★ 周燾 饒小勇 羅曉健 楊世林 (.廣州醫(yī)藥研究總院 廣州5040;.江西本草天工科技有限公司 南昌0006;.江西中醫(yī)學院 南昌0006)

人參養(yǎng)榮丸源自宋代《太平惠民和劑局方》，主要由人參、白芍、黃芪、當歸、五味子、肉桂、陳皮等12味中草藥組成。收載于《中華人民共和國藥典》(2010年版一部)，具有溫補氣血、養(yǎng)心安神之功［1］。本方臨床療效確切，主要用于心脾不足。氣血兩虧。形瘦神疲。食少便溏。病后虛弱等。傳統(tǒng)中藥丸劑存在著貯藏不便、易染菌、服用劑量大，病人服用困難等問題，影響了該方在臨床的廣泛應(yīng)用。為了能夠進一步提高有效成分的利用率，提高患者的順應(yīng)性，本文將以芍藥苷、橙皮苷的含量以及藥物的浸膏得率為指標，考察人參養(yǎng)榮方的提取工藝，為今后人參養(yǎng)榮丸的劑型改進奠定基礎(chǔ)。

1 儀器及試藥

Varian高效液相色譜儀(瓦里安公司)，METLER AB104－N分析天平(梅特勒－托利多儀器有限公司)，Adventurer AR5120天平(奧豪斯國際貿(mào)易有限公司)，KQ－250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)，真空泵ZXZ－0.5(30升)(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)，KDM－型調(diào)溫電熱套(山東鄄城縣新華儀器廠)，RE－52－05型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。

芍藥苷(批號為110736－200320，中國食品藥品檢定研究院提供)，橙皮苷(批號為110721－200211，中國食品藥品檢定研究院提供)，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純;藥材均購自江西省醫(yī)藥公司，經(jīng)鑒定均符合《中華人民共和國藥典》(2010年版一部)要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝

根據(jù)處方中藥物的性質(zhì)擬訂如下4種提取工藝方法。2.1.1 水提法(A工藝) 按處方稱取約0.3倍處方量的藥材3份，加10倍量水作為溶媒，加熱回流提取2次，每次1.5小時。首次提取用揮發(fā)油測定儀收集揮發(fā)油。合并水提取溶液，濾過，濾液減壓濃縮，拌入收集的揮發(fā)油，搖勻，用水定容。

2.1.2 醇提法(B工藝) 按處方稱取約0.3倍處方量的藥材3份，加入10倍量60%乙醇，加熱回流提取2次，每次1.5小時，合并兩次醇提液，濾過，濾液回收乙醇后，用水定容。

2.1.3 水提醇沉法(C工藝) 按處方稱取約0.3倍處方量的藥材3份，按水提法同法提取，首次提取收集揮發(fā)油。合并2次水提液，濾過，濾液濃縮到適量，加入乙醇，使含醇量達到60%，充分攪拌，靜置24小時，濾過，回收乙醇，濃縮，拌入收集的揮發(fā)油，用水定容。

2.1.4 醇水雙提法(D工藝) 按處方比稱取0.3倍處方量藥材3份，各將其中人參、茯苓、甘草、黃芪、當歸以10倍量的水作為溶媒加熱提取，其他藥材用10倍量60%的乙醇加熱提取。各提取2次，每次1.5小時，首次水提收集揮發(fā)油。合并水提液，濾過，濾液濃縮;合并醇提液，回收乙醇，然后將水提濃縮液與醇提濃縮液混勻，拌入揮發(fā)油，用水定容。

2.2 不同提取工藝提取液中芍藥苷、橙皮苷含量測定

2.2.1 樣品溶液的制備 (1)供試液的制備。芍藥苷供試液:取提取液適量，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL，水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容到10mL，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1mL，用甲醇稀釋至5mL，作為芍藥苷供試液。

橙皮苷供試液:取提取液適量，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL，水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容到10mL，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1mL，用甲醇稀釋至10mL，作為橙皮苷供試液。

(2)對照品溶液的制備。

芍藥苷對照品溶液:取芍藥苷對照品約2mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為芍藥苷對照品溶液。

橙皮苷對照品溶液:取橙皮苷對照品約3mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為橙皮苷對照品溶液。

(3)陰性供試液的制備

按處方比例稱取不含白芍(或陳皮)的原藥材，經(jīng)不同工藝提取后，按供試液制備法操作，得陰性對照溶液。

2.2.2 色譜條件 (1)芍藥苷色譜條件:色譜柱:Dikma TechnologiesⅡ Diamonsil TM(鉆石)C18(5μm ，4.6 mm ×250 mm)，流動相:甲醇 － 水(35∶65)，流速:1.0mL/分，檢測波長:230nm，柱溫:25℃。

