徐陸亭 趙瑞景 董增軍 朱鐵年

在過(guò)去的十年里，針對(duì)腫瘤重要分子標(biāo)志及信號(hào)傳導(dǎo)途徑治療癌癥的靶向藥物研究取得了重大進(jìn)展。根據(jù)分子標(biāo)志篩選特定的疾病人群，應(yīng)用阻斷此標(biāo)志的小分子化合物或單克隆抗體為腫瘤靶向治療提供了個(gè)體化治療模式的新思路，即發(fā)現(xiàn)新靶標(biāo)，開(kāi)發(fā)靶向治療新藥物，篩選靶向藥物治療患者。作為肺癌驅(qū)動(dòng)基因之一的表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor, EGFR）酪氨酸激酶突變體的發(fā)現(xiàn)開(kāi)啟了非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）靶向治療之門[1]。對(duì)EGFR酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitors, TKIs）的臨床研究歷程，從非選擇患者到選擇特定患者治療群，從臨床病理選擇到分子標(biāo)志物檢測(cè)EGFR基因突變，而以EGFR-TKIs一線治療EGFR基因突變患者的成功，標(biāo)志性的奠定和推動(dòng)了肺癌個(gè)體化治療的進(jìn)程[2,3]。近兩年針對(duì)間變性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase, ALK）融合基因的NSCLC靶向治療的再次成功為肺癌驅(qū)動(dòng)基因的研究錦上添花[4-6]，而越來(lái)越多的肺癌相關(guān)驅(qū)動(dòng)基因的發(fā)現(xiàn)（如ROS1、RET、KRAS、HER2、BRAF、PI3KCA、MEK1/2、MET等），終將為NSCLC個(gè)體化治療鋪就藍(lán)圖[7]。本文對(duì)新發(fā)現(xiàn)ROS1融合基因靶點(diǎn)及針對(duì)這些靶點(diǎn)的檢測(cè)方法以及藥物治療進(jìn)展做一綜述。

1 ROS1結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性

受體酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase, RTK）是多種生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和激素的高親和力細(xì)胞表面受體和胞內(nèi)受體偶聯(lián)的酪氨酸蛋白激酶總和。EGFR屬于I類RTK的EGFR/ErbB家族，而ALK屬于X類RTK的LTK 家族，ROS 1則屬于II類RTK的胰島素受體家族。作為一個(gè)獨(dú)特的受體酪氨酸激酶，ROS1在進(jìn)化上相對(duì)保守。1982年，ROS1在UR2鳥(niǎo)肉瘤病毒中被確定為具有獨(dú)特致癌作用的病毒原癌基因，此v-ROS1與gag基因發(fā)生融合而高表達(dá)具有致癌作用的蛋白質(zhì)酪氨酸激酶融合蛋白p68gag-ROS[8,9]。哺乳動(dòng)物原癌基因c-ROS1位于第6號(hào)染色體q21區(qū)，全長(zhǎng)cDNA包含44個(gè)外顯子，編碼2347個(gè)氨基酸，分子量為259 kDa?；窘Y(jié)構(gòu)由胞外N-末端配體結(jié)合區(qū)（氨基酸1-1861）、跨膜區(qū)（氨基酸1862-1882）及胞內(nèi)C-末端464個(gè)氨基酸構(gòu)成的酪氨酸激酶活性區(qū)（氨基酸1883-2347）組成[10]。盡管ROS1為少數(shù)孤兒受體RTK，而缺乏對(duì)其配體的認(rèn)知，但在蛋白質(zhì)序列與結(jié)構(gòu)分析上屬于II類RTK胰島素受體家族。最近的氨基酸序列分析顯示，在酪氨酸激酶區(qū)ROS1與ALK有49%的同源性，因?yàn)锳LK酪氨酸激酶小分子抑制劑克唑替尼（crizotinib）的作用靶點(diǎn)在ALK激酶催化區(qū)的ATP結(jié)合位點(diǎn)，ROS1激酶催化區(qū)的ATP結(jié)合位點(diǎn)與ALK激酶催化區(qū)的ATP結(jié)合位點(diǎn)二者同源性高達(dá)77%[11]，因此ALK酪氨酸激酶小分子抑制劑克唑替尼（crizotinib）在治療ROS1發(fā)生融合變異的NSCLC中具有明顯療效[12-15]。

