徐軼飛，苗愛東，李曉翠

替硝唑片臨床主要用于治療厭氧菌所致的口腔、呼吸道、婦科、外科感染［1］?！吨袊?guó)藥典》2010 年版對(duì)替硝唑薄膜衣片采用30 min測(cè)定溶出度，規(guī)定溶出量應(yīng)不得少于80%。光纖藥物溶出度儀可實(shí)現(xiàn)連續(xù)自動(dòng)化檢測(cè)和分析，與現(xiàn)有的溶出度測(cè)定儀相比，不需取樣，不需過濾，實(shí)現(xiàn)了原位實(shí)時(shí)溶出檢測(cè)，可反映藥片的真實(shí)溶出過程［2］。為探索光纖藥物溶出度測(cè)定儀對(duì)替硝唑薄膜衣片溶出度檢查方法的可行性，筆者嘗試了通過改變測(cè)定的光程和波長(zhǎng)，對(duì)3個(gè)廠家生產(chǎn)的6批次替硝唑薄膜衣片進(jìn)行溶出度的研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試劑

光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測(cè)定儀(FODT)-601(上海富科思分析儀器有限責(zé)任公司);UV-2450紫外可見分光光度計(jì)(日本島津制作所);METTLER TOLEDO AG 285電子天平(d=0．01 mg，上海梅特勒－托利多儀器有限公司);替硝唑?qū)φ掌?中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100336-200703，純度99.9%);替硝唑片(薄膜衣片，規(guī)格均為0．5 g/片，A 廠，A1、2 批號(hào):110901、111201;B 廠，B1、2、3 批號(hào):1108120、1101129、1111140;C 廠，批 號(hào):111002);鹽酸(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 取替硝唑?qū)φ掌愤m量，精確稱取0．25 g，置于250 ml量瓶中，加鹽酸溶液(9→1000)溶解并稀釋至刻度，濃度為1000 μg/ml，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取替硝唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液8、24、32、40、50、60 ml置 100 ml量瓶中，加鹽酸溶液(9→1000)稀釋至刻度，得 80、240、320、400、500、600 μg/ml的替硝唑?qū)φ掌废盗腥芤?，分別相當(dāng)于 14.4%、43.2%、57.6%、71.9%、89.9%、107.9%的藥物溶出率。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 在UV-2450紫外可見分光光度計(jì)上掃描測(cè)定上述對(duì)照品溶液的紫外吸收光譜，發(fā)現(xiàn)替硝唑的高濃度溶液在最大吸收波長(zhǎng)278 nm處有裂峰現(xiàn)象，且其吸光度值超過3.0。用FODT-601在線掃描測(cè)定各濃度溶液(0.5 mm探頭)的紫外吸收光譜，替硝唑溶液的最大吸收波長(zhǎng)為278 nm，吸光度值超過1.2(圖1);比較替硝唑水溶液和鹽酸溶液(9→1000)的紫外吸收光譜，發(fā)現(xiàn)替硝唑在鹽酸溶液(9→1000)中的吸收峰位存在藍(lán)移現(xiàn)象，由水(甲醇)中的最大吸收波長(zhǎng)317 nm變?yōu)?78 nm。通過比較選擇不同的測(cè)定光程和測(cè)定波長(zhǎng)，依照替硝唑薄膜衣片溶出相當(dāng)于標(biāo)示量的100%的濃度(約為560 μg/ml)時(shí)的吸光度值在0.5左右的原則［3］，最終確定光程為1 mm、檢測(cè)波長(zhǎng)為314nm、參比波長(zhǎng)為550 nm的分析測(cè)試條件。

2.3 工作曲線 選擇0．5 mm的探頭，將其分別放入“2．1”項(xiàng)下的替硝唑?qū)φ掌废盗腥芤褐?，在檢測(cè)波長(zhǎng)為314 nm時(shí)，替硝唑?qū)φ掌啡芤涸?0～600 μg/ml濃度范圍內(nèi)的吸光度值與濃度間的線性關(guān)系良好，回歸方程Y=bX－a，Y:溶出百分率，X:吸光度值，見表1。

2.4 精密度(RSD) 稱取500 μg/ml的替硝唑?qū)φ掌啡芤?，分別考察日內(nèi)和日間RSD，計(jì)算所得日內(nèi)和日間RSD值分別為0．4%和1．2%，表明RSD良好。

圖1 FODT-601光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測(cè)定儀掃描替硝唑溶液的紫外吸收光譜

表1 6個(gè)通道的線性方程及相關(guān)系數(shù)

2.5 回收率試驗(yàn) 取10片替硝唑薄膜衣片(B2批號(hào):1101129，含量為標(biāo)示量的95．3%)，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于替硝唑28 mg)，置于100 ml量瓶，共6份，分別加入濃度為1 mg/ml替硝唑?qū)φ掌啡芤?8 ml，以鹽酸溶液(9→1000)溶解并定容至刻度，按“2．3”項(xiàng)下方法測(cè)定。計(jì)算回收率為 99．8%，RSD 值為 1．0%(n=6)。

