盧麗娟 鐘華清 蘇犁云 曹凌峰 徐夢(mèng)華 徐 錦

·論著·

2008至2011年上海單中心住院腹瀉兒童輪狀病毒基因型別流行特征

盧麗娟 鐘華清 蘇犁云 曹凌峰 徐夢(mèng)華 徐 錦

目的 監(jiān)測(cè)并分析上海單中心住院腹瀉兒童A組輪狀病毒(RV)基因型別的變化特征，為RV性腹瀉的防治提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。方法 收集2008年1月至2011年12月入住復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院<5歲的腹瀉患兒糞便標(biāo)本，RV抗原陽(yáng)性者345份，采用套式多重RT-PCR法進(jìn)行RV的基因分型。結(jié)果 ①G基因型：2008至2010年以G3型為主，檢出率分別為49.2%、44.6%和78.0%；G9型的流行呈上升趨勢(shì)，成為2011年最主要的流行型別(51.1%)；G1型在4年中均有檢出(8%～20%)；G2型少見，G4型未檢出。G混合型中，以G3+G9型為主，其次為G3+G1型，還檢出4例3種G基因型的混合。②P基因型：2008、2010和2011年均以P[8]型為主，檢出率分別為55.6%、60.0%和68.1%，2009年以P混合基因型(43.2%)為主；P[4]型在4年均有流行；P[6]、P[9]型少見，僅在混合感染中檢出P[10]型。P混合型中，以P[8]+P[4]型為主，其次為P[8]+P[10]型。③P[8]G3型是2008至2011年最主要的RV流行株(24.3%)，其次為P[8]G9型及PmG3型。2011年P(guān)[8]G9型躍升為最主要的流行型別(40.5%)。結(jié)論 與2001至2007年相比，2008至2011年上海地區(qū)A組RV基因型出現(xiàn)了新的流行特點(diǎn)，G1型及G9型的流行呈上升趨勢(shì)，G3的流行有所下降，各種混合型別多見。對(duì)RV基因型保持系統(tǒng)性的連續(xù)監(jiān)測(cè)對(duì)RV疫苗在上海的應(yīng)用是必要的。

嬰幼兒； 輪狀病毒； 腹瀉； 基因型

A組輪狀病毒(Rotavirus, RV)是導(dǎo)致嬰幼兒嚴(yán)重腹瀉的最主要病原體， WHO估計(jì)每年約有50萬(wàn)名5歲以下的患兒因RV腹瀉死亡，中國(guó)每10萬(wàn)名兒童中有10名左右因RV性腸胃炎而死亡[1]。

RV內(nèi)含11個(gè)片段的雙鏈RNA基因組，分別編碼病毒的6種結(jié)構(gòu)蛋白(VP1～VP4、VP6和VP7)以及6種非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1～NSP6)。根據(jù)外層衣殼蛋白VP6組特異性抗原表位將RV分為A～G 7組，其中A、B和C組可感染人類，感染兒童以A組為主。隨著基因序列分析技術(shù)的發(fā)展，根據(jù)VP4和VP7的核苷酸序列同源性可將A組RV分為33種P基因型及25種G基因型。已在人類中檢出12種G基因型(G1～G6，G8～G12，G20)及15種P基因型(P[1]～P[11]，P[14]，P[15],P[19]及P[25])，其中5種G型(G1～G4、G9)、3種P型(P[4]、P[6]、P[8])及5種基因型的組合(P[8]G1、P[4]G2、P[8]G3、P[8]G4及G9P[8])最常見。本研究是繼2001至2007年上海單中心A組RV監(jiān)測(cè)[2]的后續(xù)研究，通過收集2008至2011年來(lái)自上海地區(qū)<5歲住院腹瀉患兒的糞便標(biāo)本，對(duì)A組RV基因型別的流行特征進(jìn)行研究，為RV疫苗在上海地區(qū)的應(yīng)用、評(píng)價(jià)、推廣、改進(jìn)及相應(yīng)公共衛(wèi)生措施的調(diào)整提供不可或缺的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 方法

