陳凡,宣麗華,陳君,葉茜茜

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,杭州 310053;2.浙江省中醫(yī)院,杭州 310006)

在周圍性面神經(jīng)損害的動物模型中,有明顯的面肌毛細血管灌注變化,而損傷好轉(zhuǎn)后面肌微循環(huán)可以恢復(fù)接近正常水平,據(jù)此本研究擬大鼠口唇微循環(huán)改變作為主要觀測指標,驗證粗針督脈平刺針刺療法對大鼠周圍性面神經(jīng)損傷后面肌微循環(huán)的影響,為粗針督脈平刺療法的治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物用雄性Wistar大鼠70只,重200～250 g(SPF級,浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心)。針灸針規(guī)格為0.18 mm×25 mm和0.25 mm×40 mm,江蘇省吳江市佳辰針灸器械有限公司生產(chǎn)。激光多普勒血流灌注成像儀,PeriScan PIM Ⅱ系統(tǒng)(瑞士PERIMED公司制造),本院第三臨床醫(yī)學(xué)院研究室提供,激光波長670 nm,探頭與檢測物之間距離20 cm。本研究采用NR掃描模式,步長 3 mm,根據(jù)觀察部位確定掃描面積。該儀器與計算機聯(lián)機,并應(yīng)用 LDPI圖像軟件,進行體表血流圖的記錄、分析、處理和存貯。檢測的微循環(huán)血流灌注值使用單位為 PU(測量體積內(nèi)血細胞濃度與血細胞平均運動速度的乘積)。

1.2 造模

將70只雄性Wistar大鼠編號,隨機取56只,按文獻[1-2]方法造模。大鼠禁食1 d后稱重,用10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)行腹腔注射,待5 min大鼠處于麻醉狀態(tài)后,將其左側(cè)臥固定于手術(shù)臺上,耳后剪毛,碘伏乙醇消毒備皮,俯臥位固定于鼠板上,沿右側(cè)耳根后緣行一弧形切口,鈍性分離面神經(jīng)主干,用微型眼科持針器(Inamli Restfrei制)壓迫露出的面神經(jīng),持續(xù)30 s,松開30 s,再壓迫30 s,持針器尖端壓強7.84×106 Pa,壓迫幅寬1.0 mm,制成大鼠面癱模型。用縫線標記損傷段,縫合。麻醉過后可看到造模大鼠出現(xiàn)右側(cè)面癱表現(xiàn)。

1.3 分組和干預(yù)方法

14只未造模大鼠為假手術(shù)組(A),A組鈍性分離面神經(jīng)主干后未做鉗夾造模,其余56只損傷大鼠隨機分為粗針針刺組(B)、普通針刺組(C)、基礎(chǔ)西藥組(D)、面癱模型組(E),每組14只。穴位定位參照華興邦《大鼠穴位圖譜的研制》[3];造模后第1天不處理;B組造模后于神道穴約呈10°角進針,沿督脈經(jīng)向下平刺2 cm,操作者不使用提插捻轉(zhuǎn)等手法,留針1 h;C組在大鼠合谷、頰車、四白、地倉穴呈10°角進針,針刺深度0.5 cm,不使用提插捻轉(zhuǎn)等手法,留針30 min;D組予強的松片灌胃治療,維生素B1、維生素B12腹腔注射給藥;E組不予治療。所有大鼠正常環(huán)境下飼養(yǎng),造模后第7天和第14天,觀察所有大鼠面部有無明顯變化,并采用激光多普勒灌注成像儀PeriScan PIM Ⅱ系統(tǒng)觀察所有大鼠右唇微循環(huán)血流灌注變化。

1.4 數(shù)據(jù)采集

于造模后1天和治療后第7天、第14天時,按Simone10分法[2]對其神經(jīng)功能進行評分,去除評分為4分以下的動物。Simone10分法評定如下,1分為無觸須運動且胡須方向向后,無眼閉和瞬目反射;2分為輕微觸須運動且胡須方向向后,眼部肌肉緊張;3分為較大觸須運動且方向向后,存在瞬目反射伴50%眼閉;4分為正常運動且方向向后,存在瞬目反射伴75%眼閉;5分為正常運動且方向向前,完全存在瞬目反射。胡須運動和眼部肌肉運動所得評分相加,一共10分。