盡管ROS1受體酪氨酸激酶在人體正常組織的功能尚未明了，但ROS1異位表達(dá)以及ROS1激酶的變異活化見(jiàn)于諸多腫瘤，如多形性神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、非小細(xì)胞肺癌以及肝外膽管癌，顯示ROS1激酶活化誘導(dǎo)細(xì)胞的異常增殖與存活。在致病機(jī)理方面，盡管缺乏ROS1激活的合適配體或小分子激活劑，先前應(yīng)用點(diǎn)突變和EGFR胞外受體部分構(gòu)建的EGFR-ROS1嵌合蛋白表達(dá)技術(shù)業(yè)已證明，ROS1受體酪氨酸激酶參與激活多條下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，包括RASMAPK/ERK、PI3K/AKT/mTOR、JAK/STAT3以及PLCγ/IP3和SHP2/VAV3途徑。前三者與腫瘤細(xì)胞增殖與存活有關(guān)，而后兩者介導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化和參與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和遷移[11,16,17]。最近Gu等[18]在鼠白血病細(xì)胞系Ba/F3中高表達(dá)不同亞型的FIG-ROS1[fusion in glioblastoma (FIG)-ROS1]融合基因再次證明上述5種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與ROS1融合蛋白的致瘤作用。此外，ROS1激酶結(jié)合細(xì)胞骨架蛋白和細(xì)胞-細(xì)胞相互作用蛋白，直接或間接介導(dǎo)細(xì)胞骨架蛋白磷酸化，參與正常細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過(guò)程[19]。盡管類似其它RTK二聚化進(jìn)而誘導(dǎo)其激酶活性異?；罨哪Ｊ皆趫?bào)道中只是推測(cè)，但是多項(xiàng)試驗(yàn)[20,21]證明活化誘導(dǎo)ROS1-RTK胞內(nèi)激酶催化區(qū)酪氨酸自身磷酸化（Y2274和Y2334）在正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化至瘤作用中尤為重要。

2 ROS1融合基因

迄今為止，在非小細(xì)胞肺癌中已發(fā)現(xiàn)至少有9種不同的ROS1融合基因（圖1），包括最早發(fā)現(xiàn)于神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的FIG-ROS1以及CD74-ROS1、SLC34A2-ROS1、TPM3-ROS1、SDC4-ROS1、EZR-ROS1、LRIG3-ROS1、KDELR2-ROS1和CCDC6-ROS1[21-27]。1987年在多形性神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株U118MG中首先發(fā)現(xiàn)了FIG-ROS1融合基因[28]。FIG-ROS1融合基因的形成源于膠質(zhì)母細(xì)胞瘤第6號(hào)染色體內(nèi)FIG和ROS1基因間一段240 kb DNA片段缺失（6q21）導(dǎo)致FIG-ROS1基因融合并持續(xù)表達(dá)活化的ROS1 RTK激酶[22]。最近，美國(guó)Cell Signaling Technology公司的科學(xué)家應(yīng)用自制的高敏感高特異兔單克隆抗體建立的免疫組織化學(xué)染色技術(shù)結(jié)合已知融合伙伴序列的RT-PCR技術(shù)在NSCLC中國(guó)人群中篩查ROS1融合基因時(shí)，除了檢測(cè)到SLC34A2-ROS1和CD74-ROS1兩種常見(jiàn)的融合基因外，還首次在NSCLC中發(fā)現(xiàn)了FIG-ROS1融合基因[25]。