1.1 標(biāo)本納入標(biāo)準(zhǔn) ①2008至2011年復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院(我院)的<5歲全部的住院腹瀉患兒，符合腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；②腹瀉后1～14 d間采集糞便；③由護(hù)士統(tǒng)一收集糞便標(biāo)本后送至我院病毒室，按標(biāo)本收到時(shí)間順序編號(hào)，-20 ℃保存(超過1年的標(biāo)本轉(zhuǎn)入-70℃長(zhǎng)期保存)；④取RV抗原陽(yáng)性且順序編號(hào)能被6除盡的標(biāo)本。

1.2 主要材料和試劑 采用膠體金法檢測(cè)RV抗原。膠體金試劑盒購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司，TRIzol 購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，Ex-Taq酶購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司(TaKaRa)，一步法RT-PCR試劑盒購(gòu)自上海睿安生物技術(shù)有限公司。

1.3 RV 抗原的檢測(cè) 約100 mg糞便放入裝有稀釋液的滴管中，震蕩混勻，垂直緩慢加2～3滴混勻后的樣本(約80 μL)至膠體金試劑盒測(cè)試卡加樣端中心，5～10 min判斷結(jié)果，出現(xiàn)兩條紅線者為陽(yáng)性。

1.4 A組RV G、P基因型的檢測(cè) 分別選擇編碼VP7和VP4基因的高保守序列設(shè)計(jì)引物，先經(jīng)一步法RT-PCR獲得cDNA及第1次PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物，再分別選擇基因內(nèi)不同血清型的特征序列設(shè)計(jì)一組分型引物，與另一端保守序列引物配對(duì)，經(jīng)2次PCR，根據(jù)得到產(chǎn)物片段的大小區(qū)分不同標(biāo)本RV的基因型[3]。詳細(xì)步驟如下：用0.9%氯化鈉溶液制備10%～20% 的糞便懸液, 離心取 200 μL上清液，加1 mL TRIzol抽提RNA，RNA沉淀以焦碳酸二乙酯(DEPC)水20 μL溶解。各取4 μL RNA分別用于VP7和VP4基因長(zhǎng)片段的一步法RT-PCR反應(yīng)，所用引物分別為G分型的9con1和9con2，P分型的con2和con3。反應(yīng)體系：引物各0.5 μL，DEPC水6.5 μL，RT-PCR一步法反應(yīng)液12.5 μL，酶混合物1.0 μL，總體積25 μL。反應(yīng)條件：RNA和引物混合，97 ℃ 5 min，立即置冰上，加入其他反應(yīng)物，42℃ 1 h，95 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，42 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，30個(gè)循環(huán)。取G(或P)分型的第1次PCR產(chǎn)物2 μL，9con1(或con3)作為共同引物，其余G(或P)分型的多條引物同時(shí)加入一個(gè)反應(yīng)管中，反應(yīng)體系：引物0.5 μL，三磷酸脫氧核糖核苷(dNTP)4 μL，10×緩沖液5 μL，Taq酶 2.5 U，總體積50 μL。反應(yīng)條件：94 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，44 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 7 min。根據(jù)電泳條帶的長(zhǎng)度確定 RV的型別。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 4年間我院共收集住院腹瀉兒童糞便標(biāo)本5 750份，RV抗原陽(yáng)性標(biāo)本2 070份，以順序編號(hào)被6個(gè)除盡的標(biāo)本共345份。男213例，女132例；0～1歲251例，～3歲76例，～5歲18例。96%的標(biāo)本(331份)是在發(fā)病后5 d內(nèi)收集。

