曹鳳習(xí)，劉 暉 ，靳茂禮 ，周建敏，劉 珠

(1.河北省石家莊市食品藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050031;2.石藥集團(tuán)新諾威制藥股份有限公司，河北 石家莊 050031)

鹽酸地芬尼多(difenidol hydrochloride)是臨床常用的抗暈止吐藥，用于治療高血壓、美尼爾氏綜合征等引起的眩暈癥，口服吸收迅速，療效確切。鹽酸地芬尼多化學(xué)名為α，α－二苯基－1－哌啶丁醇鹽酸鹽，系由1，3－氯溴丙烷為原料，經(jīng)烷基化、格式反應(yīng)、水解、成鹽而得[1－2]。在其生產(chǎn)過程中極易產(chǎn)生1個(gè)主要雜質(zhì)，該雜質(zhì)是生產(chǎn)過程中因酸性介質(zhì)而產(chǎn)生的鹽酸地芬尼多的脫水產(chǎn)物，依據(jù)1990年版《中國(guó)藥典(二部)》藥典注釋[2]及相關(guān)文獻(xiàn)[3]，可判定其主要雜質(zhì)為1，1－二苯基－4－哌啶－1－丁烯鹽酸鹽(簡(jiǎn)稱烯化合物)。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，擬對(duì)該雜質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定。由于目前沒有雜質(zhì)對(duì)照品，筆者參考文獻(xiàn)[3]制備出烯化合物精制品，并通過紅外、紫外、高效液相色譜、質(zhì)譜等確證其結(jié)構(gòu)，結(jié)果與文獻(xiàn)[3，5]基本一致;并對(duì)制備出的烯化合物精制品進(jìn)行標(biāo)定，以此作為烯化合物對(duì)照品，可用于鹽酸地芬尼多原料及其制劑有關(guān)物質(zhì)檢查中雜質(zhì)烯化合物的定量測(cè)定[6]。

1 儀器與試藥

ABI3200型LC－MS(美國(guó)AB公司);LC－20AD型高效液相色譜儀(日本島津公司)。鹽酸地芬尼多原料(湖南湘江千金藥業(yè)有限公司，批號(hào)為080206);甲醇、三乙胺為色譜純(進(jìn)口)，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備

取鹽酸地芬尼多原料2 g，加乙醇20 mL使溶解，再加2 mol/L的鹽酸溶液10 mL，置60℃水浴中加熱15 min，取出，蒸干，得酸化產(chǎn)物;加二氯乙烷40 mL，溫?zé)崾谷芙?，邊搖邊滴入石油醚(沸程90～120℃)至微顯混濁，待溶劑自然揮散，析出結(jié)晶;再重結(jié)晶，得無色片狀結(jié)晶，即烯化合物。干燥后測(cè)其熔點(diǎn)為173.2～173.9 ℃。

2.2 結(jié)構(gòu)確證

2.2.1 檢測(cè)條件

液相色譜部分:色譜柱為VP－ODS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為甲醇 －0.5%三乙胺溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié) pH至 4.0)－ 甲醇(44 ∶56);流速為 1.0 mL/min;柱溫 30 ℃ ;進(jìn)樣量 5 μL。

質(zhì)譜部分:電噴霧離子化正離子檢測(cè)方式(ESI+);質(zhì)核比范圍 200～400;離子源電壓 5 000 V;霧化氣流速 10 L/min(高純氮?dú)?，加熱輔助氣流速10 L/min(高純氮?dú)?，氣簾氣流速10 L/min(壓縮空氣);離子源溫度400℃。錐孔電壓10 V，去簇電壓65 V，碰撞能量25 eV，檢測(cè)方式為全掃描一級(jí)質(zhì)譜、選擇離子二級(jí)全掃描質(zhì)譜檢測(cè)方式。

2.2.2 溶液配制

精密稱取烯化合物精制品適量，加甲醇溶解并稀釋成每1mL中含烯化物0.5 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品25 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 烯化合物精制品色譜、光譜及質(zhì)譜行為

采用正離子檢測(cè)方式對(duì)雜質(zhì)烯化物精制品溶液進(jìn)行高效液相色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)和二級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)分析，保留時(shí)間為14.27 min，準(zhǔn)分子離子[M+H]+峰 m/z為 292;對(duì) m/z為292進(jìn)行二級(jí)全掃描質(zhì)譜分析，產(chǎn)生的主要碎片離子有 m/z 129，91，推測(cè)其質(zhì)譜裂解途徑如圖1至圖5所示。