早在2007年科學(xué)家們?cè)趹?yīng)用酪氨酸激酶蛋白組學(xué)技術(shù)篩選腫瘤致癌基因時(shí)就發(fā)現(xiàn)了在NSCLC中存在ROS1基因重排現(xiàn)象[5,23]。文中作者對(duì)41例NSCLC細(xì)胞株和150例中NSCLC患者的腫瘤樣本進(jìn)行了大規(guī)模的酪氨酸激酶篩選。結(jié)果除了發(fā)現(xiàn)ALK基因重排外，還發(fā)現(xiàn)1例NSCLC細(xì)胞株（HCC78）和1例患者的腫瘤樣本中有ROS1基因重排；通過(guò)RT-PCR和DNA測(cè)序確定了兩個(gè)獨(dú)立的ROS1融合產(chǎn)物，即SLC34A2-ROS1和CD74-ROS1融合基因。在HCC78細(xì)胞系中，鈉磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員A2（SLC34A2）N-末端部分序列與ROS1部分跨膜區(qū)及全部胞內(nèi)C-末端形成兩種不同長(zhǎng)度的SLC34A2-ROS1融合蛋白。盡管SLC34A2蛋白在人體組織中廣泛表達(dá)，但SLC34A2在小鼠II型肺泡上皮的表達(dá)參與了肺泡表面活性劑的合成，而SLC34A2基因突變與肺泡微小結(jié)石癥形成有關(guān)，從而推斷SLC34A2-ROS1基因重排可能參與了NSCLC的發(fā)病機(jī)制[29]。此HCC78細(xì)胞系后來(lái)被廣泛應(yīng)用于ROS1融合基因的研究。在1例NSCLC患者樣本中，CD74的外顯子1-6與ROS1部分胞膜和/或胞內(nèi)C-末端氨基酸序列（包括外顯子32/34到44）也形成兩種不同長(zhǎng)度的CD74-ROS1融合蛋白（圖1）。CD74-ROS1基因重排在ROS1基因重排中最為常見(jiàn)，約占30%。CD74具有巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（macrophage migration inhibition factor,MIF）受體功能，MIF-CD74相互作用參與非受體酪氨酸激酶介導(dǎo)的MAPK和Rho GTP酶活化，因而對(duì)巨噬細(xì)胞在宿主防御功能有調(diào)節(jié)作用[30,31]。CD74同時(shí)作為一個(gè)MHC II類分子相關(guān)蛋白，部分參與了MHC II類蛋白的形成和運(yùn)輸。隨后的體外和小動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)證明SCL34A2-ROS1和CD74-ROS1具有致癌作用[18,32]，而且后者還通過(guò)E-Syt1介導(dǎo)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[32]。此后近兩年如火如荼尋找肺癌驅(qū)動(dòng)基因的研究[14,24,26,33]進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了TPM3-ROS1、SDC4-ROS1、LRIG-ROS1、EZR-ROS1和KDELR2-ROS1融合基因，并且均被證明在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)有致癌作用。

由于存在SCL34A2-ROS1基因重排的HCC78細(xì)胞系與上述其它ROS1融合基因在人或鼠真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染體系相比對(duì)克唑替尼只有中度敏感[12-14]，因此認(rèn)為ROS1融合伙伴對(duì)ROS1酪氨酸激酶活性的影響因其亞細(xì)胞定位的差異可能反映出ROS1基因重組陽(yáng)性腫瘤的臨床病理表現(xiàn)和自然形成能力的潛在差異。比如，F(xiàn)IG-ROS1（S）和FIG-ROS1（L）之間的激酶活性和轉(zhuǎn)化作用的差異歸因于其在亞細(xì)胞的定位差異[18]。

與EML4-ALK基因重排產(chǎn)生的EML4-ALK融合蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)不同，不同的ROS1融合蛋白在細(xì)胞中的定位包括彌漫性胞漿分布、核周聚集、胞內(nèi)微泡以及跨膜分布。SCL34A2-ROS1和CD74-ROS1為跨膜蛋白，而FIGROS1定位于細(xì)胞質(zhì)或高爾基體。但是這些融合伙伴對(duì)NSCLC的致病作用還有待今后證明[11,18,23]。最后，值得注意的是上述不同類型的ROS1基因重排而非ROS1自身突變參與了NSCLC的致病作用，因?yàn)樵贜SCLC中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何ROS1激酶結(jié)構(gòu)域有突變產(chǎn)生。相反，在結(jié)腸癌、卵巢癌、乳腺癌以及NSCLC非腺癌亞型中出現(xiàn)低頻率的ROS1基因突變，但這些突變的意義尚且未知[11,23]。

3 ROS1融合基因在NSCLC中的臨床特征

圖 1 非小細(xì)胞肺癌中ROS1基因重排類型。外顯子E32、E34和E35為ROS1融合基因斷裂部位。TM為ROS1跨膜部分。Fig 1 Type of ROS1 rearrangement in nonsmall cell lung cancer. Exons 32, 34 and 35 are the ROS1 fusion gene splicing domain.TM is transmembrane domain of ROS1.