2.2 A組RV G基因型的分布 如圖1所示，2008至2011年RV G基因型中，以G3、G9及G1型的流行為主，但每年流行特點(diǎn)各有不同。2008年以G3型為主，檢出率為49.2%，其次G9型為21.8%、G1型為17.7%；2009年G3型仍為主要流行型別，但其比例下降至44.6%，其次為G9型(20.3%)和G1型(14.9%)，該年度G混合型別有所上升，為16.2%；2010年G3型以78.0%的檢出率成為當(dāng)年的優(yōu)勢(shì)流行型別，而G9型(9.0%)和G1型(8.0%)檢出率明顯下降；2011年G9型上升成為主要的流行型別(51.1%)，G1型檢出率也升至19.1%，G3型則下降至12.8%。345份標(biāo)本中共檢出了8例G2型，未檢出G4型。

圖1 2008至2011年A組RV G基因型的分布[%(n)]

Fig 1 Distribution of rotavirus G genotypes from 2008 to 2011[%(n)]

2.3 A組RV P基因型的分布 如圖2所示，2008至2011年RV的 P基因型，以P[8]、P[4]及P混合型的流行為主。2008年P(guān)[8]型占55.6%，其次為P混合型(33.9%)和P[4]型 (9.7%)；而2009年P(guān)混合型上升為主要的流行型別，檢出率為43.2%, P[8]型則下降為次要流行型別(31.1%)，P[4]型出現(xiàn)上升趨勢(shì)(25.7%)；2010年P(guān)[8]型重新上升成為主要流行型別，檢出率為60.0%；2011年P(guān)[8]型檢出率繼續(xù)上升，達(dá)68.1%，而P混合型檢出率降為19.1%；另外2008年及2010年分別檢出1例P[6]型及1例P[9]型，P[10]型均以與其他P型混合方式存在。

圖2 2008至2011年A組RV P基因型的分布[%(n)]

Fig 2 Distribution of rotavirus P genotypes from 2008 to 2011[%(n)]

2.4 A組RV流行株的基因組合 表1顯示，2008年基因組合型別以PmG3為主(22.6%)；2009至2010年基因組合型別均以P[8]G3型為主，檢出率分別為17.5%及41.0%，其次為PmG3型，檢出率分別為16.2%及21.0%, 位于第 3位的流行型別因年份而不同，分別為2008年的P[8]G9型，2009年的PmG9型及2010年的P[4]G3型。2011年P(guān)G組合型別出現(xiàn)了較大變化， P[8]G9型為主要的流行型別，檢出率為40.5%，其次為P[8]G1型(10.7%)及PmG9型(8.5%)。除以上主要組合型別外，還可見其他組合型別在不同年份的流行，如P[8]G2 型、P[6]G2型及P[9]G3型等。

2.5 A組RV G混合基因型的分布 圖3所示，2008至2011年G混合基因型所占比例為17.6%，混合的G基因型種類較多，2008年和2010年的G混合基因型均以G3+G9型為主，檢出率分別為81.8%和60.0%；2009年的混合型種類最多，以G3+G2型、G3+G1型為主，均為25.0%；

表1 2008至2011年上海市住院腹瀉兒童RV組合型別[n(%)]

Tab 1 Prevalence of combination rotavirus genotypes among children hospitalized for acute gastroenteritis in Shanghai from 2008 to 2011[n(%)]

