臧 潔，李寶茹，吳 濤，劉明娟，楊建雄

陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，西安 710062

在力竭運動中，機(jī)體耗氧增加，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生大量自由基，從而會造成臟器損傷，對細(xì)胞膜的損傷尤為嚴(yán)重。過多的自由基可以攻擊細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，從而破壞細(xì)胞膜的完整性，使膜流動性降低，通透性增加，離子泵功能下降，細(xì)胞代謝紊亂，并導(dǎo)致運動能力下降，誘發(fā)運動性疲勞［1］。我們前期的研究表明，淫羊藿苷能夠抑制腎陽虛小鼠血清睪酮含量的下降［2］，體外抗氧化活性研究表明，淫羊藿苷能夠清除DPPH·、和OH·，抑制脂質(zhì)過氧化，提高總抗氧化能力和總還原力［3］，提示淫羊藿苷可能有抗疲勞作用?？v艷芳等［4］采用游泳訓(xùn)練模型研究了淫羊藿苷對大鼠的抗運動疲勞作用，但對運動恢復(fù)的作用未見研究報道。本文研究淫羊藿苷對小鼠力竭游泳時間及力竭恢復(fù)后血清生化指標(biāo)的影響，探討其抗疲勞和促恢復(fù)作用，為淫羊藿苷進(jìn)一步的開發(fā)和利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與材料

昆明系雄性小鼠，購于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心，體重(20±2)g。淫羊藿苷由陜西慧科植物開發(fā)有限公司提供，黃棕色粉末，純度93.4%，用0.5%的羧甲基纖維素鈉溶解?；瘜W(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 動物分組與處理

實驗動物適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后，隨機(jī)分為4組，每組8只，分別為對照組，ICA低劑量組，ICA中劑量組，ICA高劑量組。每天上午分別給低、中、高劑量組以30、90、270 mg/kg ICA，對照組小鼠用等體積的羧甲基纖維素鈉灌胃，連續(xù)灌胃12 d。末次給藥后禁食兩小時，然后將小鼠置于21±1℃的水中進(jìn)行一次性游泳至力竭，記錄游泳時間。力竭的判斷標(biāo)準(zhǔn):小鼠沉入水中超過10 s，且放在平面無法完成翻正反射［5］。將小鼠置于干燥鼠籠中，恢復(fù)24 h后摘眼球采血備用。

1.3 血清生化指標(biāo)的測定方法

將所采血液常規(guī)分離血清，4℃，3000 rpm離心5 min，取上清待測。ALT/AST的活性測定采用2，4-二硝基苯肼法，MDA含量的測定采用TBA(硫代巴比妥酸)比色法，BUN含量的測定采用Fearon反應(yīng)，SG含量的測定采用葡萄糖氧化酶法。試劑盒均購自南京建成生物工程技術(shù)公司。所有指標(biāo)測定均采用美國BioTek的Epoch超微量微孔板分光光度計完成。

1.4 LDH同工酶電泳及分析

采用不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離LDH同工酶，用底物顯色劑染色以顯示同工酶位置。顯色后采用FluorChem(5500)System凝膠圖像分析系統(tǒng)分析。

1.5 數(shù)據(jù)處理

各組之間數(shù)據(jù)比較采用方差分析，用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，以ˉX±SD表示結(jié)果。

2 結(jié)果和分析

2.1 ICA對小鼠力竭游泳時間的影響

由表1可知，ICA低、中劑量組游泳至力竭的時間顯著長于對照組(P＜0.05)，而ICA高劑量組則與對照組無明顯差異(P＞0.05)。

表1 各組小鼠力竭游泳時間的比較(n=8)Table 1 Swimming time of all groups(n=8)

