蔡 培 (天津市紅橋醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津 300000)

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，檢驗(yàn)技術(shù)、檢測(cè)項(xiàng)目的不斷更新，不同型號(hào)不同檢測(cè)原理的自動(dòng)化血凝儀在國(guó)內(nèi)逐步得到廣泛使用，為了保證同一檢測(cè)項(xiàng)目在不同儀器上分析結(jié)果的一致性，美國(guó)臨床病理家學(xué)會(huì)(CAP)的實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)中要求，實(shí)驗(yàn)室每年至少要進(jìn)行2次比對(duì)研究。本研究參照美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)頒布的EP9－A文件即《用患者樣本進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)及偏倚評(píng)估》的要求，對(duì)Start－4半自動(dòng)血凝儀與Stago全自動(dòng)血凝儀測(cè)定纖維蛋白原(FIB)的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)和偏倚評(píng)估[1]，了解兩者間的差異，判斷同時(shí)使用2臺(tái)儀器檢測(cè)相同項(xiàng)目，能否得到一致的檢測(cè)結(jié)果。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)方法用的儀器:法國(guó)思塔高公司的Start－4半自動(dòng)血凝儀;對(duì)比方法用的儀器:法國(guó)stago全自動(dòng)血凝儀。

1.2 試劑:stago公司提供的配套STA－FIBRINOGEN試劑盒及質(zhì)控品。

1.3 標(biāo)本來(lái)源:40例門診患者，年齡在25～65之間，空腹取靜脈血以109 mmol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝，3000 r/min離心10min，取血漿用于檢測(cè)。

1.4 方法[2～5]:將stago全自動(dòng)血凝儀的測(cè)定結(jié)果設(shè)為對(duì)照組(X組)，Start－4半自動(dòng)血凝儀的測(cè)定結(jié)果設(shè)為實(shí)驗(yàn)組(Y組)，兩種方法均采用Clauss法[6]。每天先進(jìn)行質(zhì)控測(cè)定，結(jié)果均在控，再進(jìn)行樣本測(cè)定，取8個(gè)新鮮的實(shí)驗(yàn)樣本，分別采用對(duì)比方法與實(shí)驗(yàn)方法對(duì)這8個(gè)樣品進(jìn)行雙份重復(fù)測(cè)定，測(cè)定順序?yàn)?－8，8－1，以上步驟重復(fù)5 d。

2 數(shù)據(jù)處理[2－5]

2.1 檢查離群點(diǎn)

2.1.1 檢查方法內(nèi)離群點(diǎn):計(jì)算對(duì)比方法(X)和實(shí)驗(yàn)方法(Y)每樣本雙份測(cè)定差值的絕對(duì)值(DXi、DYi)和差值絕對(duì)值的均值(DX、DY)以及相對(duì)的差值絕對(duì)值(DXi'、DYi')和相對(duì)的差值絕對(duì)值的均值(DX'、DY')。

2.1.2 檢查方法間離群點(diǎn):計(jì)算兩方法間絕對(duì)差值(Eij)、平均絕對(duì)差值(E)和相對(duì)的絕對(duì)差值(Eij')、相對(duì)的平均絕對(duì)差值(E')。EP9－A規(guī)定同時(shí)超出相對(duì)限和絕對(duì)限則視為離群點(diǎn)，且允許從分析數(shù)據(jù)中刪除2.5%的點(diǎn)。如果有樣本測(cè)定結(jié)果超過(guò)此界限，則需計(jì)算相對(duì)差值可接受范圍。

2.2 相關(guān)性

2.2.1 Yi對(duì)Xi的散點(diǎn)圖:以實(shí)驗(yàn)方法每樣本雙份測(cè)定的均值(Yi)為Y軸，對(duì)比方法每樣本雙份測(cè)定的均值(Xi)為X軸，從起點(diǎn)開(kāi)始，以相等距離為X、Y軸作刻度，通過(guò)原點(diǎn)作圖，檢查兩種方法在整個(gè)檢測(cè)范圍內(nèi)的線性關(guān)系。