Ptypes/Gtypes2008(124)2009(74)2010(100)2011(47)Total(345)P[8]G116(12．9)5(6．8)8(8．0)5(10．6)34(9．8)P[8]G201(1．4)01(2．1)2(0．6)P[8]G326(21．0)13(17．6)41(41．0)4(8．5)84(24．3)P[8]G400000P[8]G922(17．7)2(2．7)7(7．0)19(40．4)50(14．5)P[8]Gm5(4．0)2(2．7)4(4．0)3(6．4)14(4．1)P[4]G12(1．6)1(1．4)02(4．2)5(1．4)P[4]G21(0．8)1(1．4)01(2．1)3(0．9)P[4]G37(5．6)8(10．8)15(15．0)1(2．1)31(9．0)P[4]G400000P[4]G92(1．6)3(4．0)01(2．1)6(1．7)P[4]Gm06(8．1)1(1．0)1(2．1)8(2．3)P[6]G100000P[6]G21(0．8)0001(0．3)P[6]G300000P[6]G400000P[6]G900000P[6]Gm00000P[9]G100000P[9]G200000P[9]G3001(1．0)01(0．3)P[9]G400000P[9]G900000P[9]Gm00000P[10]G100000P[10]G200000P[10]G300000P[10]G400000P[10]G900000P[10]Gm00000PmG14(3．2)5(6．8)02(4．2)11(3．2)PmG21(0．8)1(1．4)002(0．6)PmG328(22．6)12(16．2)21(21．0)1(2．1)62(18．0)PmG400000PmG93(2．4)10(13．5)2(2．0)4(8．5)19(5．5)Pm/Gm6(4．8)4(5．4)02(4．2)12(3．5)

2011年以G1+G9型為主(83.3%)。同時(shí)還檢出了少量3種不同型別的組合，如G3+G2+G1型、G3+G9+G2型等。

2.6 A組RV P混合基因型的分布 圖4所示，相比RV的G混合基因型，P混合基因型較為單一。2008至2010年均以P[8]+P[4]型的混合為主，分別占至100%，96.9%及91.3%；2011年檢出的9例P基因混合型均為P[8]與P[10]的混合。

圖3 2008至2011年A組RV G混合型分布

Fig 3 Distribution of rotavirus mixed-G types from 2008 to 2011

圖4 2008至2011年A組RV P混合型分布

Fig 4 Distribution of rotavirus mixed-P types from 2008 to 2011

3 討論

本課題組自2001年起對(duì)我院<5歲腹瀉患兒A組RV的流行規(guī)律及特點(diǎn)進(jìn)行了持續(xù)的監(jiān)測(cè)研究，入住我院的腹瀉患兒主要來(lái)自上海地區(qū)，這對(duì)于充分認(rèn)識(shí)該地區(qū)RV流行株的動(dòng)態(tài)變化、評(píng)估疫苗的應(yīng)用效果和新疫苗的發(fā)展是極其必要的。

中國(guó)1982年以來(lái)流行的RV G基因型主要以G1、G3型為主，1999年之前主要流行型別是G1型，之后則出現(xiàn)了以G3型為主的轉(zhuǎn)變，中國(guó)CDC 2003至2007年全國(guó)性RV流行病學(xué)的監(jiān)測(cè)報(bào)道，11個(gè)地區(qū)的哨點(diǎn)醫(yī)院均以G3型為主，其次為G1型，僅檢出3例G9型的流行[4,5]。但國(guó)內(nèi)尚缺乏2007年至今中國(guó)地區(qū)RV流行情況的總體分析資料。就上海地區(qū)而言，2001至2007年的G基因型仍以G3型為優(yōu)勢(shì)流行型別，G1型的流行基本呈下降趨勢(shì)[3,6]。但2008至2011年G基因型的流行出現(xiàn)了新的變化，整體表現(xiàn)為G3型呈波動(dòng)性下降趨勢(shì)，而G9和G1型呈波動(dòng)性上升趨勢(shì)，尤其以G9型的變化最為明顯。