2.2 ICA對力竭游泳恢復(fù)小鼠血清生化指標(biāo)的影響

由表2可以看出，ICA中劑量組ALT活性較對照組低(P＜0.01)，ICA低、高劑量則無顯著差異(P＞0.05);ICA低、中、高劑量組AST活性均較對照組低(P＜0.05);ICA低、中劑量組MDA含量顯著低于對照組(P＜0.05)，而ICA高劑量組則無顯著差異(P＞0.05);ICA低劑量組BUN含量顯著低于對照組(P＜0.05)，ICA中劑量組BUN含量與對照組有極顯著差異(P＜0.01);各給藥組SG含量與對照組相比無顯著性差異(P＞0.05)。

表2 各組小鼠血清生化指標(biāo)的比較Table 2 Serum biochemical indicators of all groups

2.3 ICA對力竭游泳恢復(fù)小鼠血清LDH同工酶的影響

由圖1和表3可見，ICA低、中劑量組LDH總活力較對照組低(P＜0.01)，ICA高劑量組則無顯著差異(P＞0.05);ICA低、中劑量組LDH4-5顯著低于對照組(P＜0.05);ICA中劑量組LDH1-2較對照組高(P ＜0.05)。

3 討論

3.1 ICA對小鼠力竭游泳時間的影響

圖1 ICA對力竭運動恢復(fù)小鼠血清LDH同工酶的影響Fig.1 The effect of ICA on the activity of LDH isozymes in serum after exhausted swimming and 24 h recovering

表3 各組小鼠血清LDH同工酶活力的比較Table 3 The activity of LDH isozymes in serum of all groups

游泳至力竭的時間是體能的綜合表現(xiàn)，其不僅反映機(jī)體抗疲勞的能力，也反映機(jī)體的抗應(yīng)激能力及對不良環(huán)境的適應(yīng)能力［6］。實驗結(jié)果表明，ICA可以延長小鼠游泳至力竭的時間，其中以低、中劑量組最為明顯，顯著長于對照組?？v艷芳等研究結(jié)果表明，淫羊藿苷顯著地延長了訓(xùn)練大鼠游泳至力竭的時間，這與本實驗結(jié)果相符，提示ICA可以延緩疲勞的發(fā)生。有研究表明，包括黃酮類在內(nèi)的多酚，在合適劑量時，有抗氧化作用，但劑量過高時，反而有促氧化作用［7］。藥物的抗疲勞作用，一般與其抗氧化作用相關(guān)。ICA高劑量組小鼠游泳至力竭的時間明顯低于低、中劑量組，與對照組無明顯差異，可能與高劑量ICA有一定的促氧化作用有關(guān)。

3.2 ICA對力竭游泳恢復(fù)小鼠血清生化指標(biāo)的影響

ALT主要存在于肝細(xì)胞內(nèi)，其次是腎臟、心臟和肌肉，血清中此酶活性較低。當(dāng)肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷或者壞死時，細(xì)胞內(nèi)的該酶即釋放出來進(jìn)入血液，血清中的ALT活力就會升高，因此，ALT是臨床上進(jìn)行肝功能測試的一個標(biāo)準(zhǔn)。此外，劇烈的力竭運動，可使骨骼肌細(xì)胞膜的通透性發(fā)生改變，血清ALT活力也升高。正常情況下，AST存在于組織細(xì)胞中，其中心肌細(xì)胞中含量最高，其次為肝臟，血清中含量極少，一般測定血清中AST活性來診斷心肌梗塞、肝病及一些肌肉疾病［8］。本實驗結(jié)果顯示，ICA中劑量組ALT和AST都極顯著低于對照組，說明一定劑量的ICA對力竭恢復(fù)小鼠的肝臟、心臟、骨骼肌均有一定的保護(hù)作用，能加快力竭運動后機(jī)體的恢復(fù)。

力竭運動可導(dǎo)致機(jī)體自由基和脂質(zhì)過氧化水平增加，各種氧自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，既可反映機(jī)體內(nèi)發(fā)生脂質(zhì)過氧化的程度，也可反映生物膜的受損程度［9］。本實驗結(jié)果顯示，ICA低、中劑量組MDA顯著低于對照組，說明ICA低、中劑量組可以消除自由基的攻擊，降低力竭恢復(fù)狀態(tài)下MDA生成，保護(hù)機(jī)體，對延緩運動性疲勞的發(fā)生有積極的作用。