2.2.2 所有結(jié)果的散點(diǎn)圖:以實(shí)驗(yàn)方法每次測(cè)定值(Yij)為Y軸，對(duì)比方法每份樣本雙份測(cè)定的均值(Xi)為X軸，檢查兩種方法各重復(fù)測(cè)定結(jié)果間的線性關(guān)系，以上述同樣方法作圖。

2.2.3 偏差圖:以每個(gè)樣本兩種方法雙份測(cè)定的均值差(Yi－Xi)為Y軸，對(duì)比方法每樣本雙份測(cè)定的均值(Xi)為X軸，以直線X=0位水平中線作圖，檢查兩種方法重復(fù)測(cè)定均值間的差異，反映兩種方法間是否存在系統(tǒng)誤差。

2.2.4 偏差圖:以每樣本兩種方法每次測(cè)定的差(Yij－Xij)為Y軸，對(duì)比方法每樣本雙份測(cè)定的均值(Xi)為X軸，以上述同樣方法作圖，檢查兩種方法重復(fù)測(cè)定均值間的差異。

2.3 X取值范圍檢查:用實(shí)驗(yàn)方法與對(duì)比方法的相關(guān)系數(shù)(r)粗略估計(jì)X的分布范圍是否合適，如果r≥0.975(或者是r2≥0.95)則認(rèn)為X范圍適合，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠。如果r＜0.975，可以通過(guò)測(cè)定另外標(biāo)本來(lái)擴(kuò)寬X范圍，如果X范圍不能再擴(kuò)寬，可以使用EP9－A提供的分析偏差估計(jì)方法代替線性回歸來(lái)估計(jì)平均偏差。

2.4 計(jì)算線性回歸方程

2.5 計(jì)算預(yù)期偏差和相對(duì)偏差:我們選定FIB醫(yī)學(xué)決定水平的兩個(gè)端點(diǎn)(2 g/L，4 g/L)和所用儀器的線性范圍上限12 g/L，來(lái)計(jì)算預(yù)期偏差[6]。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所得數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

3 結(jié)果

3.1 檢查離群點(diǎn):對(duì)比方法(X)的絕對(duì)偏差界限值是4 DX，即為0.943，將每個(gè)DXi與此值相比無(wú)超出此范圍的點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)方法(Y)的絕對(duì)偏差界限值是4DY為0.974，將每個(gè)DYi與此值相比無(wú)超出范圍的點(diǎn)。方法間絕對(duì)偏差界限值為4E，即為0.809，將每個(gè)Eij與此值相比無(wú)超出此范圍的點(diǎn)，相對(duì)可接受限為4 E'，即0.197。由以上結(jié)果可知，兩種方法測(cè)定的結(jié)果均無(wú)離群點(diǎn)。

3.2 相關(guān)性

3.2.1 Yi對(duì)Xi的散點(diǎn)圖:見(jiàn)圖1。

3.2.2 所有結(jié)果的散點(diǎn)圖:見(jiàn)圖2。

3.2.3 偏差圖:見(jiàn)圖3。

3.2.4 偏差圖:見(jiàn)圖4。

圖1 雙份測(cè)定平均值散點(diǎn)圖

3.3 X取值范圍檢查:我們計(jì)算得 FIB的相關(guān)系數(shù)r=0.994，大于EP9－A文件要求的0.975，故可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目所取的X范圍合適，數(shù)據(jù)滿足要求。

3.4 線性回歸:用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包計(jì)算得a=0.121，b=0.974，直線回歸方程為 Y=0.974X+0.121，r=0.994。