由專人操作,于造模后1天和治療后第7天、第14天時,大鼠稱重后按前述方法麻醉,室內(nèi)溫度保持在15℃～20℃,口唇、黏膜溫度30℃～32℃,仰臥位暴露嘴唇,取右側(cè)嘴唇兩端連線的中點,取直徑為0.2 cm的圓形測量面積,采用激光多普勒灌注成像儀進行檢查,獲得微循環(huán)血流灌注圖及微循環(huán)血流灌注值(測量體積內(nèi)血細胞濃度與血細胞平均運動速度的乘積,單位PU)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理,統(tǒng)計描述用均數(shù)±標準差表示,組間比較用方差分析,方差齊性時用 LSD檢驗,方差不齊時用Dunnett-t檢驗,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠右側(cè)嘴唇血流灌注圖區(qū)域顏色比較

紅色區(qū)域表示血流灌注豐富,黃色和綠色區(qū)域表示血流灌注稍差,藍色區(qū)域表示血流灌注差。治療7 d后,A組測量區(qū)域以黃色為主;B組圖測量區(qū)域以紅色、黃色為主,黃色居多;C組和D組測量區(qū)域以紅色和黃色為主,E組以紅色為主,部分區(qū)域見黃色。治療14 d后,A組測量區(qū)域依舊以黃色為主,但顏色較淡;B組和C組測量區(qū)域以黃色為主,但見少許綠色;D組測量區(qū)域以黃色為主,可見點狀分布的紅色和綠色;E組以黃色和紅色為主。詳見圖1和圖2。

2.2 手術(shù)前后大鼠口唇血流變化

假手術(shù)組術(shù)后與術(shù)前比較口唇血流灌注無明顯變化(P＞0.05),手術(shù)組大鼠造模后口唇血流灌注比術(shù)前明顯上升(P＜0.01),本實驗結(jié)果表明,周圍性面癱大鼠模型會造成大鼠口唇血流灌注的明顯升高。詳見表1。

表1 手術(shù)前后大鼠口唇血流變化 (±s,PU)

表1 手術(shù)前后大鼠口唇血流變化 (±s,PU)

注:與同組術(shù)前比較1)P＜0.01

組別 n 術(shù)前 術(shù)后假手術(shù)組 14 133.22±27.80 128.10±31.28手術(shù)組 56 130.47±22.29 180.76±21.761)

圖1 第7天時各組大鼠嘴唇血流灌注圖的比較

圖2 第14天時各組大鼠嘴唇血流灌注圖的比較

2.3 各組大鼠治療后右側(cè)口唇微循環(huán)血流灌注值比較

表2 各組大鼠右側(cè)口唇血流灌注量值比較 (±s,PU)

表2 各組大鼠右側(cè)口唇血流灌注量值比較 (±s,PU)

注:與假手術(shù)組相比1)P＜0.05,2)P＜0.01;與面癱模型組比較3)P＜0.01;與普通針刺組比較4)P＜0.05;與同組7 d比較5)P＜0.01

組別 n 治療時間7 d 14 d假手術(shù)組 14 130.36±28.56 131.16±22.84基礎(chǔ)西藥組 14 151.44±15.801)3) 141.61±13.133)粗針針刺組 14 163.26±20.462) 133.30±21.703)4)5)普通針刺組 14 165.43±24.572) 153.20±30.731)面癱模型組 14 178.16±12.572) 169.47±9.792)

面癱模型組與同時相假手術(shù)組比較,口唇血流灌注量有明顯差異(P＜0.01),但面癱模型組右側(cè)口唇血流灌注量隨著時間的延長有緩慢降低的趨勢。各組隨著治療時間的延長右側(cè)口唇血流灌注量均有恢復(fù)正常的趨勢,在治療7 d時,各組口唇血流灌注量平均值均高于假手術(shù)組(P＜0.05),治療14 d后,基礎(chǔ)西藥組和粗針針刺組右側(cè)口唇血流灌注量平均值下降比較明顯,與面癱模型組比較均有明顯差異(P＜0.05),普通針刺組和基礎(chǔ)西藥組與治療7 d時右側(cè)口唇血流灌注量平均值無明顯差異?；A(chǔ)西藥組和粗針針刺組均能恢復(fù)到假手術(shù)組水平,且比治療7 d時明顯改善右側(cè)口唇血流灌注量(P＜0.05)。提示粗針能使面癱模型大鼠口唇微循環(huán)接近正常水平,并且要優(yōu)于普通針刺,在統(tǒng)計學(xué)上有差異,與西藥治療無明顯區(qū)別,且在統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異。詳見表2。

