(公安部沈陽警犬技術學校，遼寧沈陽 110034)

犬瘟熱(CDV)和犬細小病毒病(CPV)是危害犬類較為嚴重的兩種傳染病，發(fā)病率和死亡率較高。目前，這兩種疾病的防控方法仍以疫苗免疫為主，結合抗菌素治療的綜合防控措施，但因部分疫苗的保護力不強、免疫保護期較短等原因，致使預防效果不甚理想。

近年來，研究資料表明，乳酸菌能促進動物生長，維持腸道生態(tài)菌群平衡，抵御外來病原菌的入侵，激活免疫反應，增強機體免疫力。乳酸菌作為犬體內的正常菌群，能使腸道pH值降低，抑止致病菌在腸道內的生長和繁殖，同時還可產(chǎn)生天然抗菌物質，對腸道致病菌具有明顯的抑制和殺滅等作用[1]。

CDV和CPV危害,尤以對斷乳仔犬最為嚴重，本試驗旨在通過斷乳仔犬飼喂乳酸菌后檢測CDV和CPV抗體水平，觀察抗體水平變化，以期揭示乳酸菌與犬體之間的相互關系，為獸醫(yī)臨床上尋求防控仔犬CDV和CPV及提高機體免疫應答和生長性能提供新的研究方向。

1 材料與方法

1.1試驗動物 選擇8只健康狀況良好的德國牧羊母犬所產(chǎn)的30只仔犬，隨機分為3組，每組10只，即試驗1組，試驗2組及對照組。

1.2試驗藥品 乳酸菌素片Lactobacillus acidophilus 133株，(黑龍江某藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，生產(chǎn)批號為0711301，每片含乳酸菌素0.4 g，乳酸菌1×108efu/g。

1.3基礎日糧 基礎日糧選用由某食品(中國)有限公司出品的“某訓養(yǎng)場特供幼犬糧”。配料為精選肉類(牛肉、雞肉)及肉類副產(chǎn)品，精煉植物油及動物性油脂，全脂奶粉，加碘食鹽，維生素(A、B、D、E)和礦物質(銅、鐵、鋅、硒等)，山梨酸鉀，抗氧化劑。營養(yǎng)成分分析保證值：粗蛋白質≥28.0%、總脂肪≥14.0%、粗纖維≤5.0%、鈣≥1.10%、礦物質≥1.5%、總磷≥0.9%、鹽≤1.8%、灰分≤10.0%、水分≤10.0%。

1.4試驗方法 仔犬出生后隨母犬吮哺母乳，20日齡補喂奶粉，30日齡斷奶，試驗1組和試驗2組飼喂基礎日糧+乳酸菌片，對照組飼喂基礎日糧，詳見表1。

表1 試驗仔犬分組情況

1.5抗體水平檢測 犬瘟熱/細小病毒抗體檢測試劑盒(法國辛百克斯生產(chǎn))。試劑盒成分：2×8孔包被CDV抗原的酶標板和2×8孔包被CPV抗原的酶標板；A瓶—陽性質控，1.0 mL；B瓶—陰性質控(樣品稀釋液)，3.0 mL；C瓶—酶標記物，2.0 mL；D瓶—發(fā)色底物，3.0 mL；E瓶—10×洗滌濃縮液，100 mL。根據(jù)ELISA原理，檢測仔犬血清或血漿中CDV/CPV抗體水平。

1.6飼養(yǎng)管理 分欄飼養(yǎng)，按常規(guī)管理，免疫程序為：4-6周齡：接種小犬二聯(lián)苗(PuPPy DP)；8-9周齡：接種犬六聯(lián)苗(DHPPi+L)；12周齡：接種犬六聯(lián)苗(DHPPi+L、或七聯(lián)苗(DHPPi+RL)。

1.7數(shù)據(jù)分析 試驗結束后，資料匯總，進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，分析各組仔幼犬血清中CPV與CDV抗體效價的動態(tài)變化。

1.8CDV、CPV抗體檢測判斷標準 CDV抗體檢測陽性質控滴度為1∶16，CPV抗體檢測陽性質控滴度為1∶80，顏色深于陽性質控樣品抗體效價CDV>1∶16，CPV>1∶80。顏色淺于陽性質控樣品抗體效價CDV<1∶16，CPV<1∶80。試驗結果有效：陽性質控顯示藍色，陰性質控顯示無色。

2 試驗結果

2.1CDV抗體效價動態(tài)變化 詳見表2。

表2 各組仔犬CDV、CPV抗體效價在不同時期的比較

由表2可知，CDV抗體效價變化20～35日齡，對照組均處陰性(CDV<1∶16)，但自首次免疫后，抗體效價均≥1∶16，說明免疫應答效果良好；試驗組則從20～90日齡抗體水平均為陽性(CDV≥1∶16)，說明免疫應答效果良好。

從CPV、CDV抗體效價變化可知20日齡時，各組抗體效價較高，但到35日齡時，抗體效價有所降低，但在免疫后均表現(xiàn)出良好的免疫應答現(xiàn)象。

在整個試驗中，試驗組的抗體效價均明顯高于對照組。CPV抗體效價，試驗1組明顯優(yōu)于試驗2組，尤以35～50日齡時段較為明顯；而CDV的抗體效價，試驗1組與試驗2組差異不顯著。

