沈萍章海周明

南昌市第九醫(yī)院制劑室，江西 南昌 330002

正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選益腎解毒抗纖顆粒的制備工藝

沈萍章海周明

南昌市第九醫(yī)院制劑室，江西 南昌 330002

目的:優(yōu)選益腎解毒抗纖顆粒制備工藝。方法:以浸膏得率和何首烏中二苯乙烯苷的含量為考察指標(biāo)，通過(guò)L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選水提制備工藝條件，確定益腎解毒抗纖顆粒最佳制備工藝。結(jié)果:水提制備工藝影響因素大小依次是:提取時(shí)間 (B)＞提取次數(shù) (C)＞加水倍量 (A)，最佳制備工藝條件為處方藥材加20倍水，提取2次，每次1h。結(jié)論:該制備工藝合理可行，有效成分提取率高。

益腎解毒抗纖顆粒;正交實(shí)驗(yàn);制備工藝

益腎解毒抗纖顆粒是我院院內(nèi)制劑，由巴戟天、熟地、何首烏、肉蓯蓉、虎杖、蛇舌草等九味中藥組成，具有解毒、祛濕、保肝、益腎等功效，用于慢性乙型肝炎、早期肝纖維化。方中君藥何首烏的重要活性成分二苯乙烯苷具有抗氧化、清除自由基，降低膽固醇、保肝等多重功能［1－2］。為了發(fā)揮藥物最佳療效，優(yōu)化制備工藝，運(yùn)用L9(34)正交試驗(yàn)，以浸膏得率和何首烏中二苯乙烯苷的含量為考察指標(biāo)，對(duì)其水提部分制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。

1 儀器與材料

安捷倫Agilent 1100高效液相色譜儀;KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司);Xs204分析天平 (梅特勒－托利多儀器有限公司);處方藥材(安徽亳州醫(yī)藥有限公司)均符合《中國(guó)藥典》2010版一部標(biāo)準(zhǔn);對(duì)照品二苯乙烯苷 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110844－201003);益腎解毒抗纖顆粒 (自制，批號(hào)121016)，益腎解毒抗纖顆粒陰性樣品按益腎解毒抗纖顆粒處方組成比例及其制備工藝步驟除去何首烏依法制備。乙腈為色譜純，水為注射用水，其余試劑為AR級(jí)。

2 方法與結(jié)果

因加水倍量 (A)、提取時(shí)間 (B)、提取次數(shù) (C)是影響提取效果的主要因素，因此采用這3個(gè)因素作為考察指標(biāo)，以浸膏得率和何首烏中二苯乙烯苷的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行正交試驗(yàn)優(yōu)化。

2.1 藥物制備

2.1.1 處方 巴戟天15g，熟地15g，何首烏15g，肉蓯蓉15g，雞內(nèi)金 6g，枳殼 6g，夏枯草 6g，虎杖 12g，蛇舌草12g。

表1 因素與水平

2.1.2 制備 處方中9味藥，先將熟地、肉蓯蓉烘干(70℃)45分鐘，冷卻后粉碎成細(xì)粉 (80目)待用，其余6味按L9(34)正交試驗(yàn)表 (見(jiàn)表1)進(jìn)行煎煮提取，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.12－1.14(80℃)的清膏，取清膏加糊精適量及熟地、肉蓯蓉細(xì)粉，混勻，制粒，干燥，整粒，即得。

2.2 浸膏得率的測(cè)定 精密吸取按L9(34)正交表試驗(yàn)進(jìn)行提取的合并液50ml，置于105℃已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，加熱濃縮至近干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30分鐘，取出，立即稱重，按下列計(jì)算浸膏得率，浸膏得率=［W×V/(M×50)］ ×100%(W為浸膏質(zhì)量，V為樣品溶液體積，M為藥材質(zhì)量)。

