羅 英
(浙江迪安診斷技術(shù)股份有限公司,杭州 310000)
自沃森-克里克的DNA雙螺旋模型誕生以后,生物學(xué)進(jìn)入到了一個(gè)全新的時(shí)代,在生物學(xué)界,無(wú)論是進(jìn)行病原微生物的檢測(cè)、物種鑒定,還是進(jìn)行物種起源、多樣性評(píng)估及其親緣關(guān)系、系統(tǒng)進(jìn)化等的研究,首先都需要對(duì)核酸進(jìn)行分離純化,因此對(duì)DNA的提取成為生物醫(yī)藥領(lǐng)域甚至農(nóng)林牧漁等領(lǐng)域內(nèi)所有學(xué)科進(jìn)行科學(xué)研究的基礎(chǔ)。而能否提取出高質(zhì)量的核酸則是核酸分子生物學(xué)試驗(yàn)中的關(guān)鍵,提取方法的靈敏度、特異性也將直接關(guān)系到后續(xù)試驗(yàn)的成敗[1]。因此核酸提取是分子生物學(xué)的基本方法,也是核酸分析中最關(guān)鍵的方法??茖W(xué)家們因此開(kāi)出發(fā)了一系列的核酸提取方法,包括經(jīng)典的酚氯仿抽提法,新發(fā)展的硅膠膜吸附法、磁珠分離法等。而隨著基因診斷在臨床疾病的診斷和監(jiān)測(cè)中發(fā)揮著日益重要的作用,基因診斷對(duì)核酸檢測(cè)賴以完成的前提技術(shù)——核酸提取技術(shù)提出了新的要求,高效、便捷、環(huán)保、大通量、自動(dòng)化成為核酸提取技術(shù)發(fā)展的主流方向。在這種背景下,核酸自動(dòng)提取儀應(yīng)運(yùn)而生,很多公司紛紛推出自己的全核酸自動(dòng)提取儀器,各種原理的都有,本文將對(duì)核酸自動(dòng)提取儀原理及分類作一概述,重點(diǎn)介紹磁珠法核酸自動(dòng)提取儀的原理、分類、優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用現(xiàn)狀。
核酸自動(dòng)提取儀,又叫核酸自動(dòng)純化儀,是一種應(yīng)用配套的核酸提取試劑來(lái)自動(dòng)完成樣本核酸快速提取工作的儀器。根據(jù)其提取原理可分為離心柱法和磁珠法兩種。離心柱法全核酸自動(dòng)提取儀主要采用離心機(jī)和自動(dòng)移液裝置相結(jié)合的方法,通量一般在1~12個(gè)樣本,操作時(shí)間和手工提取差不多,并不能提高實(shí)際工作效率,且價(jià)格昂貴,不同型號(hào)儀器的耗材也不能通用,僅適合經(jīng)費(fèi)充足的大型實(shí)驗(yàn)室使用。而磁珠法核酸自動(dòng)提取儀則是以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低pH值下吸附核酸,在低鹽高pH值下與核酸分離的原理,再通過(guò)移動(dòng)磁珠或轉(zhuǎn)移液體來(lái)實(shí)現(xiàn)核酸的整個(gè)提取純化過(guò)程。由于其原理的獨(dú)特性,所以可設(shè)計(jì)成很多種通量,既可以單管提取,也可以提取8~96個(gè)樣本,且其操作簡(jiǎn)單快捷,提取96個(gè)樣本僅需30~45min,大大提高了實(shí)驗(yàn)效率,且成本低廉,因而可以在不同實(shí)驗(yàn)室使用。
根據(jù)儀器型號(hào)大小又可分為兩大類:一類是大型的自動(dòng)化儀器,一般稱為自動(dòng)液體工作站;另一類是小型的自動(dòng)化儀器,利用封裝好的配套試劑自動(dòng)完成核酸提取純化的過(guò)程。大型自動(dòng)液體工作站,功能非常強(qiáng)大,可以自動(dòng)完成液體分液、吸液等工作,甚至可以將擴(kuò)增、檢測(cè)等儀器設(shè)備整合在一起,一次性實(shí)現(xiàn)標(biāo)本提取、擴(kuò)增、檢測(cè)全自動(dòng)化操作。提取核酸只是其功能的一個(gè)應(yīng)用,因?yàn)槠湓O(shè)備成本高昂,運(yùn)行成本高,不太適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室使用,一般都應(yīng)用在一次提取大量(至少96個(gè),一般幾百個(gè))同一類標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)需求上,所以真正得到應(yīng)用的比較少。而小型的自動(dòng)化儀器是通過(guò)運(yùn)行結(jié)構(gòu)的特殊設(shè)計(jì)來(lái)達(dá)到自動(dòng)提取核酸的目的,其儀器設(shè)備和運(yùn)行成本低,操作方便,因而得到越來(lái)越多的應(yīng)用,近年來(lái)已有很多種不同機(jī)型陸續(xù)投放市場(chǎng)。
