石晶　劉昱新　侯景秋　閆征斌　彭惠　常星

[摘要] 目的 對(duì)比正畸患者粘接自鎖托槽與傳統(tǒng)托槽后牙周指數(shù)和牙齦卟啉單胞菌的變化。方法 將正畸患者30例按托槽類型分為2組，每組15例。試驗(yàn)組粘接Clippy自鎖托槽，對(duì)照組粘接O-PAK傳統(tǒng)直絲弓托槽。分別在矯治器戴入前，戴入后第1、3個(gè)月檢查牙周臨床指標(biāo)（包括菌斑指數(shù)、牙齦指數(shù)、探診深度），同時(shí)采集齦下菌斑樣

本，利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)樣本中牙齦卟啉單胞菌和總細(xì)菌的數(shù)量，計(jì)算出牙齦卟啉單胞菌的構(gòu)成比。結(jié)果 治療前試驗(yàn)組與對(duì)照組牙周指數(shù)、牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。治療中，2組牙周指數(shù)、牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比均隨時(shí)間延長(zhǎng)而升高（P<0.05）；試驗(yàn)組在粘接矯治器后第1、3個(gè)月，牙周指數(shù)、

牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比均低于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論 與傳統(tǒng)托槽對(duì)比，自鎖托槽更利于口腔衛(wèi)生維護(hù)，但仍會(huì)

對(duì)口腔衛(wèi)生造成不利影響。

[關(guān)鍵詞] 自鎖托槽； 傳統(tǒng)托槽； 牙周指數(shù)； 牙齦卟啉單胞菌； 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)

[中圖分類號(hào)] R 783.1 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.03.003

固定矯治器和矯治技術(shù)因具備高效、精準(zhǔn)等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于錯(cuò)畸形的臨床治療。然而固定矯治器結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，長(zhǎng)期存在患者口腔內(nèi)，很容易出現(xiàn)菌斑滯留，導(dǎo)致牙齦炎、牙周炎，嚴(yán)重者可導(dǎo)致矯治中斷。牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingi-

valis，P. gingivalis）是牙周致病菌之一，且與慢性牙周炎的關(guān)系最為密切[1]。自鎖托槽依賴滑蓋或彈簧夾

固定弓絲，無(wú)需結(jié)扎絲或橡皮圈結(jié)扎。這一特殊結(jié)扎結(jié)構(gòu)是否更利于正畸患者的口腔衛(wèi)生維護(hù)，尚未

有統(tǒng)一定論。本實(shí)驗(yàn)旨在檢測(cè)和分析粘接自鎖托槽與傳統(tǒng)托槽牙菌斑指數(shù)（plaque index，PLI）、牙齦指數(shù)（gingival index，GI）、探診深度（probing depth，PD）3項(xiàng)臨床牙周指數(shù)的變化，并采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)對(duì)比兩種不同托槽牙齦卟啉單胞菌的構(gòu)成比，研究自鎖托槽是否更利于口腔衛(wèi)生維護(hù)。

1 材料和方法

1.1 病例的選擇

選取2011年7—10月就診于大慶油田總醫(yī)院口腔正畸科接受正畸治療的患者30例為研究對(duì)象。入選標(biāo)準(zhǔn)：1）牙列完整（含第二磨牙未萌者），下切牙區(qū)無(wú)明顯擁擠，均采用不拔牙矯治；2）正畸前接受口腔衛(wèi)生宣教，使用相同牙膏、牙刷，均采用改良Bass刷牙方法，能自行將菌斑量控制在PLI≤2范圍內(nèi)，并有良好醫(yī)從性，能夠按時(shí)復(fù)診；3）粘接托槽的牙齒無(wú)白堊斑、齲齒及充填體；4）受試期間，患者口腔內(nèi)除托槽、結(jié)扎絲、頰面管、弓絲，無(wú)其他正畸附件；5）無(wú)牙周病及口腔黏膜疾病；6）正畸治療前2周無(wú)抗生素使用史；7）無(wú)全身系統(tǒng)性疾病；8）患者同意參加試驗(yàn)。將30例患者按固定矯治器（托槽均由

TOMY公司生產(chǎn)）類型分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組15例。試驗(yàn)組：男8例，女7例，平均年齡15.8歲，粘接Clippy自鎖托槽；對(duì)照組：男6例，女9例，平均年齡14.5歲，粘接O-PAK傳統(tǒng)直絲弓托槽。

1.2 牙周臨床指標(biāo)的檢測(cè)

選擇下頜2顆中切牙為受試牙，牙周檢查由同1名牙周醫(yī)生完成。在治療前、治療1個(gè)月、治療3個(gè)月后使用牙周探針檢測(cè)下頜2顆中切牙近中唇面、唇面、遠(yuǎn)中唇面，計(jì)算2顆牙共6個(gè)位點(diǎn)的平均數(shù)作為該指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果。PLI采用Silness和L?e提出的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，GI和PD根據(jù)《牙周病學(xué)》第2版介紹的方法進(jìn)行檢測(cè)[2]。