G9型首次在1983至1984年美國(guó)費(fèi)城的腹瀉患兒中檢出，該地區(qū)1995至1996年G9型檢出率近50%[7,8]。此后，G9型開始成為許多國(guó)家和地區(qū)重要的流行型別之一。在中國(guó)1994年首次檢出G9型的流行，其后幾年只存在散在的流行，2003至2007年中國(guó)CDC報(bào)道有G9型存在，但比例較低(0.24%)[4,5]。上海地區(qū)2001至2005年G9型少見，僅在2001年檢出了1例，而自2006年起G9型開始出現(xiàn)了流行，并持續(xù)至2011年[3,6]。本研究顯示，2008至2011年G9型呈波動(dòng)性升高趨勢(shì)，尤其在2011年G9型的總檢出率高達(dá)51.1%，躍升為該年度的絕對(duì)優(yōu)勢(shì)流行型別。2000至2002年G9型也以超過30%的比例成為中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)的主要流行型別之一，2005至2007年其檢出率下降為18.0%[9,10]。中國(guó)香港地區(qū)2001至2002年G9型檢出率為5.1%，2007年檢出率為10.1%[11]。國(guó)內(nèi)其他地區(qū)G9型的流行也各有不同。如廣西地區(qū)2010年及西北地區(qū)2005年均出現(xiàn)了G9型較高水平的流行[12]；而蘭州地區(qū)某些年份[13]、西北地區(qū)1994至2004年[14]、天津地區(qū)2007至2009年[15]及南京地區(qū)2009至2010年[16]僅存在G9型的少量流行。土耳其報(bào)道2008至2009年G9型為該地區(qū)的主要流行型別[17]；古巴2006至2008年[18]和意大利2007至2009年[19]G9型的流行也均呈上升趨勢(shì)。

上海地區(qū)2001至2004年G1型的流行逐年減少，2005年始出現(xiàn)波動(dòng)性回升，2011年其檢出率上升至19.1%，僅次于當(dāng)年G9型的流行。2001至2007年上海地區(qū)以G3型的流行為主，2005年流行達(dá)高峰，2006年始出現(xiàn)波動(dòng)性的下降，到2011年該型別降到11年間的最低(12.8%)[3,6]。這提示上海地區(qū)可能開始重新進(jìn)入G1型的流行期，G3型則減少為非主要的流行型別。與上海地區(qū)相似，天津地區(qū)2007至2009年雖以G3型的流行為主，但G1型的流行呈現(xiàn)上升趨勢(shì)[15]。中國(guó)西北地區(qū)1996至2004年以G1、G3型的共同流行為主[13]；四川地區(qū)2006至2010年則以G1型為主[20]。盡管G3型在包括上海在內(nèi)的多個(gè)地區(qū)占據(jù)重要位置，但印度地區(qū)G3型的流行一直處于弱勢(shì)，該地區(qū)2005至2007年以G2、G1型的流行為主，僅檢出少量的G3型[21]。提示基因型在不同地區(qū)的流行可能與地域、環(huán)境、氣候差異等多種因素有關(guān)。

與G基因型的流行不同，全球范圍內(nèi)RV P基因型的流行型比較固定，基本以P[8]、P[4]和P[6]型為主。而在中國(guó)以P[8]型和P[4]型的流行為主，P[6]型較少流行。本研究的監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，P[8]型仍是近年上海地區(qū)的優(yōu)勢(shì)P基因型，但與2001至2005年(74.9%)相比，2008至2011年P(guān)[8]型的比例(53.4%)明顯下降。2001至2007年上海地區(qū)出現(xiàn)了P[4]型的波動(dòng)性流行，其中2003至2006年均未檢出P[4]型的流行，而P[4]型(36.7%)成為2007年的主要流行型別[3,6]，此后P[4]型呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。11年間還檢出了11例P[9]型及6例P[6]型，因?yàn)镻[6]型和P[9]型主要感染豬和貓，提示RV可在不同的種屬間進(jìn)行傳播。