ROS1基因重排與ALK基因重排在NSCLC中于2007年被同時(shí)發(fā)現(xiàn)[23]。由于ALK/MET多靶點(diǎn)RTK小分子抑制劑克唑替尼的成功研發(fā)，2008年全球首個(gè)ALK基因重排臨床治療試驗(yàn)在美國(guó)開(kāi)始篩選和招募治療NSCLC的ALK基因重排患者[4,34]。盡管在NSCLC中只有3%-7% ALK基因重排，但臨床治療的巨大成功，使得ALK激酶抑制劑克唑替尼快速獲得FDA批準(zhǔn)用于EGFR無(wú)突變、ALK重排陽(yáng)性的NSCLC的個(gè)體化治療[6]。相反由于沒(méi)有相應(yīng)的ROS1激酶小分子抑制劑，針對(duì)ROS1基因重排的NSCLC臨床治療僅在最近相繼報(bào)道[12-15]。這得益于體外實(shí)驗(yàn)證明克唑替尼能夠有效抑制含有SLC34A2-ROS1基因重排而無(wú)任何ALK重排變異的NSCLC細(xì)胞系HCC78的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)其凋亡[35]。

ROS1基因重排代表一類新的獨(dú)特的NSCLC分子亞型，其發(fā)生頻率為1%-2%，遠(yuǎn)低于EGFR突變（10%-40%）和 ALK重排變異（3%-7%），且存在一定的種族差異[11,36]。但在EGFR/KRAS/ALK均陰性的人群中的發(fā)生率則可明顯提高到5.7%[36]。ROS1基因重排陽(yáng)性與ALK重排陽(yáng)性的NSCLC患者具有相似性的臨床特征，即為年輕、從不吸煙且為高惡性度趨勢(shì)的肺腺癌患者[12,37]。哈佛大學(xué)麻省總醫(yī)院的Bergethon等[12]分析了18例ROS1陽(yáng)性患者的臨床資料。結(jié)果顯示，NSCLC中ROS1陽(yáng)性患者與ALK陽(yáng)性患者的臨床特征有著明顯重疊性，ROS1陽(yáng)性患者同樣具有患病年齡年輕化（平均年齡49.8歲），從未吸煙的晚期（臨床IV期）肺腺癌患者，而且亞洲患者占多數(shù)。此外，ROS1重排陽(yáng)性的腫瘤多為低分化非典型性浸潤(rùn)癌。盡管麻省總醫(yī)院在案治療的浸潤(rùn)性NSCLC患者的總生存率（overall survival,OS）在ROS1重排陽(yáng)性（663天）和陰性患者（607天）之間未見(jiàn)差別，但統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，ROS1重排陰性患者的預(yù)后較好。國(guó)內(nèi)上海同濟(jì)大學(xué)周彩存課題組[38]對(duì)8例ROS1重排陽(yáng)性者進(jìn)行了臨床病例分析發(fā)現(xiàn)在中國(guó)人群中ROS1重排陰性的患者相比ROS1重排陽(yáng)性預(yù)后好，但是在此小樣本范圍內(nèi)兩組患者間未能在年齡、性別及有無(wú)吸煙史上發(fā)現(xiàn)差別。

4 ROS1融合基因的檢測(cè)

在各類腫瘤研究領(lǐng)域，基于分子標(biāo)志物及癌癥驅(qū)動(dòng)基因的研究和臨床試驗(yàn)取得了明顯進(jìn)展。EGFR基因突變、ALK基因融合變異、ROS1基因融合等分子靶點(diǎn)及其抑制劑的關(guān)系均進(jìn)一步得到臨床試驗(yàn)證實(shí)。然而，正如ALK基因重排只占肺癌的3%-7%，ROS1基因重排占肺癌比例更低1%-2%，因此，成功篩選病例是使用ROS1抑制劑進(jìn)行個(gè)體化治療成功的關(guān)鍵。目前，用于檢測(cè)肺癌融合基因方法有多種，主要包括RT-PCR、熒光原位雜交和免疫組組織化學(xué)技術(shù)。

