嚴(yán)群超，羅淑文，王帥帥

(1.暨南大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，廣州 510632;2.廣州藍(lán)韻醫(yī)藥研究有限公司，廣州 510663)

高尿酸血癥(HUA)是一種嘌呤代謝性疾病，是血液中尿酸濃度超出一定范圍的一種機(jī)體狀態(tài)(一般認(rèn)為血尿酸＞420 μmol/L 即7 μg/mL 時為高尿酸血癥)［1］;其臨床特點(diǎn)為HUA 以及由此引起的痛風(fēng)性急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石沉積、痛風(fēng)石性慢性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)畸形，常累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸腎結(jié)石形成［2］.臨床研究發(fā)現(xiàn)HUA 與高血壓、心血管疾病、代謝綜合征以及腎臟疾病關(guān)系密切，是這些疾病的危險因素.本實(shí)驗(yàn)利用氧嗪酸鉀構(gòu)建大鼠高尿酸血癥模型，研究不同中藥組方對高尿酸血癥大鼠血尿酸及相關(guān)代謝指標(biāo)水平的影響.

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

SPF 級SD 大鼠，購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，動物許可證號為:SCXK(粵)2008－0020.常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水.動物房室溫20～25 ℃，濕度50%～70%，實(shí)驗(yàn)環(huán)境設(shè)施許可證號:SYXK(粵)2008－0092.

1.2 試劑及儀器

AU5421 全自動生化分析儀(OLYMPUS)、Medisense Optium 血糖儀(美國)、AE－200 型電子分析天平(瑞士)、DT3000 電子天平(常熟市金羊法碼儀器有限公司)、氧嗪酸鉀(山東濟(jì)南誠匯雙達(dá)化工有限公司(進(jìn)口分裝)批號:12042001)、甘油三酯(中生北控生物科技股份有限公司，批號:120581)、總膽固醇(中生北控生物科技股份有限公司，批號110841)、尿素(上海科華生物工程股份有限公司，批號:20120312)、尿酸(上海科華生物工程股份有限公司，批號:20120432)、肌酐(日本積水醫(yī)療株式會社，批號:802RLI).

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 受試藥物

1)受試樣品

A(土茯苓、車前子、益母草、薏苡仁、澤瀉)、B(土茯苓、車前草、益母草、菊苣、薏苡仁、澤瀉)、C(土茯苓、車前草、菊苣、薏苡仁、澤瀉、葛根)、D(茯苓、菊苣、薏苡仁、葛根、決明子、山楂)共4種，藥材加水煎煮2 次，第1 次加12 倍水，煮1.5 h;第2次加10 倍水，煮1 h.合并2 次濾液，分別濃縮至生藥材質(zhì)量濃度A:0.8 g/mL、B:0.5 g/mL、C:0.34 g/mL、D:0.24 g/mL.人服用劑量均為50 mL/d.

2)陽性對照藥

別嘌醇片，廣東彼迪藥業(yè)有限公司，批號:20111101.

3)生理鹽水

四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號:T1008021.

2.2 分組及給藥

1)分組

SD 雄性大鼠100 只，隨機(jī)分10 組，每組10只.受試藥(不同中藥組方A、B、C、D)分別設(shè)高(15 mL/(kg·d)、低(5 mL/(kg·d))劑量組，模型對照組、陽性對照組.

2)給藥

每組大鼠每天上午灌胃給予氧嗪酸鉀1.5 g/(kg·d)，給予3 d 后，開始每天上午灌胃給予氧嗪酸鉀、下午分別給予各組樣品［3－4］，模型對照組給予等體積生理鹽水，陽性對照組給予別嘌醇56 mg/(kg·d)，共給藥30 d［5－8］.

3)檢測指標(biāo)

給藥27 d 后測定部分大鼠血清尿酸，以確定造模成功與否及樣品是否有療效.給藥后觀察大鼠一般狀況，每周稱量大鼠體重，根據(jù)體重調(diào)整給藥量(15 mL/kg).給藥30 d 后，空腹取血測定血糖(GLU)、總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)濃度.大鼠稱重，取腎并稱重，計算腎臟指數(shù)(腎臟指數(shù)(g/100 gbw)=腎臟質(zhì)量(g)/體重(g)×100).

2.3 統(tǒng)計處理

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 一般狀況

給藥后，各組大鼠外觀觀察未見異常，正?；顒?，飲水、進(jìn)食正常，毛發(fā)順滑有光澤，眼未見分泌物，其他未見明顯異常.各組大鼠在給藥的初期，存在糞便變軟的現(xiàn)象，分析與給予造模劑氧嗪酸鉀有關(guān)，可能氧嗪酸鉀影響動物的消化系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)中后期情況好轉(zhuǎn).不同組的動物糞便和尿液顏色不同，藥物顏色深的組別，糞便和尿液顏色也深，糞便和尿液顏色與藥物顏色有關(guān)，并非異常.給藥30 d 后各組大鼠體重正常增加，結(jié)果見表1.

