嚴(yán)子軍，韋壽蓮，汪洪武，黃美容

（肇慶學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，廣東 肇慶 526061）

0 前言

隨著人民生活水平的不斷提高及科學(xué)技術(shù)日新月異的發(fā)展，人們對(duì)化妝品的需求開始從過去的單一護(hù)理型向現(xiàn)代功能型轉(zhuǎn)化.近年來，人們的生活、工作節(jié)奏不斷加快，由于污染而引起的環(huán)境和臭氧層的破壞，使得人體黑色素形成酶的代謝紊亂加重，從而導(dǎo)致患有各種黑色斑的人群日益增多.據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有70%的被調(diào)查者認(rèn)為美容的最大障礙之一是面部雀斑、黃褐斑、老年斑的形成[1-3].研制美白祛斑型化妝品成為近年來化妝品研究領(lǐng)域的熱門課題.由于人們對(duì)化妝品功效的要求越來越高，對(duì)返樸歸真的天然化妝品日漸向往，以及人們環(huán)保意識(shí)的提高，人們開始期待無毒、無污染化妝品的出現(xiàn).研制以中草藥為原料的功能性化妝品是化妝品業(yè)未來的必然發(fā)展趨勢(shì)，此類新產(chǎn)品有著巨大的經(jīng)濟(jì)發(fā)展空間.據(jù)此,筆者選擇了具有抑制酪氨酸酶活性的3種中草藥（川芎、白芷、益母草）[3]，以其為原料制成美白祛斑霜，用于涂擦患部以達(dá)到祛斑、美白和美容之功效.目前在化妝品中添加的皮膚美白劑，不但要具有美白效果，而且要無副作用，故而一般取自天然植物提取物.迄今為止，已有許多在化妝品中添加有特殊療效中草藥的研究成果，但尚未見將川芎、白芷、益母草三者應(yīng)用于化妝品的研究報(bào)道.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)所用材料如下：川芎、白芷、益母草(購于肇慶)；無水乙醇、甘油(A.R,天津市廣成化學(xué)試劑有限公司)；pH值=6.86的磷酸鈉緩沖溶液(上海雷磁·創(chuàng)益儀器儀表有限公司)；L-酪氨酸(上海實(shí)驗(yàn)試劑有限公司)；酪氨酸酶(自制)；硬脂酸、三乙醇胺(A.R,天津市博迪化工有限公司)；棕櫚酸異丙酯(工業(yè)級(jí),肇慶華達(dá)化工廠)；羊毛酯(C.P,廣州化學(xué)試劑分公司分裝)；橄欖油(C.P,上海衛(wèi)輝化學(xué)試劑廠)；土溫-80(C.P,天津市元立化工有限公司).

實(shí)驗(yàn)所用儀器如下：干燥箱(202-2型，上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠)；可控硅恒溫水浴鍋(上海錦屏儀器儀表有限公司)；SHZ-CB型循環(huán)水式多用真空泵(河南鞏義市英峪予華儀器廠)；22PC可見分光光度計(jì)；CJJ78-1磁力攪拌器(江蘇金壇市中大儀器廠)；AE240電子分析天平；800型離心沉淀器(廣東省佛山市醫(yī)療機(jī)械廠)；沙松雪爾冰柜(荊沙市雪爾冷機(jī)有限公司).

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)評(píng)價(jià)法(又稱酶法)，即將酪氨酸酶加入酪氨酸中，在此體系中分別加入和不加入川芎、白芷、益母草提取液；然后利用可見分光光度計(jì)在390 nm波長(zhǎng)下分別測(cè)定其吸光度，計(jì)算出中草藥提取液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率.抑制率越高則黑色素就越難形成，美白祛斑效果也就越好[4-5].

1.2.1 川芎、白芷、益母草有效成分的提取

川芎、白芷、益母草經(jīng)干燥粉碎后，分別稱取25 g置于1 000mL三頸燒瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇250mL，在室溫下放置浸泡24 h后，在60～65℃恒溫回流提取3 h，冷卻后減壓抽濾；濾渣加適量乙醇繼續(xù)回流3 h，過濾后合并濾液，在恒溫減壓下蒸發(fā)濃縮，得膏狀提取物.

1.2.2 酪氨酸酶的制備

在預(yù)冷的研缽中放入12.5 g冰凍的碎土豆，加入冰冷的25mL磷酸鈉緩沖溶液(pH值=6.86)，研磨擠壓約1min，用4層紗布過濾，將濾液立即離心分離(4 000 r/min,5min).傾出上層清液保存于冰浴或冰箱中(4℃以下保存，由于酪氨酸酶的穩(wěn)定性不好，因此必須在臨用前配制).

1.2.3 酪氨酸酶抑制率的測(cè)定

在4支試管中，按表1所列項(xiàng)目準(zhǔn)確吸取第1～4組反應(yīng)液，混勻.

表1 待測(cè)液的組成

將上述混合物放在37℃的水浴中恒溫靜置10min，再分別加入0.5mL的酪氨酸酶溶液，混勻反應(yīng)約1min后，迅速轉(zhuǎn)移至3mL比色皿中，測(cè)吸光度A，每組平行測(cè)定2次，按公式(1)計(jì)算其對(duì)酪氨酸酶活性的抑制率:

川芎、白芷、益母草及其三者的混合提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.1%，0.2%，0.5%，0.8%，1.0%和1.5%.