1.3 牙齦卟啉單胞菌的檢測(cè)方法

1.3.1 齦下菌斑采集 每次采樣均由同1名醫(yī)生完成。用無(wú)菌刮匙去除2顆受試牙的齦上菌斑，無(wú)菌棉球隔濕、干燥，在2顆受試牙牙周袋相對(duì)較深處分別插入2根30號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化滅菌紙尖至牙周袋底，靜置10 s，紙尖取出后置于含有1 mL 0.9%生理鹽水的EP管內(nèi)，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株 采用P. gingivalis ATCC33277標(biāo)準(zhǔn)菌株（北京市口腔醫(yī)學(xué)研究所提供）。將菌株進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)，收集次代純種菌，置于1 mL 0.9%生理鹽水的EP管內(nèi)，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 DNA提取 樣本及凍存標(biāo)準(zhǔn)菌株在室溫下解凍，25%Chelex-100與樣本液按體積比1∶3混合，提取細(xì)菌DNA，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè) 根據(jù)P. gingivalis和大腸桿菌的16S rRNA基因特異保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物（由

北京康為世紀(jì)生物科技有限公司合成）。P. gingivalis上游引物序列：TGTAGATGACTGATGGTGAAAA-CC，下游引物序列：ACGTCATCCACACCTTCCTC，產(chǎn)物大小為198 bp。通用菌上游引物序列：AACGC-GAAGAACCTTACCA，下游引物序列：AAGGGTTG-CGCTCGTTGC，產(chǎn)物大小為151 bp。經(jīng)序列分析及預(yù)實(shí)驗(yàn)溶解曲線分析，引物具有良好特異性。

反應(yīng)條件為：預(yù)變性95 ℃ 10 min，變性95 ℃ 15 s，退火/延伸60 ℃ 1 min，均進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，并設(shè)置溶解曲線分析。分別將通用菌和P. gingivalis標(biāo)準(zhǔn)品DNA按10倍梯度稀釋作為模板，進(jìn)行定量PCR，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。所有反應(yīng)在ABI Prism 7300型熒光定量PCR儀（Applied Biosystems公司，美國(guó)）上進(jìn)行，每個(gè)樣本檢測(cè)均重復(fù)3次，取其平均值，每次反應(yīng)均設(shè)空白對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

使用SAS 9.13軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P=0.05為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)?；颊叽魅氤C治器前測(cè)量的數(shù)據(jù)作為基線，對(duì)2組間患者在不同觀測(cè)點(diǎn)牙周臨床指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果和牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述，并在同一組內(nèi)比較各指標(biāo)在不同觀測(cè)點(diǎn)的變化。組間不同觀測(cè)點(diǎn)PLI、GI、PD測(cè)量值及牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比的比較采用t檢驗(yàn)分析；組內(nèi)不同觀測(cè)點(diǎn)對(duì)比采用重復(fù)測(cè)量方差分析。

2 結(jié)果

2.1 牙周指數(shù)檢查結(jié)果

治療前2組患者口腔衛(wèi)生良好，下切牙唇側(cè)頸緣無(wú)明顯菌斑，牙齦健康，牙周探診深度均小于2.0 mm，2組PLI、GI、PD間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表

1）。治療1、3個(gè)月，尤其第3個(gè)月，大部分受試者下切牙唇側(cè)頸緣均可見(jiàn)少量菌斑，牙齦略有紅腫，探診未見(jiàn)明顯出血，PD略有增加，但基本在正常范圍（小于等于3.0 mm）。試驗(yàn)組牙周指數(shù)低于對(duì)照組（P<

0.05）；組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)比，牙周指數(shù)逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2 牙齦卟啉單胞菌的檢測(cè)結(jié)果

將牙齦卟啉單胞菌和通用菌標(biāo)準(zhǔn)品的DNA按照10倍梯度稀釋后，作為模板，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1、2）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)樣本進(jìn)行定量檢測(cè)并計(jì)算牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比。

治療前、治療1個(gè)月、治療3個(gè)月試驗(yàn)組牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比分別為0.000 1%±0.000 2%、0.005 0%±0.013 7%、0.170 8%±0.616 8%；對(duì)照組牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比分別為0.000 1%±0.000 1%、0.067 6%±0.249 5%、0.336 8%±0.694 3%。治療前，2組牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治

療1、3個(gè)月，組間對(duì)比，試驗(yàn)組牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比低于對(duì)照組（P<0.05）；組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)比，牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比逐漸升高（P<0.05）。

3 討論

自鎖托槽自發(fā)明以來(lái)，一直在不斷改進(jìn)發(fā)展，近些年被廣泛應(yīng)用于臨床治療中。該托槽具有可減少椅旁操作時(shí)間、提高工作效率、低摩擦、牙齒移動(dòng)速度快、患者疼痛感低、利于牙周組織改建、減少?gòu)?fù)診次數(shù)、縮短總療程[3]等特點(diǎn)。該托槽的自鎖結(jié)