上海地區(qū)P[10]型的流行與國(guó)內(nèi)外的流行情況基本一致。2001至2005年未檢出P[10]型，2006至2007年檢出了10例P[10]型的單獨(dú)感染及20例P[10]與其他P基因型的混合感染[3,6]，而2008至2011年P(guān)[10]型僅以與其他P基因型混合的形式存在，且主要以P[10]+P[8]型為主。中國(guó)CDC 2003至2007年全國(guó)性的RV流行病學(xué)監(jiān)測(cè)中僅檢出5例P[10](0.5%)[5]；蘭州[14]、四川[21]、廣州[22]、南京[16]及廣西[12]等地均未報(bào)道有P[10]型的流行。土耳其2006至2008年檢出7例P[10]單獨(dú)感染以及4例與其他P基因型的混合感染[17]。到目前為止，還未有地區(qū)報(bào)道該型別的高流行，這提示P[10]型并不能在人類中廣泛傳播造成大范圍的致病。

本研究中檢出較高比例的多種G混合型，為G1、G2、G3及G9型的任意混合，但以G3+G9混合為主，也檢出了少量3種不同G型別的混合。與上海地區(qū)2001至2007年相比[3,6]，2008至2011年G混合的型別更為多樣。 國(guó)內(nèi)其他地區(qū)報(bào)道的G混合型相比上海地區(qū)較為單一。例如，四川地區(qū)在2006至2010年檢出少量G1+G3混合型的流行，南京地區(qū)2009至2010年僅檢出2例G2+G3混合型的存在[17,21]。而與國(guó)外一些地區(qū)相比，上海地區(qū)的G混合型別較為固定。例如意大利2008年曾檢出11.5%的G混合型感染，為G1、G2、G9與G10型的任意混合[23]；印度2007至2009年與土耳其2008至2009年間分別檢出7.3%及13.0%的G混合型，均為G1、G2、G3、G4及G9型的2或3種型別的混合[17,21]。

同時(shí)，本研究也檢出了較高比例的P混合基因型，為P[4]、P[6]、P[8]及P[10]型的混合，但均為兩兩混合，以P[8]+P[4]型為主(27.2%)，相比上海地區(qū)2001至2005年的P混合型也更為豐富。上海地區(qū)P混合型的檢出特點(diǎn)與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)相似，如廣州地區(qū)2009年檢出了24.2%的P混合型，為P[4]、P[8]及P[6]型的混合，且以P[8]、P[4]的混合為主；天津地區(qū)2007至2009年P(guān)混合型的檢出率雖較低，但其混合型別也與上海地區(qū)相似[15,22]。國(guó)外不同地區(qū)P混合型的流行差異較大，如土耳其2008至2009年P(guān)混合型的感染檢出了17.0%，為P[2]、P[3]、P[4]、P[5]、P[6]、P[8]及P[10]型的任意混合，其中以P[6]+P[8]型為主，還檢出了1例P[4]+P[6]+P[8]型[17]；意大利2008年及突尼斯2007至2008年均未檢出P混合型的感染[23,24]。本研究中高比例RV G和P混合型的檢出顯示出RV遺傳上的多樣易變和由此引起的復(fù)雜分子流行病學(xué)特點(diǎn)。由于RV為內(nèi)含11個(gè)片段的RNA病毒，不同型之間因基因重配或基因重組極易產(chǎn)生混合型的基因型, 同時(shí)存在人畜間相互傳播的可能。

世界范圍內(nèi)RV的主要基因組合包括P[8]G1、P[8]G3、P[8]G4、P[4]G2及P[8]G9。中國(guó)2003至2007年以P[8]G3型的流行為主，其次為P[8]G1型、P[4]G3型。上海地區(qū)2001至2006年以P[8]G3為主，但在2007年以P[4]G3型為主，與呼和浩特地區(qū)2008至2010年主要流行型別一致[3,6,25]。雖上海地區(qū)2008年后又以P[8]G3型的流行為主，但P[8]G3型的比例整體呈下降趨勢(shì)，而P[8]G9型明顯上升的流行趨勢(shì)較為明顯，尤其在2011年P(guān)[8]G9型的檢出率高達(dá)40.5%，為當(dāng)年的最主要流行株。與上海地區(qū)2011年相似，廣西地區(qū)2010年以P[8]G9型為主[12]；而我國(guó)西北地區(qū)1996至2005年[13]及廣州地區(qū)2009年[22]的RV流行株均以P[8]G1型為主； 蘭州地區(qū)2009年[26]及南京地區(qū)2009至2010年[16]以P[8]G3型為主。阿根廷2004至2007年以P[8]G9型及P[4]G2型為主[27]；韓國(guó)的主要流行型與全球范圍內(nèi)的流行型幾乎相一致[28]；而土耳其2005至2007年的主要流行株是P[8]G1型和P[4]G2型[29]；同屬亞洲地區(qū)的日本，2007至2009年則以P[8]G1型為主[30]。