1.3 川芎、白芷、益母草美白祛斑霜的配制

1.3.1 參考配方

油相:硬脂酸(4%～5%),棕櫚酸異丙酯(5%～6%),羊毛脂(1%～1.5%),橄欖油(0.5%～1%)；水相：甘油(6%～7%),三乙醇胺(0.2%～0.3%),吐溫-80(2%～3%)，川芎、白芷、益母草浸膏(1.0%～2.0%),水(余量),香精(適量),防腐劑(適量).

1.3.2 配制方法

按上述配方將油相和水相分別置于燒杯中，于磁力加熱攪拌器攪拌下加熱至85℃，在呈現(xiàn)均相后控制攪拌速率，同時(shí)緩慢地將油相加入水相中[6]，溫度保持在85℃反應(yīng)20min.停止加熱后繼續(xù)攪拌，在溫度緩慢降至50℃時(shí)加入適量香精和防腐劑，繼續(xù)降溫使溫度達(dá)到室溫，即得目標(biāo)產(chǎn)物.

2 結(jié)果與討論

2.1 川芎、白芷、益母草提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與酪氨酸酶活性抑制率的關(guān)系

按照川芎、白芷、益母草及其三者混合提取物的不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別配制測(cè)試液，混合提取物中川芎、白芷、益母草的比例為2：2：1.從表2可知，川芎與白芷都具有較高的酪氨酸酶活性抑制率，而益母草則相對(duì)較低；川芎、白芷和益母草三者混合也具有較高的抑制率，這表明三者無論是單一還是混合都具有良好的美白祛斑效果.3種添加物對(duì)酪氨酸酶抑制率的影響情況如下：川芎、白芷、益母草三者混合＞川芎＞白芷＞益母草，且抑制率隨著川芎、白芷和益母草提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大而增高.川芎、白芷、益母草的混合提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制率比三者中任何單體都高，這可能是由于川芎、白芷、益母草三者協(xié)同具有增效作用，因此，配制美白祛斑霜最終確定選用川芎、白芷、益母草三者的混合提取物.從其對(duì)酪氨酸酶的抑制率來看，加入3種物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)越大，抑制率就越高，美白祛斑的效果也越好；但藥物添加過多會(huì)導(dǎo)致霜體顏色過深，這會(huì)影響其“賣相”.經(jīng)過綜合考慮，我們認(rèn)為添加物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)定為1.3%比較合適，此時(shí)川芎、白芷、益母草三者提取物對(duì)絡(luò)氨酸酶的抑制率達(dá)到80.53%，霜體的顏色為微淡褐色.

表2 川芎、白芷、益母草提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)與酪氨酸酶活性抑制率的關(guān)系

2.2 川芎、白芷、益母草美白祛斑霜的性能評(píng)價(jià)

2.2.1 川芎、白芷、益母草美白祛斑霜的質(zhì)量評(píng)價(jià)

依照QB/T1857—1993標(biāo)準(zhǔn)[7]對(duì)川芎、白芷、益母草美白祛斑霜的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表3.本實(shí)驗(yàn)研制的川芎、白芷、益母草美白祛斑霜，在感官及理化指標(biāo)方面均符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求.

表3 川芎、白芷、益母草美白祛斑霜的感官指標(biāo)及理化檢測(cè)結(jié)果

2.2.2 產(chǎn)品功能檢驗(yàn)

隨機(jī)抽取20位女性試用者，分別進(jìn)行1個(gè)月的美白祛斑霜成品試用.試用期間觀察效果，并收集試用者的意見及對(duì)產(chǎn)品的看法，結(jié)果見表4.

表4 產(chǎn)品功能檢驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

川芎、白芷、益母草及三者的混合提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用較強(qiáng)，抑制率隨著提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大而增高，其中川芎、白芷、益母草三者混合提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制率最高.用川芎、白芷、益母草三者混合提取物作為天然添加劑配制的美白祛斑霜具有潤膚、美白祛斑的作用，符合國標(biāo)的質(zhì)量要求.

[1]張秀芳,賀文英,常彥景,等.幾種中草藥美白護(hù)膚化妝品的研制[J].內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報(bào),1997,18(4):58-59.

[2]張寶元,張玉珍,徐艷.天然中草藥美白祛斑化妝品[J].日用化學(xué)品科學(xué),2004,27(2):31-33.

[3]王福興,陳前進(jìn).具抑制酪氨酸酶活性祛斑增白藥物[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,1999,18(8):479.

[4]王培義.化妝品——原理·配方·生產(chǎn)工藝[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2004:14.

[5]張秀芳,賀文英,常彥景，等.幾種中草藥美白護(hù)膚化妝品的研制[J].內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報(bào),1997,18(4):58-59.

[6]趙會(huì)科,姜艷.甘草美白日霜的研制[J].精細(xì)石油化工進(jìn)展,2007,8(6):31-33.

[7]王慎敏,唐冬雁.日用化學(xué)品化學(xué)——日用化學(xué)品化學(xué)配方設(shè)計(jì)及生產(chǎn)工藝[M].哈爾濱:哈爾濱工業(yè)大學(xué)出版社,2001:346-347.