BUN是體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸等物代謝的終產(chǎn)物，在運動時，BUN可以評定運動負(fù)荷量的大小，負(fù)荷量越大，BUN的增加就越明顯。本實驗低、中劑量給藥組小鼠游泳至力竭的時間比對照組和高劑量給藥組長，即運動負(fù)荷量相對較大，一般會使BUN的含量顯著增加。經(jīng)24 h恢復(fù)，低、中劑量給藥組的BUN反而比對照組和高劑量組低，提示低、中劑量ICA可以促進(jìn)BUN的清除，促進(jìn)疲勞小鼠的恢復(fù)。

正常情況下，SG的來源和去路維持一個動態(tài)平衡，使得SG濃度保持相對穩(wěn)定。而在長時間力竭運動中，若無外界糖源的補充，可能會造成低血糖，產(chǎn)生疲勞。但正常情況下，SG恢復(fù)較快。本研究的結(jié)果說明經(jīng)過24 h的恢復(fù)后，各組小鼠的血糖濃度基本恢復(fù)，水平已趨于一致。

3.3 ICA對力竭游泳恢復(fù)小鼠血清LDH同工酶的影響

越來越多的實驗證明，LDH同工酶活力與運動性疲勞有關(guān)［10］。LDH1、LDH2主要催化乳酸脫氫轉(zhuǎn)變成丙酮酸的反應(yīng)，而LDH4和LDH5主要催化丙酮酸還原為乳酸的反應(yīng)。在力竭運動中，機(jī)體供氧量不足，儲存的糖原分解為血糖后，主要是通過無氧酵解產(chǎn)生乳酸的反應(yīng)為機(jī)體提供能量。本研究結(jié)果顯示，小鼠力竭游泳恢復(fù)24 h后，ICA低、中劑量組LDH總活性和LDH4-5顯著低于對照組，提示一定劑量的ICA可以修復(fù)受損傷的組織，使釋放到血液中的LDH減少，另一種可能的機(jī)制是ICA可以減少乳酸的堆積，LDH的活性可能適應(yīng)性降低。而ICA中劑量組LDH1-2顯著高于對照組和其他給藥組，說明中劑量ICA可以加快乳酸的清除。由此可推知，中劑量ICA組通過減少乳酸的生成和加快乳酸的清除來緩解運動性疲勞，這與ICA中劑量組顯著延長小鼠游泳至力竭的時間相一致。

縱艷芳等采用游泳訓(xùn)練模型，對大鼠力竭后即刻進(jìn)行實驗取樣，測定血清中的生化指標(biāo)以及心肌組織的SOD、MDA和脂褐素的含量。結(jié)果表明，淫羊藿苷增加了運動大鼠的乳酸脫氫酶活性，加快血乳酸和尿素氮的清除，顯示出了積極的抗運動性疲勞作用，并顯著增強(qiáng)了運動大鼠心肌SOD活性，加快MDA的清除，減少了脂褐素在心肌組織中的積累，具有保護(hù)細(xì)胞的作用及增強(qiáng)機(jī)體適應(yīng)運動負(fù)荷的能力。大鼠力竭即刻采樣指標(biāo)和本實驗的恢復(fù)后小鼠血清指標(biāo)結(jié)果提示，ICA可以抗運動性疲勞和促進(jìn)運動后疲勞的恢復(fù)。

本研究結(jié)果表明，ICA通過多方面作用對機(jī)體進(jìn)行保護(hù)，緩解運動性疲勞。ICA低、中劑量組都能顯著延長小鼠游泳至力竭時間，但綜合血清中的生化指標(biāo)，ICA中劑量組對于推遲疲勞的發(fā)生以及促進(jìn)運動后疲勞的恢復(fù)有更好的作用。ICA對人體是否有抗疲勞作用，是否可提高人體的運動能力，值得進(jìn)一步研究。

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