褚銀玲,吳 春,代麗君
(1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院,哈爾濱150076;2.哈爾濱商業(yè)大學(xué) 管理學(xué)院,哈爾濱150028)
花色苷(anthocyanins)是花青素與糖以糖苷鍵結(jié)合而成的一類化合物,屬于類黃酮,廣泛存在于植物的花、果實、莖、葉和根器官的細(xì)胞液中,是使其呈現(xiàn)由紅、紫紅到藍(lán)等不同顏色的物質(zhì)基礎(chǔ).花色苷類物質(zhì)由于其各種藥理活性及可作為天然色素的良好來源而備受關(guān)注[1].花色苷具有抗氧化、清除自由基、抗突變活性、減輕肝功能障礙、降血糖以及抗腫瘤的功能.紫洋蔥(red onion)富含花色苷,其花色苷提取物具有很強(qiáng)的抗氧化活性及其他功能性質(zhì)[2].
超聲輔助提取方法具有方便、快速、易操作、安全等優(yōu)點(diǎn),因此本實驗采用超聲輔助提取花色苷,并對影響提取因素進(jìn)行研究.同時,應(yīng)用響應(yīng)面法優(yōu)化其提取工藝條件,旨在提高紫洋蔥中花色苷的提取率[3].
1.1.1 原料與試劑
原料:紫洋蔥(購于家樂福超市).
試劑:無水乙醇(天津市天力化學(xué)試劑有限公司),36%~38%HCl(哈爾濱市新達(dá)化工廠),氫氧化鈉(天津市天新精細(xì)化工開發(fā)中心),鄰苯二甲酸氫鉀緩沖劑、四硼酸鈉緩沖劑(上海雷磁·創(chuàng)業(yè)儀器儀表有限公司).
1.1.2 儀器
KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),PHS-25型酸度計(上海偉業(yè)儀器廠),721E型可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司),R-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物技術(shù)有限公司),W201D恒溫水浴鍋(上海申勝生物技術(shù)有限公司),SHB-III循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司).
1.2.1 預(yù)處理
將紫洋蔥剝開,切成小塊,60℃烘干,粉碎處理后過60目篩避光保存?zhèn)溆肹4].
1.2.2 提取方法
準(zhǔn)確稱取1.000 g預(yù)處理好的洋蔥粉,按一定的固液比,加入一定體積分?jǐn)?shù)的的乙醇,用鹽酸調(diào)至pH值為2,在一定的溫度,一定的時間下超聲提取.提取液抽濾,而后定容至100 mL,并在530 nm下測吸光度[5].
1.2.3 總花色苷含量計算
總花色苷含量(mg/100 g)=(吸光度值×稀釋倍數(shù)×浸提溶液的體積×100)/(原料質(zhì)量×98.2),其中98.2是消光系數(shù)[6].
1.3.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對紫洋蔥中花色苷提取的影響
準(zhǔn)確稱取1.00 g紫洋蔥粉至100 mL磨口瓶中,加入乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為40%,50%,60%,70%,80%,90%的乙醇溶液,料液比為1∶30,提取時間為50 min,提取溫度為50℃.
1.3.2 料液比對紫洋蔥中花色苷提取的影響
準(zhǔn)確稱取1.00 g紫洋蔥粉至100 mL磨口瓶中,加入乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液,料液比分別為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60,提取時間為50 min,提取溫度為50℃.
1.3.3 提取時間對紫洋蔥中花色苷提取的影響
準(zhǔn)確稱取1.00 g子洋蔥粉值100 mL磨口瓶中,加入乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液,料液比為1∶30,提取時間分別為10、20、30、40、50、60 min,提取溫度為50℃.
1.3.4 提取溫度對紫洋蔥中花色苷提取的影響
準(zhǔn)確稱取1.00 g紫洋蔥粉至100 mL磨口瓶中,加入乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液,料液比為1∶30,提取時間為50 min,提取溫度分別為10、20、30、40、50、60℃.
在單因素實驗結(jié)果基礎(chǔ)上,綜合考慮各因素對花色苷含量的影響,根據(jù)Box-Benhnken中心組合試驗設(shè)計原理,采用四因素三水平的響應(yīng)面分析方法[8],實驗因素水平設(shè)計見表1.
表1 響應(yīng)面實驗因素水平表
2.1.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對花色苷提取的影響
從圖1中可以看出,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大吸光度值也逐漸增大當(dāng)達(dá)到70%時達(dá)到最大值,當(dāng)大于70%時吸光度值逐漸減小.當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)小時,洋蔥中一些可溶水性物質(zhì)溶出不利于花色苷的提取,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)過高時極性低反而不利于花色苷提取.
