張秀梅，顧金松，劉 曙，孫成福

譚 進(jìn)，石 明，蘇建軍 (興化市人民醫(yī)院病理科，江蘇 興化 225700)

肝細(xì)胞癌中MACC1基因的表達(dá)及其臨床意義

張秀梅，顧金松，劉 曙，孫成福

譚 進(jìn)，石 明，蘇建軍 (興化市人民醫(yī)院病理科，江蘇 興化 225700)

目的：探討腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因l(metastasis-associated in colon cancer-1，MACC1)在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法： 采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)MACC1在肝癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織中表達(dá)情況，并分析MACC1基因的表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理分級(jí)的關(guān)系。結(jié)果： MACC1 mRNA水平在肝癌組織的表達(dá)水平顯著高于癌旁肝組織(P<0.05)，在癌旁肝組織的表達(dá)水平顯著高于正常肝組織(P<0.05)；MACC1 mRNA的表達(dá)水平與肝癌組織Edmondson病理分級(jí)顯著相關(guān)(P<0.05)， MACC1 mRNA的表達(dá)水平與癌旁組織Edmondson病理分級(jí)無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論：MACC1在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)較對(duì)應(yīng)癌旁組織明顯升高，并且與腫瘤細(xì)胞的分化程度明顯相關(guān)，提示MACC1可作為肝細(xì)胞癌潛診斷因子。

MACC1；肝細(xì)胞癌；病理

原發(fā)性肝癌是一種原發(fā)灶發(fā)生于肝細(xì)胞和肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，其中肝細(xì)胞性肝癌(HCC)是最主要的病理類(lèi)型，占原發(fā)性肝癌90%以上[1]。MACC1基因是2009年由Stein等發(fā)現(xiàn)并命名的一個(gè)新基因。Stein等研究發(fā)現(xiàn)，MACC1作為肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)/c-met信號(hào)通路的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子在結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用[2]，此外，劉清泉等發(fā)現(xiàn)MACC1基因可能在肝細(xì)胞癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，有可能成為肝癌治療的新靶點(diǎn)之一[3]。為了進(jìn)一步研究MACC1在肝細(xì)胞癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)，分析其在肝細(xì)胞癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)水平及其與臨床病理分級(jí)中的聯(lián)系，本研究對(duì)我院救治的肝癌患者的病理組織中MACC1mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象

選取我院2011年3月至2013年3月期間肝細(xì)胞癌(HCC)的手術(shù)切除標(biāo)本，共40例，手術(shù)切除癌組織及相對(duì)應(yīng)的癌旁肝組織；選取同時(shí)期正常肝組織標(biāo)本18例作為對(duì)照組(4例為肝內(nèi)膽管結(jié)石患者行部分肝臟切除術(shù)、12例為肝血管瘤行血管瘤切除術(shù)、2例為肝破裂行部分肝臟切除術(shù))。所有患者術(shù)前均未行放射、化療及射頻消融治療，所有組織標(biāo)本經(jīng)術(shù)后病理學(xué)證實(shí)為肝細(xì)胞癌。病例組中男性22例，女性18例，年齡51～60歲，平均年齡(54.42±3.78)歲。所有病例術(shù)前都未進(jìn)行放化療和射頻消融等治療。所有組織標(biāo)本切下后迅速放入液氮，后移至-80℃冰箱凍存。HCC組織根據(jù)Edmondson標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)[4]：Ⅰ級(jí)12例，Ⅱ級(jí)13例，Ⅲ級(jí)11例，Ⅳ級(jí)4例。

1.2方法

1.2.1 主要試劑 RNA提取試劑盒Trizol購(gòu)于Gibco公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于Femantes公司；DNA Marker、PCR試劑盒、焦碳酸二乙脂(DEPC)均購(gòu)于生興生化科技(南京)有限公司。

1.2.2 RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 取約100mg組織，加入1ml Trizol，充分勻漿，抽提總RNA，所得RNA溶于20μl DEPC處理水。提取的總RNA經(jīng)紫外分光光度計(jì)進(jìn)行定量及檢測(cè)純度。按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，產(chǎn)物-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

PCR反應(yīng)條件：94℃變性5min后擴(kuò)增30個(gè)循環(huán)，循環(huán)參數(shù)為：94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，最后72℃延伸7min。

RT-PCR引物由英濰捷基公司合成，MACC1基因的上游引物F：5-CTTGCGGAGGTCACCATAGC，R：5-GATTTCCAACAACGGGCTCA，內(nèi)參GAPDH 引物F：5-GGTAAAGGTCGGTGTGAACG，R：5-ACCATGTAGTTGAGGTCAATGAAGG。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1正常肝組織、肝癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織中MACC1mRNA的表達(dá)水平

