梁 衛(wèi) 梁 濤張麗玲 龔 林唐永明 蔡 鷹沈素娥△ 蘇 靜

（1.中國人民解放軍第四五四醫(yī)院，江蘇 南京 210002；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210046）

解酒消脂湯對酒精性脂肪肝大鼠肝保護實驗研究*

梁 衛(wèi)1梁 濤2張麗玲1龔 林1唐永明1蔡 鷹1沈素娥1△蘇 靜1

（1.中國人民解放軍第四五四醫(yī)院，江蘇 南京 210002；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210046）

目的 研究解酒消脂湯對酒精性脂肪肝（AFL）的肝保護作用機制。方法 采用酒精聯(lián)合脂肪乳劑法制備AFL大鼠模型，將雄性SD大鼠隨機分正常組、模型組，復(fù)方益肝靈片組、解酒消脂湯低、中、高劑量組。對照組和模型組給予生理鹽水，其余各組連續(xù)灌胃給予相應(yīng)藥物6周，6周末進行肝臟組織病理學(xué)觀察，測定各組大鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)、血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）活性。結(jié)果 與模型組比較，解酒消脂湯中、高劑量組能明顯減輕肝臟脂肪變性和炎癥；顯著降低顯著降低肝指數(shù)、血清AST、ALT、GGT、TG、TC、LDL-C水平。體質(zhì)量明顯增加，血清HDL-C水平明顯升高。結(jié)論 解酒消脂湯具有減輕肝臟脂肪變性和炎癥、改善肝功能、降低血脂的作用，從而起保護肝臟的作用。

解酒消脂湯 酒精性脂肪肝 肝功能 血脂

大量飲酒對機體多個器官具有毒害作用，尤其對肝臟損害最普遍。隨著人們生活水平的提高 ，因飲酒導(dǎo)致的肝臟損害逐年增加。酒精性肝病主要包括酒精性脂肪肝（AFL）、酒精性肝炎、酒精性肝硬化 ，脂肪變是其早期表現(xiàn) ，故治療 AFL以阻止酒精對肝臟進一步損害極其重要。解酒消脂湯為治療AFL的臨床驗方，本研究觀察該方對AFL模型大鼠肝臟的保護作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物SD大鼠60只，雄性，體質(zhì)量 180～220 g，由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，合格證號：SCXK（滬）2007-0005。

1.2 試劑及儀器（1）試劑：解酒消脂湯由解放軍第四五四醫(yī)院自行研制，組成：葛根15 g，竹茹10 g，秦艽10 g，柴胡 6 g，白芍 10 g，陳皮 10 g，郁金 10 g，決明子15 g，垂盆草 20 g，澤瀉 10 g，法半夏 10 g，海藻 10 g，白術(shù) 10 g，茯苓 10 g，丹參 15 g，生山楂 30 g，五味子10 g。各藥物浸泡0.5 h，加水煎煮2次，第1次加水2500mL，煎煮2h，過濾得煎出液，藥渣再次加水1800mL，煎煮1.5 h，過濾得煎出液，合并2次煎出液，濃縮至規(guī)定濃度4 g/mL，分裝備用。臨用前以蒸餾水按所需濃度配制成水溶液，冰箱保存，用時37℃水浴溫育，搖勻，備用。復(fù)方益肝寧片（吉林省博維藥業(yè)有限公司，批號100407），56%北京二鍋頭 （北京順通三星酒業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號20100502），膽固醇（天津化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號：20100603），脫氧膽酸鈉（上海索萊寶生物科技有限公司提供）。丙二醇、吐溫80（AR級）、玉米油、白砂糖、全脂奶粉、動物用復(fù)合維生素均為市售產(chǎn)品。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所提供。（2）儀器：XHF-D型勻漿機（寧波新芝生物科技股份有限公司），TD6001型電子天平（天津市天馬儀器廠），LDZ 5－2型離心機（北京醫(yī)用離心機廠），SyneRgy HT型酶標(biāo)儀 （美國Bio-Tek）LX-20型生化分析儀（美國Beckman-coulter）。