圖1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對洋蔥花色苷提取的影響
2.1.2 固液比對花色苷提取的影響
從圖2中可以看出,隨著固液比增加吸光度值也逐漸增大,當(dāng)固液比為30 mL/g時達(dá)到最大值,當(dāng)固液比再增大時吸光度值緩慢且趨于平穩(wěn),考慮到花色苷的提取率及原料等因素,固液比在20~40 mL/g時較為理想.
圖2 固液比對洋蔥花色苷提取的影響
2.1.3 提取溫度對花色苷提取的影響
從圖3中可以看出當(dāng)溫度增高時吸光度值明顯增大.當(dāng)溫度達(dá)到50℃時達(dá)到最大值,高于50℃后吸光度值緩慢下降,從40℃后曲線變化平緩.由于隨著溫度升高有利于花色苷溶出和提取,當(dāng)溫度高于60℃時花色苷較不穩(wěn)定.
圖3 溫度對紫洋蔥花色苷提取的影響
2.1.4 提取時間對花色苷提取的影響
從圖4中可以看出,隨著時間的增長,吸光度值逐漸增大,但當(dāng)時間大于30 min后吸光度值緩慢增大且變化不明顯.由于在提取時間為30 min時花色苷基本被提取出來.考慮節(jié)能因素時間在20~40 min較為理想.
圖4 時間對紫洋蔥花色苷提取的影響
2.2.1 花色苷提取響應(yīng)面法實驗方案和結(jié)果
由Box-Behnken設(shè)計實驗方案及實驗結(jié)果見表2,對表2實驗結(jié)果進(jìn)行擬合分析得到擬合方程模型為:Y=0.65+0.03A+0.01B-0.002 25C+0.007 916 667D-0.003 25AB+0.003 25AC-0.034 75AD-0.004BC+0.033BD-0.003 5CD-0.101 166 67A2-0.058 166 667B2-0.038 916 667C2-0.023 666 667D2.
2.2.2 顯著性分析
由表3可知,模型效果顯著回歸模型(P<0.000 1),誤差項不顯著表明擬合方程與實際試驗情況較為接近,因此可用該方程代替實驗真實值進(jìn)行實驗分析.該方程表明一次項二次項對實驗影響都較為顯著.因此在一定范圍內(nèi)調(diào)整乙醇體積分?jǐn)?shù)、固液比、時間、溫度,可得到最佳提取條件[9-10].從表3中可知影響花色苷提取率的因素主次依次為乙醇體積分?jǐn)?shù)(A)>固液比(B)>時間(D)>溫度(C).
表2 實驗方案和結(jié)果
表3 方差分析表
2.2.3 紫洋蔥花色苷提取的響應(yīng)面分析
從圖5~10可知,乙醇體積分?jǐn)?shù)和固液比交互作用顯著,乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%~70%,固液比為20~40mL/g的交互范圍內(nèi)吸光度值有最高值,溫度和乙醇體積分?jǐn)?shù)交互作用以及乙醇體積分?jǐn)?shù)和時間交互作用較為顯著.固液比和時間的交互作用不明顯,固液比和溫度,時間和溫度交互作用不明顯.
圖5 乙醇體積分?jǐn)?shù)固液比交互作用的曲面圖
圖6 溫度和乙醇體積分?jǐn)?shù)交互作用的曲面圖
圖7 乙醇體積分?jǐn)?shù)和時間交互作用的曲面圖
圖8 固液比和溫度交互作用的曲面圖
圖9 固液比和時間交互作用的曲面圖
圖10 溫度和時間交互作用的曲面圖
為確定最大吸光度值即最優(yōu)提取條件,通過對軟件分析和擬合方程計算得到最優(yōu)提取條件為:乙醇體積分?jǐn)?shù):72%,固液比:1∶30,溫度:55℃,時間55 min.通過驗證實驗(采用最優(yōu)條件并平行三次)得到吸光度值為0.674,此時花色苷得率為100.16 mg/g.
通過響應(yīng)面法分析實驗,對紫洋蔥花色苷最佳提取條件進(jìn)行優(yōu)化,并對實驗結(jié)果進(jìn)行分析得到擬合模擬方程.結(jié)果表明乙醇含量和固液比對紫洋蔥花色苷提取顯著,時間和溫度對花色苷提取影響不明顯.通過擬合方程得到最佳提取條件為:乙醇體積分?jǐn)?shù)72%,固液比1∶30,溫度55℃,時間55 min,此時花色苷得率為100.16 mg/g.
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