2.3 供試品中二苯乙烯苷的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件［3－5］色譜柱:ODS－C18柱 (4.6mm ×250mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈 －水 (16:84)，流速:1.0ml/min;柱 溫:30℃;檢 測(cè) 波 長(zhǎng):320nm;進(jìn) 樣量:20μl。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取二苯乙烯苷標(biāo)準(zhǔn)品3.475mg，置于25ml容量瓶中，加25%乙醇溶解至刻度，搖勻，制成0.139mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取1.0ml置10ml容量瓶中，加25%乙醇稀釋至刻度，分別精密吸取0.0139mg/ml的 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液 2.5、5.0、7.5、10μl和0.139mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5μl，注入高效液相色譜儀中，以二苯乙烯苷濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為:Y=782150－2140.83，r=0.9998，線性范圍為0.03475～0.3475μg。

2.3.3 供試品的含量測(cè)定 取9份通過(guò)正交試驗(yàn)后制得的供試品2.0g，研細(xì)，精密稱取各0.2g，置具塞錐形瓶中，加入25%乙醇20ml，稱定重量，放入超聲波發(fā)生器中提取30min，放置室溫，稱重，用25%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)0.45μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取缺何首烏的陰性供試品，同法制備，分別精密量取供試品、陰性供試品溶液各20μl，按“2.3.1”項(xiàng)條件測(cè)定，計(jì)算二苯乙烯苷含量。

2.4 結(jié)果與分析 從浸膏得率和二苯乙烯苷的含量中可知，對(duì)藥物有效成分含量的影響程度依次為提取時(shí)間 (B)＞提取次數(shù) (C)＞加水倍量 (A)，各因素的最佳水平為A2B1C2，即處方藥材加水20倍，水提取2次，每次1h。正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

2.5 驗(yàn)證工藝 按正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出的最佳制備工藝條件連續(xù)生產(chǎn)3個(gè)批次，考察制備工藝的可靠性和穩(wěn)定性，結(jié)果表明該制備工藝生產(chǎn)的益腎解毒抗纖顆粒各種客觀指標(biāo)均符合要求，平均浸膏得率達(dá)28.51%，二苯乙烯苷含量6.27mg/g，浸膏得率和二苯乙烯苷含量與正交試驗(yàn)結(jié)果一致，表明該制備工藝具有可行性。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果L9(34)

表3 方差分析表

3 討論

由以上試驗(yàn)可知，影響益腎解毒抗纖顆粒水提工藝的最主要因素是提取時(shí)間，其次是提取次數(shù)，最后是加水倍量，即處方藥材加水20倍，水提取2次，每次1h，制備工藝實(shí)驗(yàn)也得以證實(shí)，優(yōu)選的最佳制備工藝具有可靠性、穩(wěn)定性及可行性，可用于該制劑的實(shí)際生產(chǎn)。水提浸膏的相對(duì)密度應(yīng)控制在1.12～1.14之間，測(cè)定時(shí)溫度為80℃，密度大小對(duì)顆粒的成型、顆粒的水分、溶化性、有效成分含量及鑒別、甚至衛(wèi)生學(xué)檢查都有直接或間接的影響，進(jìn)而會(huì)影響到整個(gè)制劑質(zhì)量。

［1］劉新橋，高文遠(yuǎn)，陳海霞.何首烏中二苯乙烯苷提取物的制備工藝及含量測(cè)定［J］.中國(guó)中藥雜志，2007，32(14):1474－1476.

［2］吳曉青.何首烏化學(xué)成分與藥理活性的研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(1):146－147.

［3］李紅娟，王春華，張偉.高效液相色譜法測(cè)定首烏精口服液中二苯乙烯苷的含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18(8):1838－1839.

［4］蔣小莉.精烏 (糖衣)片中何首烏的二苯乙烯苷含量測(cè)定［J］.中國(guó)中醫(yī)藥咨詢，2011，21(3):293－294.

［5］朱蘭蘭，遲雪潔，孫蓉.益腎烏發(fā)口服液中二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚的含量測(cè)定［J］.中國(guó)藥物警戒，2011，8(5):281－283.

R284.2

A

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沈萍，女，學(xué)士，副主任藥師。Tel:0791－88499563，13870822578;E－mail:wnshengping.163.com

2013.10.11)