3.5 計(jì)算預(yù)期偏差和相對(duì)偏差:結(jié)果見(jiàn)表1。

圖2 所有結(jié)果的散點(diǎn)圖

圖3 偏差圖－兩方法雙份測(cè)定的均值差對(duì)對(duì)比方法雙份測(cè)定均值

圖4 偏差圖－兩方法每次測(cè)定結(jié)果之差對(duì)對(duì)比方法雙份測(cè)定均值

表1 預(yù)期偏差與相對(duì)偏差

4 討論

纖維蛋白原(FIB)是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，由肝細(xì)胞合成，除參與止凝血過(guò)程外，還通過(guò)與血小板膜上纖維蛋白原受體結(jié)合而導(dǎo)致血小板聚集，檢測(cè)其血漿含量對(duì)中風(fēng)、肝硬化、彌散性血管內(nèi)凝血、冠心病、急慢性感染等疾病的診斷和治療具有一定的參考價(jià)值[7]，因而在臨床上廣受重視，對(duì)其檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性要求也越來(lái)越高，其測(cè)定方法較多，其中克勞斯法(Clauss法)已成為測(cè)定FIB最常用的方法[8]，逐漸替代了傳統(tǒng)的物理、化學(xué)、免疫等方法，為美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)推薦的參考方法。本文所用的兩種儀器均為Clauss法，區(qū)別在于所用的血凝儀不同。ISO15189文件指出:“當(dāng)同樣的檢驗(yàn)應(yīng)用不同程序或設(shè)備，或在不同地點(diǎn)進(jìn)行，或以上各項(xiàng)均不同時(shí)，應(yīng)有確切機(jī)制以驗(yàn)證在整個(gè)臨床適用區(qū)間內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性”。應(yīng)按適合于程序和設(shè)備特性的規(guī)定周期驗(yàn)證[9]。本文應(yīng)用兩種不同的血凝儀檢測(cè)FIB含量，為保證不同檢測(cè)儀器之間的結(jié)果具有可比性有必要對(duì)不同儀器間測(cè)定結(jié)果的一致性進(jìn)行評(píng)價(jià)。本試驗(yàn)嚴(yán)格按照NCCLSEP9－A的流程對(duì)2種儀器測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比對(duì)，2種儀器的重復(fù)性均較好，方法內(nèi)和方法間都沒(méi)有離群點(diǎn)，兩方法整體差異較小，僅在高值結(jié)果區(qū)出現(xiàn)輕微差異，究其原因主要是半自動(dòng)血凝儀采用手工加樣，Clauss法濃度越高檢測(cè)時(shí)間越短，在檢測(cè)高濃度FIB標(biāo)本時(shí)手工加樣無(wú)法達(dá)到儀器加樣的精密度，會(huì)對(duì)檢測(cè)時(shí)間產(chǎn)生一些影響。兩種儀器的測(cè)定結(jié)果相關(guān)性較好，直線回歸方程為Y=0.974X+0.121，r=0.994。兩種儀器測(cè)定血漿FIB水平可以得到基本一致的結(jié)果。最大相對(duì)偏差是3.5%，最小是0.43%，在分析范圍內(nèi)的相對(duì)偏差較小可滿足臨床要求。

[1]The National Committee for Clinical Laboratory Standards.Method Comparison and Bias Eatimation Using Patient Samples Approved Guideline[S].NCCLS，EP9－ A，1995.

[2]朱文元，廖昆靈，劉 芹.不同凝血分析儀檢測(cè)纖維蛋白原結(jié)果的一致性評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(4):479.

[3]張永強(qiáng).應(yīng)用EP9－A指導(dǎo)文件對(duì)全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)結(jié)果比對(duì)分析[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2010，17(10):938.

[4]楊永強(qiáng)，麥 力.應(yīng)用NCCLS Ep9－A2對(duì)兩種血糖儀的血糖檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2012，14(1):108.

[5]王學(xué)剛，孫國(guó)棟，李艷艷，等.應(yīng)用NCCLS EP9－A文件對(duì)街頭半動(dòng)生化分析儀ALT測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)[J].河北醫(yī)藥，2011，33(22):3397.

[6]馮仁豐.臨床檢驗(yàn)管理技術(shù)基礎(chǔ)[J].上海:上?？茖W(xué)文獻(xiàn)出版社，2003:5－8，32－34，106－136.

[7]董立杰，王建國(guó).影響纖維蛋白原檢測(cè)結(jié)果的因素分析[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，10(20):3894.

[8]戴慶忠，孫昌君，秦素娟.某全自動(dòng)血凝儀對(duì)兩種纖維蛋白原測(cè)定方法的評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33(2):211.

[9]陳先榮，李 智，劉一平.NCCLS EP9－A文件在全自動(dòng)生化分析儀評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28(4):407.