2.4 各組大鼠行為學(xué)評分比較

在治療7 d時,各治療組大鼠行為學(xué)評分均高于面癱模型組(P＜0.01);與普通針刺組比較,基礎(chǔ)西藥組大鼠行為學(xué)評分較高(P＜0.05),粗針針刺組則比普通針刺組行為學(xué)評分高,但兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。在14 d時,各治療組大鼠行為學(xué)評分均高于面癱模型組(P＜0.01),與普通針刺組比較,基礎(chǔ)西藥組大鼠行為學(xué)評分較高,但兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),粗針針刺組大鼠行為學(xué)評分較高,兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。除假手術(shù)組外,各組大鼠在14 d時行為學(xué)評分均與7 d時的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

表3 各組大鼠行為學(xué)評分比較 (±s,分)

表3 各組大鼠行為學(xué)評分比較 (±s,分)

注:與假手術(shù)組相比1)P＜0.05,2)P＜0.01;與面癱模型組比較3)P＜0.01;與普通針刺組比較4)P＜0.05;與同組7 d比較5)P＜0.01

組別 n 治療時間7 d 14 d假手術(shù)組 14 10.00±0.00 10.00±0.00基礎(chǔ)西藥組 14 9.00±0.002)3)4) 9.53±0.512)3)5)粗針針刺組 14 8.07±0.752)3) 9.61±0.501)3)4)5)普通針刺組 14 7.84±0.372)3) 9.23±0.432)3)5)面癱模型組 14 6.08±0.282) 7.09±0.302)5)

3 討論

激光多普勒成像儀可用于無創(chuàng)組織血流灌注量圖像化及量化檢查,其通過低能量激光束的掃描,生成監(jiān)測區(qū)域的血流灌注量彩色圖像,因此可以監(jiān)測健康或者病理組織的微循環(huán)狀況。本研究中應(yīng)用了儀器系統(tǒng)具備的同時記錄檢測部位血流值和直觀圖像的功能,進行圖像的觀察對照和檢測血流值的統(tǒng)計學(xué)對照。本研究參考相關(guān)文獻[4]以口唇黏膜的微循環(huán)檢測作為了解面肌血循環(huán)功能狀態(tài)的指標來觀察周圍性面癱的病情及療效。

針刺療法在臨床應(yīng)用較多[5-6],包括傳統(tǒng)針灸療法及粗針刺法等。本研究采用的粗針平刺法有別于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的針灸療法。首先針具的直徑為 1.0 mm,而普通針灸針直徑多在0.18～0.35 mm之間;其次施針部位在督脈上,而傳統(tǒng)針灸多在面部穴位上施針。本研究參考相關(guān)文獻[7]將粗針刺入大鼠后留針時間定為1 h;根據(jù)人體與大鼠脊椎的長寬比較,確定實驗所用的粗針直徑為0.25 mm,體針直徑為0.18 mm。

周圍性面癱的病理改變主要為面神經(jīng)水腫,可見炎細胞浸潤,髓鞘或軸突有不同程度的變性,以在莖乳孔和面神經(jīng)管內(nèi)的部分尤為顯著[8]。故現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論主張應(yīng)改善局部血液循環(huán),解除血管痙攣,促使局部水腫炎癥的及早消退,恢復(fù)神經(jīng)機能,防止癱瘓肌的過度牽引。因此治療上可以通過促進局部血液循環(huán)的改善,解除血管痙攣就可促周圍性面癱的恢復(fù)。其中微循環(huán)障礙主要表現(xiàn)為血管通透性和血漿容量發(fā)生變化[9],肌肉內(nèi)壓力升高[10]。但目前有學(xué)者[11]發(fā)現(xiàn)面神經(jīng)炎急性期患者的頭面部遠紅外熱像特征以充血性改變?yōu)橹?。說明面癱發(fā)生時,面部組織可能由于面部組織出現(xiàn)炎癥反應(yīng),微血管擴張而出現(xiàn)充血現(xiàn)象。面癱發(fā)病急性期面神經(jīng)微循環(huán)障礙并不能馬上導(dǎo)致面部肌肉微循環(huán)的障礙。實驗中造模前后測量大鼠口唇微循環(huán)值也證實面癱急性期大鼠口唇微循環(huán)以充血性改變?yōu)橹鳌?/p>