(2)橙皮苷色譜條件:色譜柱:Dikma TechnologiesⅡDiamonsil TM(鉆石)C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流動相:甲醇－1%冰醋酸(45∶55)，流速:1.0 mL/分，檢測波長:283 nm，柱溫:25℃。

2.2.3 標準曲線的繪制 芍藥苷的標準曲線的繪制:取芍藥苷對照品適量，精密稱定，配置成濃度為0.160、0.107、0.080、0.040、0.020、0.010 mg/mL 的對照品溶液。進樣10μL，以相應(yīng)的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，結(jié)果顯示芍藥苷對照品溶液在0.010～0.160 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=578542X+52.667(r=0.999 5)。

橙皮苷的標準曲線的繪制:取橙皮苷對照品適量，精密稱定，配置成濃度為 0.132 8、0.066 4、0.033 2、0.016 6、0.008 3、0.004 2 mg/mL的對照品溶液。進樣10μL，以相應(yīng)的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，結(jié)果顯示橙皮苷對照溶液在0.004 2～0.132 8 mg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=798764X+360.2(r=0.999 5)。

2.2.4 方法學考察 (1)專屬性。取2.2.1中制備的樣品溶液，按上述條件分別檢測對照品溶液、供試品溶液及陰性供試液，對照目標成分吸收峰的保留時間，結(jié)果表明陰性供試液的HPLC圖譜在與芍藥苷、橙皮苷對照品溶液相同保留時間的位置上沒有出現(xiàn)芍藥苷、橙皮苷的吸收峰，表明試驗不存在雜峰干擾。

(2)精密度試驗。取供試液連續(xù)進樣六針，芍藥苷峰面積的積分值的RSD(n=6)為0.76%，橙皮苷峰面積的積分值的RSD(n=6)為1.20%。

(3)重現(xiàn)性試驗。取A工藝提取藥液，按供試品制備方法制備6份樣品，分別測定樣品含量，其中芍藥苷含量測定結(jié)果RSD(n=6)為1.08%，橙皮苷含量測定結(jié)果RSD(n=6)為0.70%。

(4)回收率試驗。采用加樣回收法，精密量取已知含量的樣品6份，分別精密加入不同量的芍藥苷(橙皮苷)對照品溶液，按供試液制備方法制備，得回收率試驗用溶液，進樣，測定。結(jié)果顯示，芍藥苷平均回收率為101.7%，RSD(n=6)為1.74%;橙皮苷平均回收率為102.0%，RSD(n=6)為1.20%。

2.2.5 樣品含量測定 取不同提取工藝所得的提取液制備的芍藥苷供試液和橙皮苷供試液，注入高效液相色譜儀，測定。結(jié)果見表1。

2.3 浸膏得率測定

按照《中華人民共和國藥典》(2010年版一部)附錄X浸出物測定法，精密量取藥液25mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，在105℃干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，減去蒸發(fā)皿的重量，即得干燥品重量。以干燥品計算其浸膏得率。結(jié)果見表1。

表1 不同提取工藝的提取液的浸膏得率、芍藥苷、橙皮苷含量

3 討論

根據(jù)參考文獻［2－4］，本文通過研究建立了人參養(yǎng)榮方中陳皮苷和芍藥苷的含量測定方法，結(jié)果表明建立的方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、易于操作，可以有效控制人參養(yǎng)榮方的提取工藝。

本文測定四種不同提取工藝的浸膏得率，它們相互間的差異不是很大。而HPLC法測定提取液中芍藥苷、橙皮苷的含量結(jié)果表明:A工藝提取的樣品液中芍藥苷、橙皮苷的含量在四者中均是最高，其次是C工藝。與此相對應(yīng)，A工藝中浸膏得率也為最高。綜合考慮，初步選擇A工藝(即以水為溶媒提取)作為提取人參養(yǎng)榮丸方中有效成分的工藝。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部［M］.中國醫(yī)藥科技出版社，2010:438.

［2］?張云龍，周迎新.人參養(yǎng)榮口服液質(zhì)量標準的研究［J］.中國藥學雜志，1996，31(12):714－716 .

［3］杜志謙，王廣強，薛素娟.芍藥苷檢測在中藥質(zhì)控中的應(yīng)用［J］.時珍國醫(yī)國藥，20O2，13(9):554 －555.

［4］姜舜堯.HPLC法測定2種含陳皮中成藥中的橙皮苷的含量［J］.中成藥，2001，23(8):612 －615.