斷裂熒光原位雜交（break-apart/Split FISH）技術(shù)是目前獲得FDA批準(zhǔn)的用于檢測(cè)ALK融合基因的方法[4]，也是ROS1融合基因臨床檢測(cè)的常用方法[12,14,24]。FISH斷裂探針為正常ALK或ROS1基因的5’-和3’-端不同標(biāo)記有綠色和紅色熒光的探針。正常情況下（無(wú)融合基因），這兩個(gè)探針雜交結(jié)合于同一個(gè)基因，在熒光顯微鏡下顯示為接近在一起的綠色和紅色信號(hào)或二者重疊在一起的黃色信號(hào)。當(dāng)存在基因重排時(shí)，綠色和紅色信號(hào)因重組融合伙伴的置換而“斷裂”顯現(xiàn)為分離較遠(yuǎn)的單色信號(hào)。理論上，F(xiàn)ISH適用于檢測(cè)任何一種融合伙伴及任何類型基因重排。但是，如果染色體倒位或缺失較小，兩個(gè)探針相距小于12M bp，顯微鏡下分裂信號(hào)微小，檢測(cè)具有挑戰(zhàn)性，因此，針對(duì)RT-PCR確診或IHC陽(yáng)性的融合基因而FISH檢測(cè)結(jié)果卻出現(xiàn)假陰性。FISH缺點(diǎn)包括相對(duì)高的成本，需要專用設(shè)備，試劑昂貴，較長(zhǎng)的處理時(shí)間，以及高水準(zhǔn)的專業(yè)診斷技術(shù)，因而不為大多數(shù)臨床病理實(shí)驗(yàn)室所具備。另外，F(xiàn)ISH方法不能鑒別融合基因的融合伙伴，是相對(duì)較低通量的檢測(cè)。Bergethon等[12]應(yīng)用斷裂FISH技術(shù)，對(duì)1,073例NSCLC患者進(jìn)行篩查，發(fā)現(xiàn)18例ROS1基因重排病例，陽(yáng)性率約為1.7%。進(jìn)一步通過(guò)RT-PCR證實(shí)含有SLC34A2-ROS1和CD74-ROS1融合基因。Takeuchi等對(duì)1,476例日本NSCLC患者使用FISH技術(shù)確定了13個(gè)ROS1融合基因，陽(yáng)性率為0.9%（包括CD74-ROS 11例，SLC34A2-ROS 11例，SDC4-ROS 13例，TPM3-ROS 12例，LRIG3-ROS 11例和1例未知）。同樣，Davies等[14]在最近的一項(xiàng)研究中應(yīng)用FISH技術(shù)發(fā)現(xiàn)ROS1基因重排陽(yáng)性率為1.2%（428例中有5例陽(yáng)性）。

RT-PCR技術(shù)簡(jiǎn)單快速準(zhǔn)確。染色體倒位或缺失融合致使該基因DNA序列具有特殊性，PCR引物只與融合基因轉(zhuǎn)錄子相結(jié)合，從而使得此方法具有高靈敏度，并可確定融合基因的融合伙伴。同時(shí)，該方法適用于微量組織標(biāo)本，比如病人痰標(biāo)本或用支氣管鏡取得的活檢組織，因而RTPCR技術(shù)篩選和確認(rèn)肺癌基因重組具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。RTPCR缺點(diǎn)：需要足夠的高質(zhì)量沒(méi)有污染的RNA，這在福爾馬林固定和石蠟包埋的常規(guī)腫瘤標(biāo)本通常很難獲得。此外，大量潛在的ROS1融合蛋白及其變體的存在，則需要足夠大的PCR引物組以涵蓋所有潛在的ROS1重組基因。還有，RTPCR結(jié)果常常出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此，該方法難以成為常規(guī)臨床檢測(cè)方法。上海同濟(jì)大學(xué)周彩存課題組[38]應(yīng)用多重RT-PCR技術(shù)篩選了392例中國(guó)人NSCLC患者的FFPE標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)8例ROS1基因重排，重排率約為2.0%。另一項(xiàng)研究[39]對(duì)202例中國(guó)人肺腺癌患者進(jìn)行RT-PCR篩選，ROS1陽(yáng)性率為1%。

免疫組織化學(xué)染色在臨床病理實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用極為普遍，而且免疫組化具有低成本、簡(jiǎn)便快速和不失準(zhǔn)確性，對(duì)包括ALK、ROS1基因重排的患者亞群篩選是一個(gè)理想的工具。但I(xiàn)HC對(duì)臨床疾病生物標(biāo)記分子的檢測(cè)需要高質(zhì)量的單克隆抗體，尤其對(duì)組織中低水平蛋白表達(dá)的檢測(cè)。比如，早期使用鼠ALK單克隆抗體來(lái)診斷NSCLC患者ALK融合蛋白的檢測(cè)效果很不理想，原因是ALK融合蛋白在肺癌中的表達(dá)比在ALCL中要低很多。新近采用高敏感高特異的單克隆抗體所進(jìn)行的IHC染色方法檢測(cè)ALK、ROS1基因重排，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與斷裂FISH技術(shù)相比，準(zhǔn)確度可達(dá)到100%，特異性高達(dá)99%[25,40]。IHC缺點(diǎn)：IHC染色對(duì)不同組織測(cè)試點(diǎn)之間存在差別，并且IHC不能區(qū)分ROS1野生型和重排型。