1.3 動物模型參照文獻［1］改良，以酒精聯(lián)合脂肪乳劑灌胃，每日1次。脂肪乳劑組成：玉米油35 g，膽固醇 10 g，蔗糖 10 g，膽鹽 1 g，奶粉 10 g，復(fù)合維生素0.3 g，吐溫80 3.1 g，丙二醇3.6 g，加蒸餾水至 70 mL，造模前3 d以15%（V/V）酒精適應(yīng)性灌胃，自第4日起，每3日酒精濃度增加5%，至酒精濃度40%止。脂肪乳劑每日灌胃量10 mL/kg。

1.4 干預(yù)方法正常喂養(yǎng)1周后的大鼠隨機分為6組：正常組、模型組、解酒消脂湯低劑量組（予解酒消脂湯16.5 g/kg）、解酒消脂湯中劑量組（予解酒消脂湯33 g/kg）、解酒消脂湯高劑量組（予解酒消脂湯66 g/kg）、復(fù)方益肝靈片（予復(fù)方益肝靈片0.042 g/kg），每組10只。模型組不使用藥物，正常飲食水，用藥組在造模同時，按相應(yīng)藥物劑量灌胃給藥。于第6周末，所有大鼠禁食12 h后，稱重，麻醉，頸動脈采血，常規(guī)制備血清待測，處死取肝組織。

1.5 指標(biāo)檢測（1）肝臟組織病理學(xué)觀察：大鼠處死后，取肝臟組織，4%多聚甲醛固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察。（2）肝指數(shù)：稱量肝質(zhì)量，計算肝指數(shù)＝肝濕質(zhì)量/體質(zhì)量×100%。（3）血清中肝功能、血脂指標(biāo)檢測：采集大鼠動脈血，靜置30 min后，3000 r/min離心10 min取血清，按照試劑盒說明書要求進行操作，測定血清ALT、AST、GGT、TC、TG、HDL-C、LDL-C 含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較用兩樣本均數(shù)的t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠肝組織病理學(xué)比較見圖1。正常組：肝小葉清晰，內(nèi)無脂肪變性、炎癥壞死，肝細胞索排列整齊。模型組：肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細胞腫脹，胞漿疏松，肝細胞內(nèi)大量脂滴生成，匯管區(qū)伴有炎細胞浸潤以及部分點狀肝細胞壞死，解酒消脂湯中劑量組、高劑量組和復(fù)方益肝靈片組能夠明顯減輕肝臟脂肪變性和炎癥。

圖1 酒精性脂肪肝大鼠肝臟組織光鏡觀察（HE，×200）

2.2 各組大鼠肝指數(shù)和體質(zhì)量比較見表1。正常組動物精神充沛、飲食正常、皮毛整潔有光澤。模型組大鼠嗜睡、食欲減退，少數(shù)腹瀉、皮毛凌亂欠光澤。與正常組比較，模型組大鼠體質(zhì)量明顯減輕（P＜0.01），肝指數(shù)顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，解酒消脂湯中、高劑量組和復(fù)方益肝靈片組大鼠體質(zhì)量顯著增加（P＜0.05或 0.01），肝指數(shù)顯著下降（P＜0.05或 0.01）。

表1 各組大鼠肝指數(shù)和體質(zhì)量比較（±s）

表1 各組大鼠肝指數(shù)和體質(zhì)量比較（±s）

與正常組比較，*P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。 下同。

組 別 n 體質(zhì)量（g） 肝指數(shù)（%）正常組 10 334.50±22.78 2.98±0.37模型組 10 288.27±23.38* 3.67±0.27*復(fù)方益肝靈片組 10 320.46±20.91△△ 3.12±0.36△△解酒消脂湯低劑量組 10 308.69±21.95 3.46±0.36解酒消脂湯中劑量組 10 318.67±27.34△ 3.24±0.46△解酒消脂湯高劑量組 10 326.46±17.85△△ 3.19±0.38△△