3.2 相關(guān)代謝指標(biāo)

1)給藥27 d和給藥30 d 后各組樣品對高尿酸血癥模型大鼠血清UA 的影響

給藥27 d 時取部分動物血清測量大鼠UA，與模型組相比，各組動物UA 濃度均有降低(P ＜0.05，P ＜0.01);給藥30 d 后，A、B、C 各樣品高、低劑量組UA 濃度均有降低(P ＜0.05，P ＜0.001)，D 高、低劑量樣品組對大鼠血清UA 濃度只有降低趨勢，未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義，給藥27 d和給藥30 d 后樣品降低尿酸的趨勢是一致的.陽性組無論是給藥27 d 還是給藥30 d 后，均能降低UA 濃度，與模型對照組比較有顯著性差異(P ＜0.01，P ＜0.001)，結(jié)果見表2.

表1 給藥30 d 后各組大鼠體重變化(n=10)

表2 給藥27 d、30 d 后各組樣品對大鼠血清UA 的影響(n=10)

2)給藥30 d 后各組樣品對高尿酸血癥模型大鼠血清UREA、CREA 的影響

與模型組相比，各組樣品對大鼠血清UREA和CREA 的濃度影響不大，結(jié)果見表3.

表3 各組樣品對大鼠血清UREA、CREA 的影響(n=10)

3)給藥30 d 后各組樣品對高尿酸血癥模型大鼠血清CHOL、TG 的影響

與模型組相比，各組樣品對大鼠血清CHOL和TG 的濃度影響不大，結(jié)果見表4.

表4 各組樣品對大鼠血清CHOL、TG 的影響(n=10)

4)給藥30 d 后各組樣品對高尿酸血癥模型大鼠GLU、腎臟指數(shù)的影響

與模型組相比，各組樣品對模型大鼠GLU 影響不大;A、B、C 各樣品高劑量組能降低模型大鼠腎臟指數(shù)，與模型對照組比較有顯著性差異(P ＜0.05)，結(jié)果見表5.

表5 各組樣品對大鼠血清GLU、腎臟指數(shù)的影響(n=10)

4 討論

動物模型是研制新型治療藥物的重要工具，目前高尿酸血癥動物模型的造模劑主要分為3種:促進(jìn)尿酸生成，如腺嘌呤、黃嘌呤、尿酸、酵母等;抑制尿酸排泄，如吡嗪酰胺、乙胺丁醇等;以及尿酸酶抑制劑，如氧嗪酸鹽［9］.本實(shí)驗(yàn)采用氧嗪酸鉀構(gòu)建大鼠高尿酸血癥模型，氧嗪酸鉀能有效抑制尿酸的分解，從而使尿酸在大鼠體內(nèi)大量積聚.

近年來，國內(nèi)外流行病學(xué)研究顯示HUA 發(fā)病率呈逐年上升趨勢［10］.目前，西藥治療高尿酸血癥主要分為抑制尿酸生成和促進(jìn)尿酸排泄兩類，前者主要是別嘌呤醇，后者多用苯溴馬龍，但是這些藥物毒副作用大，長期治療將對患者機(jī)體造成較大的傷害，而且停藥后易反復(fù).中藥具有毒副作用小、多靶點(diǎn)、多層面治療的特點(diǎn).本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，A、B、C、D 組樣品給藥27 d 后均能降低高尿酸血癥大鼠血尿酸水平;給藥30 d 后A、B、C 組樣品能降低高尿酸血癥大鼠血尿酸水平，而D 組樣品(高、低劑量組)與模型組比較，沒有顯著性差異，可能是由于動物出現(xiàn)耐受作用;A、B、C 高劑量樣品組均降低高尿酸血癥模型大鼠的腎臟指數(shù)，說明A、B、C各樣品有一定的抗炎消腫作用.

［1］錢 鶯，傅旭春，白海波，等.車前草醇提液降大鼠血尿酸作用的研究［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28(5):406－408.

［2］王醫(yī)平，楊曉航，賈文鵬，等.加味四妙湯對高尿酸血癥大鼠血尿酸及尿酸生成相關(guān)酶的影響［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，34(4):74－75.

［3］王培培，許冬梅.高尿酸血癥動物模型的建立及各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)［J］.國際泌尿系統(tǒng)雜志，2011，31(3):409－411.

［4］劉淑芬，曾學(xué)軍.高尿酸血癥動物模型研究進(jìn)展［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，31(3):344－347.

［5］金沈銳，秦旭華.痛風(fēng)及高尿酸血癥動物模型的研究現(xiàn)狀和評價［J］.中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報，2005，13(1):55－58.

［6］孟永會，曾俞霖.高尿酸血癥動物模型研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2005，19(11):124－125.

［7］楊桂梅，黃勝華，連希艷，等.大鼠高尿酸血癥模型的建立［J］.實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)，2011，28(3):25－28.

［8］宋麗娟，阿孜古麗·于蘇甫，張向陽，等.高尿酸血癥大鼠血清尿酸與C 反應(yīng)蛋白關(guān)系研究［J］.中華實(shí)用診斷與治療雜志，2011，25(11):1091－1093.

［9］蔣 茜，郭永平，王毅興，等.四物湯合二妙散降低高尿酸血癥大鼠血尿酸水平的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2012，13(4):336－338.

［10］連希艷，黃勝華，趙勁濤，等.輕度血尿酸升高對大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞及血管平滑肌細(xì)胞功能的影響［J］.中華腎臟病雜志，2012，28(3):207－211.