總之，雖然FISH是目前肺癌融合基因診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是每個(gè)方法都難免有優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)（表1）。我們應(yīng)根據(jù)每種技術(shù)的敏感性、特異性及其檢測(cè)局限性將它們應(yīng)用到臨床檢測(cè)中。盡管ROS1基因重排陽(yáng)性率很低，但如果以臨床病理特征為基礎(chǔ)來(lái)檢測(cè)ROS1融合基因，在排除EGFR突變、KRAS突變、HER突變、p53突變以及ALK融合變異后，正如EML4-ALK融合基因的檢出率由占全部NSCLC的3%上升到約占25%[41]，ROS1融合變異的檢出率也會(huì)大大增加，從而為肺癌個(gè)體化治療提供有效的診斷基礎(chǔ)。

5 ROS1靶向治療NSCLC

5.1 ROS1激酶抑制劑 ROS1受體酪氨酸激酶是一個(gè)重要的癌癥驅(qū)動(dòng)基因，所以靶向定位抑制它的激酶活性，可以提供更有效的和有選擇性的治療由它衍生出來(lái)的癌癥。RTK選擇性抑制劑的研發(fā)是當(dāng)今靶向治療NSCLC領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。早期研發(fā)的Staurosporine等能高效抑制ROS1激酶活性（IC50=0.9 nM），但其選擇性較差，因而限制了其臨床應(yīng)用[42]。AZD1480最近被證明在體外可抑制ROS1激酶活性，在動(dòng)物體內(nèi)可明顯縮小ROS1融合所致腫瘤大小，結(jié)合其實(shí)質(zhì)為JAK1/2特異性抑制劑，可阻斷STAT3信號(hào)通路，從而具有抑制ROS1基因重排誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生[43]。再有，El-Deeb等[44]合成了針對(duì)ROS1激酶的小分子抑制劑并對(duì)其在45種以上不同的受體酪氨酸激酶的抑制作用進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)小分子抑制劑KIST301072和KIST301080具有高特異的抑制ROS1激酶活性（IC50分別為199 nM和209 nM），其臨床前研究尚需進(jìn)一步得到肯定（表2）。

表 1 ROS1基因重排檢測(cè)方法Tab 1 Detection methods of ROS1 rearrangement

表 2 ROS1酪氨酸激酶劑的IC50Tab 2 IC50 of selected ROS1 tyrosine inhibitors

5.2 ALK激酶抑制劑 由于目前針對(duì)ROS1酶特異抑制劑的研究尚不成功，而氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，ALK和ROS1激酶結(jié)構(gòu)域間約有49%氨基酸序列同源性，而且ALK和ROS1激酶結(jié)構(gòu)域ATP-結(jié)合位點(diǎn)區(qū)域的同源性更高達(dá)77%[11]。因此，ALK激酶抑制劑可能還抑制ROS1激酶活性。

5.2.1 臨床前研究 在發(fā)現(xiàn)NSCLC中存在ALK基因重排后不久，科學(xué)家即發(fā)現(xiàn)ALK激酶抑制劑對(duì)ROS1激酶有抑制作用。McDermott等[35]在對(duì)NVP-TAE684（一種特異ALK酪氨酸激酶抑制劑）處理的602個(gè)腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行篩查時(shí)發(fā)現(xiàn)，包括NSCLC、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和間變性大細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系在內(nèi)的10個(gè)腫瘤細(xì)胞系對(duì)TAE684治療敏感，其中包括SLC34A2-ROS1重排陽(yáng)性而無(wú)任何ALK重排的NSCLC細(xì)胞株HCC78[23]，這一結(jié)果提供了ALK激酶抑制劑對(duì)ROS1酪氨酸激酶有抑制作用的直接證據(jù)。隨后的試驗(yàn)再次證明，TAE684還具有抑制FIG-ROS1融合變異轉(zhuǎn)染的Ba/F3細(xì)胞系[18]。此外，ALK/MET多靶點(diǎn)激酶抑制劑克唑替尼也可適度或全部抑制上述HCC78細(xì)胞系或CD74-ROS1轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞系[12]、SDC4-ROS1轉(zhuǎn)染的Ba/F3細(xì)胞系[14,25]以及EZR-ROS1轉(zhuǎn)染的小鼠NIH3T3細(xì)胞系[33]。上述研究進(jìn)一步證明ALK激酶抑制劑的作用機(jī)理是可逆性地結(jié)合于ROS1激酶結(jié)合區(qū)，從而抑制了Tyr2774的自身磷酸化，阻斷了激酶活化誘導(dǎo)的下游信號(hào)活化通路[11]。

