賈淑梅，關(guān)翠林

（山西大同大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，山西 大同 037009）

HPLC法測(cè)定吡拉西坦的含量

賈淑梅，關(guān)翠林

（山西大同大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，山西 大同 037009）

采用kromasil C18柱，流動(dòng)相為甲醇-水（體積比為10∶90），檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，流速為0.8mL/min，柱溫為40℃，建立了高效液相色譜法測(cè)定吡拉西坦氯化鈉注射液中吡拉西坦含量的方法。結(jié)果表明：吡拉西坦在25～250μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r為0.999 2，RSD為1.04％（n=6），吡拉西坦的平均回收率為100.2％。利用此法測(cè)定吡拉西坦氯化鈉注射液中吡拉西坦的含量，具有方法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確可靠的優(yōu)點(diǎn)。

高效液相色譜法；吡拉西坦；藥物含量

吡拉西坦氯化鈉注射液主要成份為吡拉西坦，能增強(qiáng)神經(jīng)興奮的傳導(dǎo)，對(duì)因缺氧所致的逆行性健忘有改進(jìn)作用。適用于急、慢性腦血管、各種中毒性腦病等多種原因所致的記憶減退及輕、中度腦功能障礙?？梢栽鰪?qiáng)記憶，提高學(xué)習(xí)能力[1-3]。

目前對(duì)吡拉西坦測(cè)定的方法有紫外分光光度法[4-5]、氣相色譜法[6]、熒光光譜法、高效液相色譜法[7-9]等。紫外分光光度法簡(jiǎn)便可靠，但靈敏度較低，檢測(cè)速度也較慢，不能很好地滿(mǎn)足當(dāng)今快速微量測(cè)定的現(xiàn)實(shí)要求；氣相色譜法分離效果好，靈敏度高，分析速度快，操作方便，但是受技術(shù)條件的限制，沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜分析，使它的發(fā)展受到了束縛；熒光法靈敏度高、檢出限低、但能產(chǎn)生強(qiáng)熒光的化合物相對(duì)較少。本文采用kromasil C18柱為色譜柱，以甲醇-水（10∶90）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm的條件下，建立了反相高效液相色譜法測(cè)定吡拉西坦氯化鈉注射液中吡拉西坦含量的方法。該方法不僅干擾因素少，而且簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可作為吡拉西坦氯化鈉注射液制劑質(zhì)量鑒定的指標(biāo)之一。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

日本島津（SHINADZU）LC-10A高效液相色譜儀；SPD-M10A二極管陣列檢測(cè)器，CLASS-VP色譜工作站；HANGPING FA2004電子天平（上海天平儀器廠）；25μL微量進(jìn)樣器（日本島津公司）

甲醇（色譜純）；吡拉西坦對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；吡拉西坦氯化鈉注射液（東北制藥總產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)：200905002）；配制用水均為Milli-Q純水器處理的二次蒸餾水。

1.2 色譜條件

色譜柱：kromasilC18柱（5μm，150nm×4.6nm），流動(dòng)相為甲醇-水（10∶90），流速為0.8mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，進(jìn)樣量20μL，柱溫40℃。

1.3 溶液配制

1.3.1 對(duì)照品溶液的配制

稱(chēng)取吡拉西坦對(duì)照品0.250 0 g于500mL的容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度線(xiàn)，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為500μg/mL的吡拉西坦對(duì)照品溶液，測(cè)定時(shí)取上述對(duì)照品溶液配制成適宜質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.2 樣品溶液的稀釋

量取0.50mL吡拉西坦氯化鈉注射液于100mL的容量瓶中用流動(dòng)相稀釋至刻度線(xiàn)，搖勻待用。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

取20μL進(jìn)樣液注入高效液相色譜儀中進(jìn)行分析，記錄色譜圖，對(duì)其積分獲得峰面積，繪制吡拉西坦的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，采用外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜圖對(duì)照

量取吡拉西坦對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為160μg/mL的吡拉西坦對(duì)照品溶液。取1.3.2項(xiàng)下的樣品溶液。在1.2項(xiàng)的色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定，得對(duì)照品及樣品的色譜圖，對(duì)比可知，氯化鈉對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.2 流動(dòng)相的選擇

依據(jù)吡拉西坦既易溶于水又易溶于甲醇的性質(zhì)，以甲醇和水作為流動(dòng)相。在流速為0.8mL/min時(shí)，分別以甲醇與水的體積比為10∶90，20∶80為流動(dòng)相測(cè)定。結(jié)果顯示當(dāng)甲醇與水的體積比為10∶90時(shí)，吡拉西坦的保留時(shí)間約為3.5min，且峰形尖銳（圖2）；當(dāng)甲醇與水體積比為20∶80時(shí)的保留時(shí)間大約為2min，而溶劑峰在1.5min左右，為防止溶劑對(duì)吡啦西坦造成干擾，所以選擇甲醇與水的體積比為10∶90。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

觀察在線(xiàn)光譜圖，吡啦西坦在195 nm左右有最大吸收。但是在此波長(zhǎng)下，氯化鈉也有吸收，對(duì)分析結(jié)果準(zhǔn)確度有影響，所以該實(shí)驗(yàn)選擇210 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)和檢出限