2.3 各組大鼠肝功能比較見表2。模型組大鼠血清ALT、AST、GGT含量明顯高于正常組。解酒消脂湯中、高劑量組及復(fù)方益肝靈片組大鼠血清ALT、AST、GGT含量均顯著低于模型組（P＜0.05或0.01），并呈現(xiàn)劑量依賴性。解酒消脂湯高劑量組較復(fù)方益肝靈片組ALT、AST、GGT 含量顯著下降（P＜0.05）。

表2 各組大鼠肝功能比較（U/L，±s）

表2 各組大鼠肝功能比較（U/L，±s）

與復(fù)方益肝靈片組比較，□P＜0.05。

組 別 n GGT正常組 10 1.60±0.49模型組 10 3.70±1.27*復(fù)方益肝靈片組 10 2.20±0.60△△解酒消脂湯低劑量組 10 3.50±0.81解酒消脂湯中劑量組 10 2.60±0.13△解酒消脂湯高劑量組 10 2.30±0.46△△ALT AST 48.80±4.33 146.80±14.67 68.20±7.43* 211.00±10.89*57.90±5.75△△ 187.80±6.73△△62.70±5.59 204.30±9.54 60.80±6.51△ 195.10±17.36△52.70±4.36△△□ 181.60±5.71△△□

2.4 各組大鼠血清血脂比較見表3。模型組大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均明顯高于正常組，HDL-C明顯低于正常組（P＜0.01）。解酒消脂湯中、高劑量組及復(fù)方益肝靈片組血清TC、TG、LDL-C含量均顯著低于模型組 （P＜0.05或0.01），HDL-C含量顯著高于模型組（P＜0.05或 0.01）。

表3 各組大鼠血清血脂比較（mmol/L，±s）

表3 各組大鼠血清血脂比較（mmol/L，±s）

組別 n LDL-C正常組 10 0.13±0.01模型組 10 0.18±0.04*復(fù)方益肝靈片組 10 0.14±0.01△△解酒消脂湯低劑量組 10 0.17±0.01解酒消脂湯中劑量組 10 0.15±0.02△解酒消脂湯高劑量組 10 0.14±0.01△△TC 1.35±0.24 1.82±0.21*1.51±0.14△△1.71±0.14 1.64±0.13△1.56±0.23△TG HDL-C 0.77±0.17 0.61±0.05 1.33±0.22* 0.48±0.05*1.03±0.16△△ 0.57±0.06△△1.25±0.08 0.52±0.05 1.11±0.16△ 0.54±0.06△1.06±0.13△△ 0.55±0.04△△

3 討 論

長期大量飲酒是AFL發(fā)病的基礎(chǔ)，酒精及其代謝產(chǎn)物直接或通過免疫機制損害肝細胞，形成肝細胞脂肪變性及脂肪貯積，發(fā)生本病。AFL歸屬于中醫(yī)學(xué)“酒積”、“酒癖”、“酒鼓”、“酒疸”、“傷酒”、“脅痛”等范疇。本病本虛標(biāo)實，濕熱痰瘀毒為標(biāo)實，氣血陰陽虧損為本虛。根據(jù)上述病因病機，初中期治療以祛邪為主，治當(dāng)清解酒毒、疏肝健脾、行氣化濕、祛痰降濁、活血化瘀，同時顧護脾胃之氣、肝腎之陰。

根據(jù)上述治則治法，筆者擬定解酒消脂湯治療AFL，經(jīng)前期臨床研究發(fā)現(xiàn)該方對AFL有良好的治療作用［2］。方中葛根、竹茹、秦艽善解酒毒、醒脾和胃止嘔；柴胡、白芍、陳皮、郁金疏肝解郁；決明子、垂盆草、澤瀉清利肝膽濕熱毒邪；半夏、海藻化痰降濁；白術(shù)、茯苓健脾燥濕；丹參、生山楂活血化瘀；五味子滋補肝腎。全方共奏清解酒毒、化濕理氣、祛痰化瘀之功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，垂盆草的水提取物、正丁醇高劑量組能極顯著地降低ALT和AST，并有保肝降酶的作用［3］。柴胡皂苷是柴胡產(chǎn)生保肝作用和肝毒性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，其對肝臟的藥理作用主要表現(xiàn)在抗肝損傷和抗肝纖維化作用［4］。 丹參可促進肝臟對 HA、PCll、LN 的攝取與分解使其含量下降，從而改善肝纖維化［5］。