2.2CPV抗體效價動態(tài)變化 詳見表2。

由表2可知，20日齡前各組CPV≥80，差異不明顯；免疫接種后試驗組CPV抗體效價明顯高于對照組，且試驗1組高于試驗2組，對照組CPV抗體則呈陰性(CPV<1∶80)；50日齡時，各組抗體效價均有所下降。但試驗組仍高于對照組；至75日齡后，試驗組與對照組均高于1∶80，但從酶標板的顏色差異上看，試驗組仍高于對照組。

3 分析與討論

據(jù)本次試驗結果，應用ELISA方法檢測分析CDV、CPV血清抗體效價，表明乳酸菌可提高CDV、CPV抗體水平。以高劑量試驗組效果最佳。因此，可初步認為口服高劑量的乳酸菌可明顯提高CDV、CPV抗體效價。

3.1CDV與CPV抗體效價的動態(tài)變化規(guī)律 仔犬體內的CDV抗體，90%通過初乳獲得，5%通過胎盤獲得?？梢娙橹瓊鬟f是母源抗體傳遞的主要途徑，抗體主要通過乳汁傳遞給仔犬。仔犬從初乳中獲得高水平的母源抗體可阻止CPV傳播及感染犬排毒。母源抗體在幼犬體中平均9.7 d左右可下降一半以上，最長可持續(xù)2個月左右，初乳對幼犬的保護力優(yōu)于人工主動免疫及輸入高免血清產(chǎn)生的被動免疫[2]。多數(shù)仔犬在6～8周齡(最長14周齡)時，母源抗體迅速減少或消失,CDV血清抗體滴度1∶100以下是免疫的臨界滴度，降至1∶16以下時，則有可能感染CDV；故一般幼犬3周齡內很少感染CPV,3周齡后、幼犬母源抗體<1∶80，對CPV易感，1∶80是抵抗CPV的保護效價。所以，如能測定仔犬或母犬CDV和CPV抗體效價，就能確定仔犬進行免疫接種的確切時間。

3.2血清中CDV、CPV抗體水平含量與幼犬抵抗力的相關性 Banks等研究表明(1989)[3，4],免疫球蛋白的濃度與傳染病的易感性成負相關，如果轉移的是特異性抗體，對相應傳染病的抵抗力增強，這種抵抗力可通過已建立的診斷來檢測抗體含量。據(jù)Gorbam報道(1960)[5]，多數(shù)仔犬的母源抗體在8～12周齡開始減弱，15周齡消失。當血清中母源抗體下降到1∶20以下時較為易感。有資料曾報道(2004)[6]犬瘟熱抗體的半衰期為8.4 d，母源抗體可通過初乳轉移給仔犬，幼犬母源抗體中和滴度大于1∶20時，幼犬能免受CDV的攻擊。一般幼犬在3周齡以內很少感染CPV,3周齡后、幼犬的母源抗體HI< 26.3(80×)，僅在26.3(80×)～24.3(20×)間，CPV最易感，而26.3(80×)是抵抗CPV的保護效價。因此，可根據(jù)測定轉移的抗體消長情況，來推測抗體的效價變化，研究當抗體從峰值下降到一定水平時，既有抗病能力又可進行主動免疫，可以使幼犬從出生到接種疫苗的時期內都能得到足夠的保護[7]。

3.3乳酸菌對抗體水平的影響 從犬傳染病的預防角度，疫苗在進入犬體后會發(fā)生兩種免疫應答,一種是抗體介導的,即B淋巴細胞反應；一種是由細胞介導的,即T淋巴細胞反應。

除了疫苗會引起免疫應答，乳酸菌也可促進免疫器官的發(fā)育,從而有更多的淋巴細胞分化為漿細胞產(chǎn)生抗體。微生態(tài)制劑中有許多細菌的細胞壁成分，如細胞壁的肽聚糖和脂多糖等對動物免疫系統(tǒng)，具有不同的免疫調節(jié)作用，其在體內是一種較強的B細胞和巨噬細胞激活劑，使B細胞分泌抗體的能力增強，微生態(tài)制劑中的有效成分作為抗原不斷刺激機體免疫系統(tǒng)，使機體的免疫功能始終處在較高的活性狀態(tài)，機體的B細胞分泌特異性抗體的功能也得到不斷的刺激，從而使B細胞抗體分泌能力也得到延長，抗體滴度下降較慢[8]。

本試驗中試驗組乳酸菌在整個試驗期內均能提高CPV與CDV效價，且高劑量組(3.2 g)顯著優(yōu)于低劑量組(2 g)，說明高劑量組和低劑量組均能提高CDV、CPV抗體水平，但高劑量組提升程度較低劑量組大。

CPV、CDV抗體的高低是反映犬免疫狀態(tài)的指標，也是反映犬特異性體液免疫性能的指標。本試驗中表明隨注射疫苗時間的延長能延緩抗體水平的降低，且乳酸菌與疫苗可協(xié)同促進機體循環(huán)抗體的產(chǎn)生。

ELISA檢測添加乳酸菌試驗組和對照組的抗體結果顯示，試驗組要比對照組提前出現(xiàn)免疫應答，而且其抗體水平隨著時間的推移比對照組明顯提高，結果說明乳酸菌這種益生菌對體液免疫也有影響和促進作用。

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