江延輝

(黑龍江省智誠(chéng)醫(yī)藥科技有限公司，黑龍江 哈爾濱 150060)

HPLC-ELSD測(cè)定復(fù)方芪參片中黃芪甲苷的含量

江延輝

(黑龍江省智誠(chéng)醫(yī)藥科技有限公司，黑龍江 哈爾濱 150060)

目的：建立復(fù)方芪參片的質(zhì)量控制方法。方法：采用RP-HPLC法，Kromasil 100A C18色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70)；漂浮管溫度:40 ℃。流速:1.0 mL·min-1，載氣流速:2.8 L·min-1。結(jié)果：在0.844 4～13.510 4 μg范圍內(nèi)，黃芪甲苷峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系，r=0.999 9；平均回收率為98.48%，RSD=0.42%。結(jié)論：本方法靈活、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方芪參片中黃芪甲苷含量的質(zhì)量控制。

高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測(cè)法；復(fù)方芪參片；黃芪甲苷

復(fù)方芪參片是我公司研制的中藥復(fù)方制劑，由黃芪、丹參、白芍、三七等中藥組成，具有益氣，活血，通絡(luò)之功效。臨床用于中風(fēng)后遺癥屬氣虛血瘀所致的半身不遂或麻木，口眼歪斜，語(yǔ)言不利者。我們通過(guò)引入蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，采用HPLC-ELSD測(cè)定法對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，結(jié)果表明此法準(zhǔn)確，精密度、重現(xiàn)性好，回收率高，陰性對(duì)照顯示制劑中其他成分對(duì)黃芪甲苷的測(cè)定無(wú)干擾，可作為該制劑含量測(cè)定的指標(biāo)。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀：日本島津LC-10ATvp溶劑輸送泵；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：SEDEX75(法國(guó))；XWK-3A空氣泵(天津市分析儀器廠)，Sartorius AGME253S電子分析天平(德國(guó)賽多利斯)。

復(fù)方芪參片(本公司自制，批號(hào)：20120501，20120502，20120503)；黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：0781-201201)。乙腈為色譜純(美國(guó)，Tedia公司)，其他試劑均為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法和結(jié)果[1-6]

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100A C18column(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(30∶70)；流速1.0 mL·min-1。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器：漂浮管溫度40 ℃，霧化氣體為高純空氣，載氣流速2.8 L·min-1。對(duì)照品溶液進(jìn)樣量為10，20 μL；供試品溶液進(jìn)樣量為2 0μL。在此色譜條件下黃芪甲苷峰與其他峰達(dá)到基線分離，陰性空白溶液沒(méi)有干擾，對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液色譜圖見(jiàn)圖1～3。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在60 ℃減壓干燥4 h的黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，研細(xì)，取約5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率220 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25 mL濃縮至干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，移入分液漏斗中，用乙醚振搖提取2次，每次10 mL，棄去乙醚液；再用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次20 mL，必要時(shí)50 ℃加熱消除乳化層，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，放冷，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm)，以水50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1.黃芪甲苷?qǐng)D1 黃芪甲苷對(duì)照品HPLC圖

1.黃芪甲苷?qǐng)D2 復(fù)方芪參片供試品HPLC圖

圖3 缺黃芪陰性對(duì)照品HPLC圖

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按本品處方比例稱取除黃芪外的其余中藥適量，依照制劑工藝制成陰性對(duì)照制劑，照供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 線性試驗(yàn)

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品21.11 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液。精密吸取對(duì)照品貯備溶液0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別取上述對(duì)照品溶液及貯備液各20 μL注入液相色譜儀，測(cè)定黃芪甲苷的峰面積，以進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，峰面積的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=1.835 7X+2.054 9(r=0.999 9)。說(shuō)明黃芪甲苷在0.844 4～13.510 4 μg，黃芪甲苷峰面積的對(duì)數(shù)值與進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液20 μL，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液峰面積值的RSD=1.282%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h，精密吸取20 μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，供試品溶液的峰面積值的RSD=0.562%，說(shuō)明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品6份，按上述供試品溶液的制備方法制備成供試品溶液，在相同色譜條件下測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的峰面積，計(jì)算黃芪甲苷的含量。結(jié)果表明，6份樣品中黃芪甲苷含量的RSD=0.735%，說(shuō)明含量測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)20120501，含量0.228 mg·g-1)約3g，置具塞錐形瓶中，精密加入黃芪甲苷對(duì)照品貯備液(0.410 4 mg·mL-1)1.5 mL，水浴揮干甲醇，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，并按照上述色譜條件，分別吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定黃芪甲苷的峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方芪參片中黃芪甲苷回收率測(cè)定

注：黃芪甲苷對(duì)照品加入量均為0.615 6 mg

2.8 樣品含量測(cè)定

按照上述含量測(cè)定方法，分別對(duì)20120501，20120502，20120503 3批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果分別為0.228，0.224，0.236 mg·g-1。

3 討論

3.1 提取方法考察

實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)提取溶劑甲醇、70%甲醇、70%乙醇的比較研究，結(jié)果表明甲醇提取所得的黃芪甲苷含量最高，所以選擇甲醇作為提取溶劑。提取方法考察了超聲提取30 min、加熱回流1 h、冷浸過(guò)夜后索氏提取至無(wú)色等3種提取方法，結(jié)果表明3種提取方法的提取率基本接近；考慮到超聲提取法具有方便、快捷等特點(diǎn)，所以選擇超聲提取30 min為提取方法。

3.2 前處理方法考察

在供試品溶液制備中，我們比較了經(jīng)過(guò)和不經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂純化的樣品，發(fā)現(xiàn)不經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂純化的黃芪空白對(duì)照品對(duì)黃芪甲苷的測(cè)定有部分干擾，因此確定了供試品溶液通過(guò)大孔樹(shù)脂柱純化。

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DeterminationofAstragalosideinFufangQishenTabletsbyHPLC-ELSD

JIANG Yan-hui

(HeilongjiangProvinceZhichengMedicineTechnologyCo.Ltd.，Harbin150060,China)

Objective：To establish a HPLC determination method of astragaloside in Fufang Qishen Tablets.Methods： The separation was performed on the Kromasil 100A C18column (200 mm×4.6 mm，5 μm) ;the mobile phase was acetonitrile-water (30∶70); the temperature of the drift tube was set at 40 ℃，the flow rate was 1.0 mL·min-1，the flow rate of gas was set at 2.8 L·min-1.Results：The linear range of astragaloside was 0.844 4～13.510 4 μg (r=0.999 9)，the average recovery rate was 98.48%，RSD was 0.42%.Conclusion:The method is accurate，precise，repeatable and suitable for the quality control of astragaloside in Fufang Qishen Tablets.

HPLC-ELSD; Fufang Qishen Tablets; Astragaloside

2012-11-22)

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江延輝，E-mail：jyhcgf28401@yahoo.com.cn