分別量取2.3.1項(xiàng)下的吡拉西坦對(duì)照品溶液0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL于6支10 mL的比色管中，用流動(dòng)相稀釋至10mL刻度，搖勻，即配制成質(zhì)量濃度分別為25，50，100，150，200，250μg/mL的吡拉西坦對(duì)照品溶液。分別在2.2項(xiàng)的色譜條件下測(cè)定，以峰面積A對(duì)吡拉西坦的質(zhì)量質(zhì)量濃度ρ進(jìn)行線(xiàn)性回歸，線(xiàn)性回歸方程為A=2238 6ρ＋34 907，相關(guān)系數(shù)r=0.999 2，吡拉西坦在質(zhì)量濃度25～250μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

用流動(dòng)相配制不同質(zhì)量濃度的吡拉西坦對(duì)照品溶液，在2.2項(xiàng)的方法下測(cè)定，記錄色譜圖。以3倍信噪比得該方法的檢出限為1.4μg/mL。

2.5 穩(wěn)定性和精密度試驗(yàn)

量取吡拉西坦氯化鈉注射液0.50mL于100mL得容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度線(xiàn)，搖勻，分別放置0，2，4，6，8，10 h，再于2.2項(xiàng)的色譜條件下測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.11％，表明樣品溶液的穩(wěn)定性較好。

取2.3.2項(xiàng)下的樣品溶液，在2.2項(xiàng)的色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定結(jié)果平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.04％，表明本方法的精密度良好。

2.6 加標(biāo)回收和樣品測(cè)定

量取2.3.2項(xiàng)下的樣品溶液4.00 mL分別于4支10 mL比色管中，然后標(biāo)號(hào)為1～4號(hào)，分別往2，3，4號(hào)中加入1.50，2.50，3.50 mL 2.3.1項(xiàng)下的樣品溶液，用流動(dòng)相稀釋至10 mL刻度，在2.2項(xiàng)的色譜條件下測(cè)定。計(jì)算回收率，結(jié)果列于表1。

取2.3.2項(xiàng)下的樣品溶液，在2.2項(xiàng)的色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣3次，以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法定量，測(cè)得結(jié)果列于表2。

表1 吡拉西坦加標(biāo)回收率試驗(yàn)

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)束語(yǔ)

高效液相色譜法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥與化工方面，它具有靈敏度高、選擇性好、分析時(shí)間短、重現(xiàn)性好、樣品用量少和易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，適合于比拉西坦含量測(cè)定和質(zhì)量控制。

[1]陸潤(rùn)基，郭平章.HPLC法測(cè)定健腦合劑中吡拉西坦的含量[J].廣東藥學(xué)，1999（03）：89-90.

[2]汝秋明，姜茁松，李春實(shí).高效液相色譜法測(cè)定吡拉西坦注射液的含量[J].中國(guó)藥師，2002（03）：58-59.

[3]于文潔，嚴(yán)云，莫宗琪.高效液相色譜法測(cè)定吡拉西坦氯化鈉注射液中的有關(guān)物質(zhì)[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2005（07）：115-116.

[4]溫堅(jiān)，夏敬民.紫外分光光度法測(cè)定吡拉西坦氯化鈉注射液中吡拉西坦的含量[J].中成藥，2001（08）：39-40.

[5]陳雅，吳寒寅.分光光度法測(cè)定吡拉西坦的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1997（03）：64-65.

[6]吳小韓，李崇英，何建明.氣相色譜法測(cè)定吡拉西坦注射液中吡拉西坦的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜質(zhì)，1998（09）：10-12.

[7]盛太奎.高效液相法測(cè)定吡拉西坦葡萄糖注射液的含量[J].安徽醫(yī)藥，2005（02）：121-122.

[8]蔡鵬，季紅英.高效液相色譜法測(cè)定吡拉西坦片中吡拉西坦的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2006，21（01）：100.

[9]FischerW，Kitt H R，Regenthal E，et al.determination of piracetam in piracetam and sodium chloride injection by RP-HPLC[J].J Neural Transmission，2004，111（9）：90.

〔責(zé)任編輯 楊德兵〕

Determ ining the Content of Piracetam in Piracetam and Sodium Chloride Injection by HPLC

JIA Shu-mei，GUAN Cui-lin
（College of Chemistry and Chemical Engineering，ShanxiDatong Univercity，Datong Shanxi，037009）

A method for determining the content of piracetam in piracetam and sodium chloride injection by high performance liquid chromatography was setup.Kromasil C18 column was used.Themobile phase wasmethanol-water

（10：90），and its flow rate was 0.8m l／min.The detection wavelength was 210nm.The temperature of column was 40℃.To establish a HPLCmethod for the determination of piracetam in piracetam and sodium chloride injection.The results show that the linear range of piracetam is 25～250μg／mL，the linear regression equation is A=22386 c＋34907（r=0.99920）.The RSD is 1.04％（n=6）and the average recovery is 100.2％.Themethod was found to be simple，rapid，sensitive and reproducible and is suitable to test the assay of piracetam in piracetam and sodium chloride injection.

HPLC；piracetam；determination

R927.2

A

2012-10-20

山西大同大學(xué)科學(xué)研究基金項(xiàng)目[2008K6]

賈淑梅（1964-），女，山西應(yīng)縣人，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，研究方向：無(wú)機(jī)化學(xué)。

1674-0874（2013）01-0050-05