5.2.2 臨床研究 Bergethon等[12]最先成功報(bào)道ALK激酶抑制劑克唑替尼治療ROS1重排變異單病例NSCLC患者?；颊邽?1歲年輕男性，從不吸煙，屬腺癌亞型，未見(jiàn)EGFR突變和ALK重排。對(duì)厄洛替尼治療無(wú)效，且逐步惡化。經(jīng)額外基因檢測(cè)為ROS1重排陽(yáng)性，并開(kāi)始克唑替尼標(biāo)準(zhǔn)治療（劑量為250 mg，每日兩次）。不到1周，患者臨床癥狀明顯改善，2周后缺氧消失，8周時(shí)CT掃描肺部腫瘤病灶幾乎完全消失?；颊呃^續(xù)用藥6個(gè)月無(wú)復(fù)發(fā)跡象。在此基礎(chǔ)上，同一課題組在今年6月的芝加哥2013年ASCO年會(huì)上報(bào)道了克唑替尼治療ROS1基因重排較大樣本的I期臨床試驗(yàn)，包括31例ROS1陽(yáng)性晚期NSCLC患者。在治療8周和16周時(shí)患者的疾病控制率分別達(dá)到76%和60%。治療總緩解率為56%，包括2例完全緩解，12例部分緩解和8例疾病穩(wěn)定。6個(gè)月無(wú)進(jìn)展生存率達(dá)到71%。這表明，克唑替尼對(duì)ROS1重排陽(yáng)性NSCLC患者有明顯治療效果[13]。同樣結(jié)果見(jiàn)于另外2例報(bào)道，在患者對(duì)EGFR-TKI一線治療無(wú)效的基礎(chǔ)上，篩查到ROS1重排變異，結(jié)果患者對(duì)克唑替尼治療8周后出現(xiàn)奇效，其中1例患者證明存在有SDC4-ROS1基因重排[14,15]?？诉蛱婺釋?duì)ROS1重排陽(yáng)性腫瘤患者的臨床療效尚需更大樣本、更多臨床研究單位參與和證實(shí)。 隨著新的ALK激酶抑制劑的出現(xiàn)[45,46]，其對(duì)ROS1融合變異的NSCLC患者的臨床I期試驗(yàn)也正在進(jìn)行中。

以上充分體現(xiàn)了實(shí)施快速分子診斷技術(shù)發(fā)現(xiàn)新的肺癌亞型，以制定針對(duì)特定病人的個(gè)體化治療的重要性。但這項(xiàng)研究的成功也使得臨床應(yīng)用分子診斷越來(lái)越復(fù)雜，從常規(guī)檢測(cè)的EGFR、KRAS突變，到ALK重排、再到ROS1重排，以及今后包括的新靶點(diǎn)的檢測(cè)。目前臨床試驗(yàn)使用的ROS1基因重排的各種檢測(cè)方法尚未得到商業(yè)化。

6 展望

以分子分型為基礎(chǔ)的腫瘤靶向治療代表了腫瘤治療的最新發(fā)展方向，而根據(jù)基因檢測(cè)進(jìn)行分子分型、進(jìn)而合理選擇治療方案實(shí)施個(gè)體化療必將成為今后肺癌臨床治療的主流。ROS1重排陽(yáng)性作為一個(gè)新的NSCLC分子亞型，雖然罕見(jiàn)，但已經(jīng)成為一個(gè)有效的治療靶點(diǎn)，并期待今后臨床試驗(yàn)結(jié)果給予更完善更全面的佐證。未來(lái)的工作將包括檢測(cè)ROS1融合變異的最佳方法、完善ROS1重排陽(yáng)性腫瘤的治療群、鑒定ROS1融合蛋白下游信號(hào)通路、發(fā)現(xiàn)ROS1 RTK抑制劑出現(xiàn)抵抗的機(jī)理以及研發(fā)新的特異性ROS1酪氨酸激酶抑制劑。