李淑華 王海燕 李秀維

中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所， 北京 102206

在全國第四次碘缺乏病監(jiān)測工作中，水碘檢測采用了武漢眾生生化技術(shù)有限公司生產(chǎn)的“水碘快速定量檢測試劑盒”。筆者將該方法的分析測試誤差與中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5750.5-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法 無機非金屬指標(biāo)(文中簡稱國家標(biāo)準(zhǔn)方法)中11.1測定水碘的方法進(jìn)行了對比[1],并報道如下。

表1 兩種方法的檢測下限

表2 兩種方法檢測低濃度水樣結(jié)果

1.材料與方法

1.1 檢測方法的依據(jù)：國家標(biāo)準(zhǔn)方法依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5750.5-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法 無機非金屬指標(biāo)，試劑盒法為武漢眾生生化技術(shù)有限公司的“水碘快速定量檢測試劑盒”。

1.2 測試項目

1.2.1 檢測下限：取與配置標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的去離子水，與樣品檢測同步驟全程序檢測，共檢測6批，每批做平行測試，目的是了解方法的檢測下限。

1.2.2 兩種方法檢測低濃度水樣結(jié)果比較：對低濃度水樣進(jìn)行全程序檢測，共檢測6批，每批做平行測試，目的是觀察5μg/L以下低濃度水樣用試劑盒法和國家標(biāo)準(zhǔn)方法的差異。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)性分析：分析兩種方法檢測6批水樣的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差。

1.2.4 重現(xiàn)性精密度：取檢測方法檢出上限濃度0.9倍的標(biāo)準(zhǔn)溶液和天然水樣進(jìn)行全程序檢測，共檢測6批，每批做平行測試，分析檢測的重現(xiàn)性精密度及其 95%置信水平的最大允許誤差。

1.2.5 準(zhǔn)確度：選取天然水樣檢測后，按1：1加標(biāo)，標(biāo)樣濃度為20μg/L。檢測6批，每批做平行測試，計算回收率。

1.2.6 待測組分穩(wěn)定性觀察：對0.9倍的標(biāo)準(zhǔn)溶液和水樣進(jìn)行全程序檢測，共檢測6批，每批做平行測試，從開始測試到測試完成共7天，目的是了解天然水樣中碘含量的穩(wěn)定性。

2.結(jié)果

2.1 兩種方法的檢測下限

Sandell-Kolthoff反應(yīng)是痕量碘測定的經(jīng)典方法，其檢測靈敏度很高，本研究的兩種方法均基于該反應(yīng)原理。計算6次等精密度空白測試的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差，求得國家標(biāo)準(zhǔn)方法在本實驗室復(fù)檢的檢測下限為0.33μg/L；試劑盒法用指示劑指示反應(yīng)終點，通過計取反應(yīng)時間測定水碘，實驗結(jié)果是反應(yīng)時間很長，大約在1小時40分左右。通過計算得出檢測下限為0.0017μg/L,但在實際工作中不可能等待這么長的時間去確定檢測樣品的含量(表1）。

2.2 兩種方法檢測低濃度水樣結(jié)果比較

由于試劑盒法檢測限不易測出，檢測人員會關(guān)心5μg/L以下低濃度水樣用試劑盒法是否能檢測出以及其準(zhǔn)確性如何。本試驗用兩種方法對低濃度水樣進(jìn)行了對比檢測，結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)顯著差異（表2）。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性

本實驗對兩種方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性進(jìn)行了分析（表3）。試劑盒法的相關(guān)系數(shù)較好，標(biāo)準(zhǔn)差較?。粐覙?biāo)準(zhǔn)方法低濃度范圍（0-10μg/L）相關(guān)系數(shù)較好，標(biāo)準(zhǔn)差較小，而高濃度范圍（10-100μg/L）相關(guān)系數(shù)的均數(shù)為0.994，標(biāo)準(zhǔn)差也比低濃度范圍大。