本實驗以大鼠口唇黏膜的微循環(huán)檢測作為了解面肌血循環(huán)功能狀態(tài)的指標以及大鼠面部行為學(xué)觀察來觀察周圍性面癱的病情及療效。有研究發(fā)現(xiàn)[12],針刺能改善模型大鼠患肢活動,促進痛覺、觸覺恢復(fù),改善血液流變學(xué)各項指標,減輕炎癥反應(yīng),改善神經(jīng)根變性,降低炎癥因子水平。本實驗結(jié)果顯示經(jīng)過粗針督脈平刺治療后,大鼠口唇血流灌注量的值是不斷降低最后接近正常?？赡苁且驗槊姘c早期,面部組織出現(xiàn)炎癥反應(yīng),微血管擴張。粗針督脈平刺后,面部組織的炎癥反應(yīng)逐漸消失,面部微血管充血逐漸減輕,最后恢復(fù)正常,因此口唇微循環(huán)灌注量的值也隨著治療逐漸降低最后恢復(fù)正常。不同的治療方式均能降低面癱模型大鼠的口唇微循環(huán)值,減輕炎癥反應(yīng),并對行為學(xué)有明顯改善作用,也證明了粗針督脈平刺對周圍性面癱大鼠面神經(jīng)的炎癥的消除,對充血微血管的恢復(fù)有積極作用,且粗針針刺的遠期療效顯著。本實驗雖在一定程度上通過對口唇微循環(huán)灌注量的測量和行為學(xué)功能的評分了解面癱大鼠的恢復(fù)情況,但并不能直接反映大鼠面神經(jīng)局部的血流灌注情況,面部組織微循環(huán)與面神經(jīng)周圍微循環(huán)的關(guān)系尚待進一步研究。

[1]邱輝,張志光,張洪來,等.針刺治療面神經(jīng)損傷的動物模型制作[J].廣東牙病防治,2002,10(3):169-170.

[2]de Faria SD, Testa JR, Borin A, et al. Standardization of techniques used in facial nerve section and facial movement evaluation in rats[J].Braz J Otorhinolaryngol, 2006,72(3):341-347.

[3]華興邦.大鼠穴位圖譜的研制[J].實驗動物與動物實驗,1991,1(1):13-15.

[4]李堅將,劉輝.針灸治療面癱及對口唇、甲襞微循環(huán)的影響[J].上海針灸雜志,2001,20(5):16-18.

[5]Zhang TT, Wang NH, He TY. Subcutaneous needling and peripheral facial palsy: a report of 70 cases[J]. J Acupunct Tuina Sci, 2007,5(2):118-120.

[6]Deng X, Bao CL, Zhang YL, et al. Clinical observation on 48 cases of peripheral facial paralysis treated by acupoint-penetrating acupuncture[J]. J Acupunct Tuina Sci, 2006,4(3):189-190.

[7]宣麗華,虞彬艷,高宏,等.粗針神道穴平刺治療面神經(jīng)炎臨床多中心研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2012,30(1):18-20.

[8]黃如調(diào),梁秀玲,劉卓霖.臨床神經(jīng)病學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1996:200-201.

[9]Bansch P, Lundblad C, Gr?nde PO, et al. A model for evaluating the effects of blunt skeletal muscle trauma on microvascular permeability and plasma volume in the rat[J]. Shock, 2010,33(4):399-404.

[10]Schaser KD, Vollmar B, Menger MD, et al. In vivo analysis of microcirculation following closed soft-tissue injury[J]. J Orthop Res, 1999,17(5):678-685.

[11]周章玲,姜岳波,李高波,等.面神經(jīng)炎急性期患者頭面部的遠紅外熱像特征分析[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報,2011,9(11):1121-1225.

[12]莊子齊,王敦建,唐方根,等.針刺對神經(jīng)根炎模型大鼠神經(jīng)功能、血液流變學(xué)和炎癥因子的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2006,23(6):513-517.