，在一定范圍內(nèi)，蟾蜍的心率與心電圖中的P-R間期和QRS時(shí)程的時(shí)值與蟾酥的濃度呈正相關(guān)；而R波的電壓值和Q-T間期的時(shí)值與蟾酥的濃度呈負(fù)相關(guān)，擬合一元回歸方程：

YH=0.121x+46.315(r=0.930**),YR=-0.008x+1.037(r=0.938**),YP-R=0.002x+0.400(r=0.962**),YQRS=0.001x+0.255(r=0.865*),YQ-T=-0.002x+0.395(r=0.833**)．

表1 不同濃度的蟾酥溶液處理后蟾蜍的心率和心電

表1中的數(shù)據(jù)都表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，*表示與對(duì)照組的相比較差異顯著(P<0.05)，**表示與對(duì)照組相比較差異極顯著(P<0.01)

3 討論

一定濃度的蟾酥可使蟾蜍在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)心動(dòng)過速，房室傳導(dǎo)阻滯，室性心律失常等現(xiàn)象，這與蔣潔君等人離體心臟灌流研究的結(jié)果相一致，說明蟾酥對(duì)心臟具有一定的急性毒性[2]．分析其原因一方面蟾酥的有效成分可降低Na+—K+—ATP酶的活性，心肌細(xì)胞膜Na+—K+—ATP酶得主要作用是心肌細(xì)胞興奮后Na+、K+的恢復(fù),幫助K+離子由細(xì)胞膜外進(jìn)入細(xì)胞膜內(nèi),Na+離子從細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞膜外,而Na+—K+—ATP酶活性下降會(huì)使細(xì)胞膜外的K+離子濃度輕度升高[7-9],從而使心肌更容易興奮,造成心肌提前去極化，引起舒張壓升高，表現(xiàn)為心率加快；另一方面蟾酥的有效成分可間接興奮迷走神經(jīng)并抑制交感神經(jīng)，使房室傳導(dǎo)減慢，表現(xiàn)為房室傳導(dǎo)阻滯[5]．

用一元線性回歸分析蟾酥濃度與蟾蜍的心電各波及各間期的影響，得出結(jié)論，隨著蟾酥的濃度的增加蟾蜍心電中的R 波的電壓峰值降低，P—R 間期、QRS間期的時(shí)值延長(zhǎng)，可能是因?yàn)轶杆钟绊懥薔a—K泵、Ca離子通道的活動(dòng)，從而影響了心室肌去極化和復(fù)極化的過程而導(dǎo)致R波電壓值降低，P—R間期和QRS間期時(shí)間延長(zhǎng)．而Q—T間期縮短與心率有關(guān)，心率加快，Q—T間期就縮短，心率減慢，Q—T間期就延長(zhǎng)．蟾酥影響蟾蜍心電的機(jī)理還需要進(jìn)一步研究．

由結(jié)果分析可知：蟾酥不僅影響蟾蜍的心率，還在一定程度上影響蟾蜍的心電的各項(xiàng)指標(biāo)，可以說蟾酥對(duì)人及其它動(dòng)物的心電也有一定影響．因此可以用蟾酥來研制一些治療心臟疾病的藥物，對(duì)于預(yù)防和治療心臟疾病藥物研究及應(yīng)用前景有一定的意義．

[1]王 鋒，張 薇，董紅兵.蟾酥的藥理研究及其應(yīng)用概況[J].國(guó)醫(yī)論壇.2003,18(5):50～52.

[2]王浴生．中藥藥理與應(yīng)用[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，1983.

[3]蔣潔君，周 婧，馬宏躍等.蟾酥對(duì)豚鼠離體心臟的毒性作用和物質(zhì)基礎(chǔ)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(17):233～237.

[4]周叢容，蔣建飛等.研究蟾酥中毒可致快速心律失常[J].貴州師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2003，5(1):56～62.

[5]張薇薇，李兆平，艾洪濱.蟾酥對(duì)蟾蜍坐骨神經(jīng)電生理特性的影響[J].沈陽(yáng)師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版,2008，2(11):75～76.

[6]解景田，趙 靜.生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(第二版[M].北京：高等教育出版社,2005,85～87.

[7]X.L.Xia,H.Z.Jin,S.K.Yan,et al.Analysis of the bioactive constituents of Chansu in rat plasma by high Performance Iiquid chromatography with mass spectrometric detection [J]．J Pharm Biomed 2010，53：646．

[8]R.J.Bick，B.J.Poindexter，R.R.Sweney,et al．Effects of Chansu，a troditional Chinese medicine．on the calcium transients of isolated cardiomyocytes：Cardio toxicity due to more than Na K2ATPase blocking[J]．Life sci，2002，72(6)：699．

[9]蔣潔君，周 婧，馬宏躍等.蟾酥對(duì)豚鼠心臟電生理的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2011，25(3)：307～309.

InfluencesoftheToadVenomonBufoGargarizansHeartActivities

LIHua，WANGRen-jun，OUYANGFei，GAOYu-fei

(School of Life Science,Jilin Normal University,Siping 136000,China)

By applying biological functional test systems,this paper aims to study the influences of the different concentrations of Toad Venom on the heart rate and electrocardiog ram(ECG) of Bufo gargarizans.Results show that,as Toad Venom concentrations increase,the heart rate of the bufo gargarizans speeds up；the peak voltage of R wave and the time of the Q-T interval in the ECG decreases；while the time of the P-R interval and QRS duration increases.These values after administration of 1～1.5 h reach the maximum,and each value decreased at 2 h.Thus,it can be concluded the toad venom has an effect on the elcetrocardia action of bufo gargarizans.

toad venom;bufo gargarizans;heart rate;electrocardiogram

林險(xiǎn)峰)

2014-06-23

吉林省科技廳科技發(fā)展項(xiàng)目(20130522002JH)

李 華(1980-)，女，遼寧省阜新市人，現(xiàn)為吉林師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院講師，碩士.研究方向：動(dòng)物生理．

R285

A

1674-3873-(2014)03-0142-03