2.2.4 供試品定性檢測(cè)

在相同的色譜及質(zhì)譜條件下，對(duì)供試品溶液進(jìn)行HPLC、MS和MS/MS分析，檢測(cè)到在保留時(shí)間為14.27 min，準(zhǔn)分子離子[M+H]+峰 m/z為292;對(duì) m/z為292進(jìn)行二級(jí)全掃描質(zhì)譜分析，產(chǎn)生與烯化合物精制品相同的碎片離子，且紫外光譜、保留時(shí)間均與烯化合物精制品相同，紫外圖譜及液相色譜圖見圖6和圖7。結(jié)合紫外光譜、液相色譜保留時(shí)間及準(zhǔn)分子離子和二級(jí)質(zhì)譜裂解碎片等幾方面的信息，可以證明供試品溶液產(chǎn)生的主要雜質(zhì)(即保留時(shí)間為14.27 min的色譜峰)與通過將鹽酸地芬尼多酸化得到的烯化物精制品一致。

2.2.5 紅外光譜定性

取烯化合物結(jié)晶在紅外分光光度計(jì)上檢測(cè)、分析，紅外光譜圖見圖 8?？梢?，3 030，3 053，3 077 cm－1(υC=C－H)，2 397 ～2 601 cm－1(υ+NH)，1 638 cm－1(υC=C)，1 600 ～1 440 cm－1(υ苯環(huán)骨架)，762，697 cm－1(δ苯環(huán)相鄰5H);與文獻(xiàn)[3]基本一致。結(jié)合紫外光譜、紅外光譜、液相色譜保留時(shí)間及準(zhǔn)分子離子和二級(jí)質(zhì)譜裂解碎片等幾方面的信息，可以進(jìn)一步證明將鹽酸地芬尼多酸化得到的結(jié)晶即為烯化合物，供試液中產(chǎn)生的主要雜質(zhì)即為烯化合物。

2.3 標(biāo)定

色譜條件同鹽酸地芬尼多有關(guān)物質(zhì)檢查[4]，采用VP－ODS C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，以 0.5%三乙胺溶液(用磷酸調(diào)PH 至 4.0)－甲醇(44∶56)為流動(dòng)相，流速為 0.8 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫30℃。取烯化合物精制品25 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計(jì)算烯化合物的含量。結(jié)果樣品含量為99.96%，表明該烯化合物精制品純度很高，可以作為對(duì)照品使用。

3 討論

在反相HPLC法測(cè)定鹽酸地芬尼多原料的有關(guān)物質(zhì)研究中發(fā)現(xiàn)，在將原料進(jìn)行酸破壞時(shí)，酸化過頭，液相色譜圖中鹽酸地芬尼多主峰幾乎全部轉(zhuǎn)化為其主要雜質(zhì)。由此結(jié)合文獻(xiàn)，采用鹽酸地芬尼多原料經(jīng)酸化處理，再提取得到結(jié)晶，經(jīng)結(jié)構(gòu)確證，此結(jié)晶即為烯化合物，與鹽酸地芬尼多產(chǎn)生的主要雜質(zhì)保留時(shí)間一致，故確定鹽酸地芬尼多產(chǎn)生的主要雜質(zhì)為烯化合物。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:490.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典1990年版二部藥典注釋[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，1990:513－515.

[3]汪文濤.眩暈停中的雜質(zhì)及其檢定[J].藥物分析雜志，1984，4(1):8－12.

[4]曹鳳習(xí)，姜建國(guó)，劉紅莉.RP－HPLC測(cè)定鹽酸地芬尼多原料的有關(guān)物質(zhì)[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2009，26(8):661 －664.

[5]張茜茹，曹鳳習(xí)，姜建國(guó).高效液相色譜－電噴霧電離－質(zhì)譜法分析鹽酸地芬尼多的相關(guān)物質(zhì)[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19(10):41－42.

[6]曹鳳習(xí)，劉紅莉.高效液相色譜法測(cè)定鹽酸地芬尼多原料中雜質(zhì)烯化合物的含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2011，20(5):19－20.