圖1 正常肝組織、肝癌及對(duì)應(yīng)癌旁組織中MACC1mRNA的表達(dá)統(tǒng)計(jì)

與正常肝組織(1.03±0.12)比較，MACC1在癌旁組織中mRNA表達(dá)水平(5.12±0.99)顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與癌旁組織比較，MACC1在肝癌組織中mRNA的表達(dá)水平(12.88±1.32)顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，以上結(jié)果提示MACC1在肝細(xì)胞癌組織與癌旁組織中均高表達(dá)，且在肝細(xì)胞癌中表達(dá)更高。見(jiàn)圖1。

2.2MACC1表達(dá)水平與在肝癌組織病理分級(jí)的相關(guān)性

MACC1 mRNA表達(dá)水平與HCC分化程度顯著相關(guān)(P<0.05)，說(shuō)明HCC分化愈差,MACC1表達(dá)愈弱。而MACC1mRNA表達(dá)水平與癌旁組織分化程度無(wú)顯著相關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 CKS1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與HCC分化程度的關(guān)系

注：與HCC分化程度比較，▲r=0.710，P<0.05；◆r=0.221，P>0.05。

3 討 論

肝細(xì)胞癌是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其特點(diǎn)主要為起病隱匿，生長(zhǎng)快速，預(yù)后差，給患者造成巨大的損害。近年來(lái)HCC發(fā)病率和死亡率有逐年升高的趨勢(shì)，目前HCC首選的、療效最確切的治療方法為手術(shù)切除，然而臨床發(fā)現(xiàn)手術(shù)治療的總體治療效果仍不能令人滿意[4]。研究認(rèn)為腫瘤瘤體的大小、數(shù)目雖然是影響患者預(yù)后的重要因素，但根本因素是腫瘤的生物學(xué)特征[5]。

MACC1基因定位于人染色體7p15.3，結(jié)構(gòu)包含7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，其cDNA含有2559個(gè)核苷酸序列，編碼的結(jié)合蛋白包含852個(gè)氨基酸。以往的研究認(rèn)為MACCI作為一個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子在結(jié)腸癌的侵襲中發(fā)揮著重要作用[2]，且有發(fā)現(xiàn)MACC1基因可能在肝細(xì)胞癌的侵襲轉(zhuǎn)移中亦發(fā)揮著重要作用[3]。本研究通過(guò)對(duì)40例肝癌組織、癌旁肝組織以及18例非肝癌的正常肝組織中MACC1 mRNA的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，探討其在肝細(xì)胞癌及其癌旁組織中的診治意義。結(jié)果顯示，MACC1 mRNA水平在肝癌組織的表達(dá)水平顯著高于正常肝組織，且肝癌組織中MACC1 mRNA水平顯著高于癌旁組織。這就說(shuō)明MACC1的表達(dá)水平可能與肝癌的增殖能力和惡性程度有著密切的聯(lián)系，提示了MACC1在肝癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的協(xié)同作用，這與Gao等報(bào)道的結(jié)果相一致[6]。為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果，我們將MACC1的表達(dá)水平與肝癌組織及癌旁組織的病理分級(jí)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MACC1 mRNA表達(dá)水平與與HCC分化程度顯著相關(guān)，而MACC1 mRNA表達(dá)水平與與癌旁組織分化程度無(wú)顯著相關(guān)，這與Kawamura研究認(rèn)為的MACC1可作為癌癥的預(yù)示因子的結(jié)果相一致[7]。然而，本研究存在著不足之處，如本研究沒(méi)有檢測(cè)MACCl在肝癌及癌旁組織中的蛋白水平的表達(dá)以及其與HCC分化的聯(lián)系，有待進(jìn)一步的驗(yàn)證。

綜上所述，MACCl在肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用，檢測(cè)肝癌組織中的MACCl表達(dá)水平對(duì)患者診斷和臨床個(gè)體化治療具有一定的指導(dǎo)意義。

[1]楊秉輝，夏景林，黃力文，等.我國(guó)肝癌“臨床相”30年的變遷-原發(fā)性肝癌3250例的對(duì)比研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2003，83(12)：1053-1057.

[2]Stein U，Wralther W，Arlt F，et a1.MACCl，a newly identified key regulator ofHGF-MET signaling，predicts colon cRncer metastasis[J].Nat Med，2009，15(1)：59-67.

[3]劉清泉,劉青光,昝獻(xiàn)峰,等.MACC1基因在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，39(1): 22-24.

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2013-05-29

張秀梅(1974-)，女，主治醫(yī)師，主要從事臨床病理學(xué)的診斷及研究工作。

R730.2

A

1673-1409(2013)27-0010-03

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