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)性分析

2.4 重現(xiàn)性精密度

在相同的實驗條件下，不同的時間里對同一樣品進(jìn)行m回n次等精密度測試，其標(biāo)準(zhǔn)偏差Sr=[ΣSn2/m]1/2即重現(xiàn)性精密度，其95%置信水平的最大允許誤差（或重現(xiàn)性區(qū)間）為Ir=Sr。它表明用相同的檢測方法，在相同的條件下對同一樣品進(jìn)行檢測，測得的任何兩個結(jié)果間的絕對差值超過Ir的可能性只有5%。如果測試結(jié)果超過了Ir，就有理由懷疑檢測結(jié)果的可靠性。國家標(biāo)準(zhǔn)方法的0.9C標(biāo)準(zhǔn)溶液為90μg/L ，試劑盒法的0.9C標(biāo)準(zhǔn)溶液為35μg/L 。從表4和表5可見國家標(biāo)準(zhǔn)方法測試0.9C標(biāo)準(zhǔn)溶液的重現(xiàn)性精密度優(yōu)于試劑盒法,國家標(biāo)準(zhǔn)方法的重現(xiàn)測試最大允許誤差也小于試劑盒法；試劑盒法測試水樣的重現(xiàn)性精密度優(yōu)于國家標(biāo)準(zhǔn)方法，試劑盒法的重現(xiàn)測試最大允許誤差也小于國家標(biāo)準(zhǔn)方法。首先因為試劑盒法測定水碘是用肉眼判定顏色的變化計取反應(yīng)時間，誤差比較大；其次0.9C標(biāo)準(zhǔn)溶液已經(jīng)接近試劑盒法的檢測上限，反應(yīng)時間非常短，大約在10秒左右，反應(yīng)時間相差1秒就會使結(jié)果有幾個微克升的誤差。這就是造成試劑盒法測試0.9C標(biāo)準(zhǔn)溶液的重現(xiàn)性精密度和最大允許誤差比較差的原因。試劑盒法測試水樣的結(jié)果比測試標(biāo)準(zhǔn)溶液的結(jié)果好，原因是表中水樣的濃度約為15μg/L左右，這個濃度在試劑盒法檢測范圍的中段，所用時間比較合適，所以試劑盒法測試水樣的重現(xiàn)性精密度優(yōu)于測試0.9C標(biāo)準(zhǔn)溶液，測試水樣的最大允許誤差也小于測試0.9C標(biāo)準(zhǔn)溶液。

表4 兩種方法測試0.9C標(biāo)準(zhǔn)溶液的重現(xiàn)性精密度和最大允許誤差

表5 兩種方法測試水樣的重現(xiàn)性精密度和最大允許誤差

表6 加標(biāo)水樣回收試驗演算

表7 回收率試驗統(tǒng)計分析

表8 兩種方法測試標(biāo)準(zhǔn)試樣和水樣的原始結(jié)果

2.5 準(zhǔn)確度的估算

準(zhǔn)確度的估算，一般采用測試樣品和測試加標(biāo)樣品，并計算其回收率。如果實測回收值與期望回收值無顯著差異，即可認(rèn)為實驗方法和操作過程無系統(tǒng)誤差。當(dāng)回收率滿足時，平均回收值可接受，一般方法的回收率應(yīng)在95%至105%之間。表6和表7顯示，國家標(biāo)準(zhǔn)方法和試劑盒法的回收率R/d分別為0.96和1.02，均符合方法學(xué)要求，說明干擾測試的因素和由標(biāo)準(zhǔn)與空白帶入的偏性很小。

2.6 水樣中待測組分的穩(wěn)定性

本文對比了兩種方法對標(biāo)準(zhǔn)試樣和水樣等精密度測試的方差分析結(jié)果，旨在觀察水樣中碘含量的變化情況。表8和表9顯示，兩種方法對標(biāo)準(zhǔn)試樣、水樣測試的批內(nèi)和批間變異均無統(tǒng)計學(xué)顯著差異，說明天然水樣中碘含量在觀察期即7天內(nèi)是穩(wěn)定的。

表9 兩種方法碘含量檢測變異的方差分析

3.討論

本研究通過對比兩種方法在空白實驗、檢測低濃度水樣、標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)性、重現(xiàn)性精密度、準(zhǔn)確度的估算和對標(biāo)準(zhǔn)試樣、水樣檢測批內(nèi)批間變異的方差分析，得出以下結(jié)論：

從方法學(xué)角度分析，試劑盒法與國家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測水碘具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，其分析測試誤差是可以接受的。

國家標(biāo)準(zhǔn)方法的優(yōu)缺點：國家標(biāo)準(zhǔn)方法采用分光光度計比色，較目測比色準(zhǔn)確。但該方法試劑種類多，檢測步驟繁瑣，操作各環(huán)節(jié)易被污染，工作量大，費時（60-80個樣/每天）；且由于反應(yīng)中砷鈰濃度比例不合理，使10-100 μg/L檢測范圍的標(biāo)準(zhǔn)曲線精度比較差，此方法有待于進(jìn)一步改進(jìn)。

試劑盒法的優(yōu)缺點：不需儀器設(shè)備，現(xiàn)場即可操作，取樣量小，操作簡單，方便，快捷，省時（200-300個樣/每天）。但肉眼觀察顏色需要培訓(xùn)來熟練。標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍0-40μg/L雖然兼顧了低濃度和較高濃度的水碘測定，但測定高濃度樣品時反應(yīng)時間很短，檢測極低濃度樣品時反應(yīng)時間過長。建議研制分別適應(yīng)低濃度水樣和高濃度水樣的兩種檢測試劑盒。

[1]中國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化委員會.GB/T 5750.5-2006.生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法： 無機非金屬指標(biāo),2007.07.01