至今，已有3種RV疫苗在全球多個(gè)國(guó)家和地區(qū)進(jìn)行了應(yīng)用，包括葛蘭素史克公司生產(chǎn)的 Rotarix、默克公司生產(chǎn)的 RotaTeq以及中國(guó)蘭州生物制品研究所生產(chǎn)的羅特威。Rotarix疫苗是單價(jià)口服減毒活疫苗，由人RV P[8]G1株在Vero細(xì)胞中經(jīng)數(shù)代培養(yǎng)減毒而獲得，分別在嬰兒2和4月齡時(shí)給予口服。雖是單價(jià)疫苗，但對(duì)大多數(shù)其他血清型RV可產(chǎn)生交叉保護(hù)作用。Rotarix疫苗株對(duì)全部 RV的G亞型，包括在亞洲、歐洲及拉丁美洲各國(guó)流行的非G1、非P[8]和G2P[4]株引起的病毒性腹瀉均可提供較好的保護(hù)效果，而且該疫苗對(duì)發(fā)達(dá)國(guó)家兒童的保護(hù)率要高于發(fā)展中國(guó)家。RotaTeq疫苗為5價(jià)人-牛(WC3株)重配株口服減毒活疫苗，5個(gè)重配株中包括4個(gè)表達(dá)人RV -VP7(G1～G4型)的重配株和1個(gè)表達(dá)人RV-VP4 P[8]型的重配株。分別在嬰兒2、4和6月齡時(shí)給予3劑口服。RotaTeq疫苗對(duì)所有RV引起的腹瀉均具有較好的保護(hù)效果，尤其對(duì)重癥腹瀉有較高的保護(hù)率[31～37]。但最近澳大利亞、墨西哥和巴西的后續(xù)臨床觀察報(bào)道，雖然腹瀉發(fā)生率降低了，但這兩種疫苗的接種仍與腸套疊的發(fā)生相關(guān)[38,39]。 由中國(guó)蘭州生物制品研究所研制的單價(jià)羊RV口服活疫苗(LLR 株)為P[12]G10型，具有良好的免疫原性，對(duì)G1～G4型及G10型引起的腹瀉均可產(chǎn)生保護(hù)作用，這可能與LLR株G10型和G1～G4型 VP7 蛋白具有部分的同源性有關(guān)[40]。在嬰幼兒2月齡至3歲給予一劑該疫苗。該疫苗于2001年開始在中國(guó)地區(qū)上市使用，由于未列入計(jì)劃免疫，其使用范圍還相當(dāng)有限。個(gè)別后續(xù)的臨床觀察資料顯示，該疫苗對(duì)人RV感染具有一定的保護(hù)作用。

雖然上海地區(qū)RV基因型在近年間處于不斷變化中，但G基因型仍以G1、G3及G9型的流行為主，P基因型以P[8]和P[4]型的流行為主。因此，理論上現(xiàn)在上市的幾種商品化疫苗均可用于預(yù)防上海地區(qū)兒童RV性腹瀉的發(fā)生。由于Rotarix及RotaTeq在中國(guó)尚未批準(zhǔn)使用，且這兩種疫苗的全程免疫費(fèi)用較高，其應(yīng)用遠(yuǎn)景尚不明朗[41]。而LLR疫苗已在中國(guó)累計(jì)使用了2 600～2 700萬(wàn)劑(人)次，后續(xù)臨床觀察資料也顯示了該疫苗的保護(hù)作用，且中國(guó)自2005年 6月開始建立和實(shí)施的疫苗接種異常反應(yīng)報(bào)告體系所獲得的資料表明，截至2011年12月，尚未發(fā)現(xiàn)與RV疫苗接種相關(guān)的腸套疊病例，表明其安全性[42]。