2.6 溶出度測(cè)定 打開FODT實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，選擇0．5 mm 的探頭，采用轉(zhuǎn)籃法［3］，以鹽酸溶液(9→1000)900 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，設(shè)定溫度37℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為314 nm，參比波長(zhǎng)為550 nm，采樣間隔60 s，實(shí)時(shí)記錄替硝唑薄膜衣片的溶出情況。同時(shí)按《中國(guó)藥典》2010年版(二部)［3］規(guī)定方法——紫外可見分光光度法測(cè)定3個(gè)廠家6批次替硝唑薄膜衣片的溶出度。應(yīng)用奇思高智統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，兩種方法所測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，見表2。

表2 兩種方法測(cè)定3個(gè)廠家6批次替硝唑薄膜衣片溶出度結(jié)果比較(±s)

表2 兩種方法測(cè)定3個(gè)廠家6批次替硝唑薄膜衣片溶出度結(jié)果比較(±s)

注:A1、2:A 廠，批號(hào):110901、111201;B1、2、3:B 廠，批號(hào):1108120、1101129、1111140;C:C 廠，批號(hào):111002

A1 A2 B1 B2 B3 C光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測(cè)定 101．05 ±1．47 99．02 ±2．01 97．03 ±5．11 96．85 ±1．方法49 96．35 ±0．94 97．88 ±1．01紫外可見分光光度法 99．77 ±1．64 97．83 ±1．39 96．05 ±3．96 95．52 ±1．36 95．06 ±1．19 97．43 ±1．01 t 1．430 1．184 1．389 1．294 2．072 0．768 P 0．183 0．264 0．223 0．252 0．065 0．460

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)了3個(gè)廠家6批次替硝唑薄膜衣片的溶出過程，結(jié)果見圖2。雖然各批次替硝唑薄膜衣片的溶出度檢查結(jié)果均符合《中國(guó)藥典》2010年版(二部)的規(guī)定，但各廠家替硝唑薄膜衣片的溶出曲線還是存在一定差異:A、C廠各片間的溶出曲線一致性好，片間差異小;而B廠各片間的溶出曲線存在明顯差異。結(jié)果提示A、C廠生產(chǎn)的替硝唑薄膜衣片的質(zhì)量均一性較好，而B廠生產(chǎn)的替硝唑薄膜衣片的質(zhì)量均一性較差。

圖2 3個(gè)廠家6批次替硝唑薄膜衣片實(shí)時(shí)溶出曲線

3 討論

《中國(guó)藥典》2010年版(二部)替硝唑薄膜衣片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)下溶出度檢查項(xiàng)規(guī)定為轉(zhuǎn)籃法，定時(shí)取樣后經(jīng)稀釋再測(cè)定，對(duì)照品法計(jì)算其溶出度［3］，操作環(huán)節(jié)較多，易帶來較大的誤差，無法反映片劑溶出過程。FODT集溶出度試驗(yàn)與分析檢測(cè)于一體，通過光導(dǎo)纖維將光源信號(hào)直接導(dǎo)入溶出杯中，根據(jù)藥物的光譜特性選擇合適的探頭，藥物溶出過程濃度的變化引起光信號(hào)的改變，通過數(shù)字模型消除背景干擾，經(jīng)軟件系統(tǒng)編譯后實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物溶出度過程原位和實(shí)時(shí)測(cè)定，可獲得藥物溶出度的過程溶出曲線［4］。本研究通過調(diào)整探頭間距離選擇合適的光纖探頭(即改變光程)，結(jié)合改變替硝唑的測(cè)定波長(zhǎng)(314 nm)實(shí)現(xiàn)了對(duì)替硝唑薄膜衣片溶出過程的原位、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，與中國(guó)藥典2010年版(二部)該制劑規(guī)定的方法比較，兩種方法的檢查結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

通過對(duì)3個(gè)廠家生產(chǎn)的6批次替硝唑薄膜衣片的溶出曲線進(jìn)行考察，雖然所有產(chǎn)品溶出度均符合《中國(guó)藥典》2010年版(二部)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定［3］，但其溶出過程卻有所不同。由于各生產(chǎn)廠家使用的替硝唑原料藥來源不同，且生產(chǎn)過程所使用的輔料、配方和工藝等因素的差異，可能影響藥品的內(nèi)在質(zhì)量［5］?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)由于只檢查規(guī)定時(shí)間點(diǎn)的溶出度值，無法監(jiān)測(cè)片劑溶出過程中的差異;而FODT實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)則可通過直接繪制藥物溶出曲線實(shí)現(xiàn)藥物溶出過程監(jiān)測(cè)和溶出結(jié)果的直接判定，大大提高了分析工作效率，對(duì)于藥物制劑工藝研究、藥品質(zhì)量控制及生物利用度研究方面也具有十分重要的指導(dǎo)意義。

［1］ 陳新謙，金有豫，湯光．新編藥物學(xué)［M］．16版．北京:人民衛(wèi)生出版社，2007:111．

［2］ 金麗，古卓良，周國(guó)華，等．光纖藥物溶出度實(shí)時(shí)測(cè)定儀在線監(jiān)測(cè)阿昔洛韋片的溶出度［J］．中南藥學(xué)，2012，10(4):274-276．

［3］ 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典:二部［K］．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

［4］ 李新霞，陳堅(jiān)．光纖藥物溶出度過程分析儀的應(yīng)用［J］．中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2011，24(1):70-72．

［5］ 張曉丹，武海萍，周國(guó)華，等．利用六通道光纖傳感系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)格列齊特片Ⅱ的體外溶出度［J］．解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2008，24(6):544-546．