構(gòu)是否利于口腔衛(wèi)生維護(hù)，在正畸界眾說(shuō)紛紜。正畸患者粘接托槽后，口腔環(huán)境發(fā)生變化，進(jìn)而口腔菌群平衡發(fā)生改變?？谇粌?nèi)多為厭氧菌或兼性厭氧菌，采用普通培養(yǎng)法檢測(cè)，對(duì)培養(yǎng)條件要求高，耗時(shí)費(fèi)力，敏感性和準(zhǔn)確性較低。靈敏的PCR技術(shù)已越來(lái)越多地應(yīng)用在口腔醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。有研究[4]表明牙齦卟啉單胞菌對(duì)青春期齦炎的致病作用與其在齦下菌斑中的含量有關(guān)。然而目前現(xiàn)有的取樣技術(shù)使菌斑取樣難以做到絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化，因此，混合菌斑中某一細(xì)菌的相對(duì)數(shù)量比絕對(duì)數(shù)量更重要，可以利用定量PCR方法計(jì)算牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比，從而比較不同菌斑樣本中牙齦卟啉單胞菌的數(shù)量[5]。

本實(shí)驗(yàn)選取正畸治療中較易發(fā)生牙齦炎的下頜中切牙作為觀察對(duì)象。粘接固定矯治器的患者，PLI、GI及牙齦卟啉單胞菌檢出率在粘接托槽后的3個(gè)月里逐漸升高達(dá)到頂點(diǎn)，隨后開(kāi)始下降[6-7]，牙齦卟啉單胞菌與GI具有正相關(guān)關(guān)系[8]。本實(shí)驗(yàn)選取未粘接托槽

前、粘接1個(gè)月、粘接3個(gè)月3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，對(duì)2組不同托槽的牙周指數(shù)及牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比進(jìn)行研究。組間對(duì)比結(jié)果顯示：未粘接托槽前，2組患者牙周指數(shù)及牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療后第1、3個(gè)月試驗(yàn)組牙周指數(shù)及牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比低于對(duì)照組；組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)比結(jié)果顯示，2組治療后第1、3個(gè)月的牙周指數(shù)及牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比均高于基線，呈持續(xù)上升狀態(tài)。在各牙周指數(shù)中，PD是衡量牙周健康的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)在1、3個(gè)月，試驗(yàn)組PD低于對(duì)照組，雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但差異不顯著，并且該30例患者下頜中切牙唇側(cè)的PD大致均在健康范圍內(nèi)（小于等于3 mm），僅有2例患者PD略大于3 mm，此時(shí)PD的升高應(yīng)該是由于牙齦輕度腫脹造成假性牙周袋所致，并非附著喪失造成的牙周袋加深。Ristic等[6]指出PD指數(shù)在粘接托槽后的6個(gè)月里持續(xù)上升。筆者推測(cè)，如果本實(shí)驗(yàn)延長(zhǎng)觀察時(shí)間，PD值可能會(huì)有更顯著變化。本試驗(yàn)研究表明粘接自鎖托槽比傳統(tǒng)托槽牙周指數(shù)和牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比均低，更利于患者口腔衛(wèi)生的維護(hù)。但試驗(yàn)組中各項(xiàng)牙周指數(shù)及牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比仍較基線升高，并隨時(shí)間推移升高顯著，提示自鎖托槽雖比傳統(tǒng)托槽利于口腔衛(wèi)生，但粘接該托槽后對(duì)患者口腔衛(wèi)生仍有不利影響。

本實(shí)驗(yàn)選擇由同一廠家生產(chǎn)的2種托槽，2種托槽底板面積雖不完全一致，但僅相差2.5%，降低了因托槽大小相差較多出現(xiàn)的誤差，并盡量減小因材料、制作工藝等差別較大帶來(lái)的誤差；由同1名醫(yī)生進(jìn)行指數(shù)檢測(cè)及菌斑采集；要求受試患者具有良好醫(yī)從性，使用同一品牌牙膏、牙刷，均采用改良Bass刷牙方法，基本能自行將菌斑控制在PLI≤2范圍內(nèi)。研究結(jié)果表明：自鎖托槽較傳統(tǒng)托槽更容易清潔，更利于口腔衛(wèi)生的維護(hù)。然而粘接自鎖托槽后，無(wú)論是牙周指數(shù)還是牙齦卟啉單胞菌構(gòu)成比都較粘接托槽前持續(xù)升高。這也說(shuō)明即便選擇粘接較利于口腔衛(wèi)生的托槽，患者仍需具有良好醫(yī)從性，提高口腔衛(wèi)生保健能力，學(xué)會(huì)牙周保健措施，方可維持正畸治療過(guò)程中良好的口腔衛(wèi)生環(huán)境，確保正畸治療的順利進(jìn)行。

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（本文采編 陳謙明）