總之，繼2001至2007年后，2008至2011年上海地區(qū)引起兒童腹瀉的RV基因型的流行又出現(xiàn)了新的變化，提示對(duì)該地區(qū)RV分子流行病學(xué)特征進(jìn)行長(zhǎng)期、持續(xù)監(jiān)測(cè)的重要性。

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Epidemical characteries of group A Rotavirus genotypes in children hospitalized with diarrhea in Shanghai, during 2008-2011

LULi-juan,ZHONGHua-qing,SULi-yun,CAOLing-feng,XUMeng-hua,XUJin

(PediatricInstitute,Children′sHospitalofFudanUniversity,Shanghai201102,China)

XU Jin, E-mail:jin030101@yahoo.com.cn

ObjectiveThis study aimed to analyze the dynamic characteristics of group A rotavirus genotypes. MethodsA total of 345 rotavirus-positive stool specimens were collected from inpatients under 5 years old hospitalized with acute gastroenteritis in Children′s Hospital of Fudan University from January 2008 to December 2011. Each fecal specimen was tested for rotavirus with a commercial enzyme immunoassay, and genotypes were characterized using multiplex nested reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR).ResultsG genotypes: The predominant G genotype was G3 which accounted for 49.2%, 44.6% and 78.0% respectively in the year of 2008, 2009 and 2010. The prevalence of G9 was on an upward trend from 2008 to 2011, and dominated as the most common type in 2011(51.1%). G1 was detected each year with a varying prevalence of 8%-20%. G2 was rarely seen and G4 was not detected during the four years. Mixed G infections with G3+G9 were the most prevailing G-mixed types, followed by G3+G1. Otherwise, mixed-G infections with three different G genotypes were detected in 4 cases. P genotypes: P[8] genotype was the dominant strain with prevalence of 55.6%, 60.0% and 68.1% respectively in the year of 2008, 2010 and 2011, whereas mixed P genotype was dominant in 2009(43.2%). P[4] strains were prevalent in four years in a volatility way. P[6] and P[9] could also be found as minor types. Interestingly, P[10] genotype was seen only in combination with P[8]. The major mixed P infection was genotype of P[4]+P[8], and P[8]+P[10] was assigned as follows. A high prevalence of P[8]G3 genotype was determined to be the major rotavirus genotype combination (24.3%) in Shanghai from 2008 to 2011 and the other prevalent genotypes included P[8]G9 and P[m]G3. P[8]G9 strains jumped as the most predominant type in 2011( 40.5%).ConclusionsCompared with the data from the year of 2001-2007, this study shows new epidemiological characteristics of group A rotavirus genotypes during 2008-2011 in Shanghai, including ascending of G1 and G9 proportions, reduction of G3 and diversification of mixed infections. Therefore, it is highly essential to conduct continuous and systematic monitoring for rotavirus strains in anticipation of rotavirus vaccine introduction in Shanghai.

Children; Rotavirus； Diarrhea; Genotype

新世紀(jì)優(yōu)秀人才計(jì)劃:NECT-09-0320;上海市公共衛(wèi)生優(yōu)秀學(xué)科帶頭人計(jì)劃:GWDTR201221

復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒科研究所 上海，201102

徐錦，E-mail:jin030101@yahoo.com.cn

10.3969/j.issn.1673-5501.2013.02.004

2013-01-17

2013-03-21)

張崇凡)