ALT和AST是反映肝細胞損害的常用酶學(xué)檢查指標(biāo)，是肝細胞損害的敏感標(biāo)志。血清中的GGT主要來源于肝膽系統(tǒng)，肝臟受損或肝膽疾病均可引起GGT升高，大量持續(xù)飲酒可引起GGT升高［6］。此外，大量乙醇一次性進人機體后，在乙醇脫氫酶的催化下大量脫氫氧化為乙醛和乙酸鹽，使三羧酸循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱而影響脂肪代謝［7］。 血清 TC、TG、LDL-C 升高，在AFL的形成和發(fā)展過程中起重要作用。本實驗研究結(jié)果顯示：解酒消脂湯能明顯減輕肝臟脂肪變性和炎癥；能顯著降低肝指數(shù)、升高體質(zhì)量；明顯降低AFL大鼠血清ALT、AST、GGT含量，表明該方對肝細胞具有保護作用；能顯著降低血清TG、TC、LDL-C的含量，明顯升高HDL-C含量，具有改善脂質(zhì)及脂蛋白代謝紊亂、防止肝細胞脂肪變性的作用，達到防治AFL的目的。

通過動物實驗為解酒消脂湯的臨床運用提供了實驗依據(jù)，表明該方能保護肝細胞、改善脂質(zhì)代謝，對恢復(fù)肝損傷起到積極的作用，初步探討解酒消脂湯治療AFL的肝保護作用機制，為該方的開發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

［1］王媛媛，李俊，曹琦，等.豹皮樟總黃酮對大鼠酒精性脂肪性肝炎的防治作用及部分機制［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，42（2）：179.

［2］梁衛(wèi)，徐華強，張麗玲，等.解酒消脂湯治療酒精性脂肪肝臨床研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2007，18（11）：2817-2818.

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［4］黃幼異，黃偉，孫蓉.柴胡皂苷對肝臟的藥理毒理作用研究進展［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17（17）：298.

［5］安峰，李生棣，劉憲玲.丹參對肝纖維化指標(biāo)的影響［J］.西北藥學(xué)雜志，2001，16（8）：25.

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Effect of Hepatic-protective in Jiejiuxiaozhi Decoction on Rats of Alcoholic Fatty Liver

LIANG Wei1，LIANG Tao2，ZHANG Li-ling1，et al. 1 No.454 Hospital of PLA，Jiangsu，Nanjing 210002，China；2 Nanjing University of Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210046，China

Objective:To investigate the prevention and treatment effects of Jiejiuxiaozhi Decoction on rats with alcoholic fatty liver （AFL）.Methods:Male SD rats were randomly divided into the normal group，the model group，the Compound Yiganling Tablet group，the Jiejiuxiaozhi Decoction low dose group，the Jiejiuxiaozhi Decoction middle dose group and the Jiejiuxiaozhi Decoction high dose group.The normal group and the model group were administered saline.The other groups were given corresponding medicine by gavage for 6 weeks.After having given medicine for 6 weeks，the following indexes were observed and detected such as the weight，the liver index，the levels of aspartate aminotransferase （AST），alanine aminotransferase （ALT），glutamyltranspeptidase（GGT），triglyceride （TG），total cholesterol （TC），low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C），high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C） in serum.Results:Compared with the model group，，fatty degeneration and inflammation were significantly reduced in the Jiejiuxiaozhi Decoction middle dose group and high dose group.The following indices were significantly decreased such as liver index，the contents of AST，ALT，GGT，TG ，TC，LDLC in serum.However，the following indicators were significantly increased including body weights，the contents of HDL-C in serum.All the experimental data had statistical significances.Conclusion:Jiejiuxiaozhi Decoction can significantly reduce fatty degeneration and inflammation，improve liver function and decrease blood lipid capacity.

Jiejiuxiaozhi Decoction；Alcoholic fatty liver；Liver function；Blood lipid

R285.5

A

1004-745X（2013）06-0891-03

南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新課題（08MA060）

△通信作者

2013-03-05）