磁珠法核酸自動(dòng)提取儀一般可分為磁棒法和抽吸法兩種。抽吸法,也叫移液法,就是通過(guò)液體的轉(zhuǎn)移來(lái)實(shí)現(xiàn)核酸的提取純化,一般通過(guò)操作系統(tǒng)控制機(jī)械臂來(lái)完成移液。其過(guò)程與原理包括:1)裂解:在樣品中加入裂解液,通過(guò)反復(fù)吹打混勻及加熱,破碎細(xì)胞釋放核酸;2)吸附:在樣品裂解液中加入磁珠,充分吹打混勻,利用磁珠在高鹽低pH值下對(duì)核酸具有很強(qiáng)親和力的特點(diǎn),吸附核酸,在外加磁場(chǎng)作用下,磁珠與溶液分離,利用吸頭將液體移出棄至廢液槽,吸頭棄掉;3)洗滌:撤去外加磁場(chǎng),換用新吸頭加入洗滌緩沖液,反復(fù)吹打混勻,去除雜質(zhì),在外加磁場(chǎng)作用下,將液體移出;4)洗脫:撤去外加磁場(chǎng),換用新吸頭加入洗脫緩沖液,反復(fù)吹打混勻,結(jié)合的核酸即與磁珠分離,從而得到純化的核酸。
磁棒法,即通過(guò)磁珠的轉(zhuǎn)移來(lái)實(shí)現(xiàn)核酸的分離純化,一般通過(guò)儀器里磁棒的運(yùn)動(dòng),來(lái)實(shí)現(xiàn)磁珠從樣本裂解液/結(jié)合液到洗滌液,再到洗脫液的轉(zhuǎn)移,從而自動(dòng)完成核酸分離與純化的全過(guò)程。其過(guò)程與原理包括以下幾個(gè)步驟:1)裂解吸附:在含磁珠的裂解液中加入待處理樣品,充分混合,裂解細(xì)胞(適當(dāng)加熱有助于細(xì)胞的裂解),釋放的核酸在高鹽低pH值下特異性的吸附到磁珠上,而蛋白質(zhì)等分子則不被吸附而留在溶液中;2)洗滌:在磁棒的磁場(chǎng)作用下,磁珠與溶液分離,磁棒將磁珠轉(zhuǎn)移至洗滌緩沖液中,經(jīng)過(guò)反復(fù)洗滌,去除蛋白質(zhì)無(wú)機(jī)鹽等雜質(zhì);3)洗脫:洗滌結(jié)束后,磁棒又將磁珠轉(zhuǎn)移至洗脫緩沖液中,在低鹽高pH值下核酸從磁珠上被洗脫下來(lái),最后磁棒又將磁珠移出,即完成核酸的全部提取。
傳統(tǒng)的核酸提取技術(shù)包含沉淀、離心等操作,并需要大量的生物樣本,這些純化方法的步驟繁雜、費(fèi)時(shí)長(zhǎng)、收率低,且需接觸有毒試劑,因而很難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作;而采用磁珠為載體的分離技術(shù),無(wú)需離心,無(wú)需大量檢材,也無(wú)需接觸酚/氯仿等有毒試劑,且操作簡(jiǎn)單方便,很容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作,30min就能實(shí)現(xiàn)樣品的快速、高效制備,是未來(lái)核酸純化方法發(fā)展的一個(gè)重要方向。因而磁珠法核酸自動(dòng)提取儀,具有傳統(tǒng)DNA提取方法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì),主要體現(xiàn)在[2-3]:①能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、高通量操作。核酸抽提技術(shù)與磁珠自動(dòng)化完美結(jié)合,實(shí)現(xiàn)無(wú)交叉污染的高通量自動(dòng)化核酸抽提,目前已有96孔的核酸自動(dòng)提取儀,能夠一次性實(shí)現(xiàn)對(duì)96個(gè)樣品的快速處理,符合生物學(xué)高通量的操作要求,使得傳染性疾病爆發(fā)時(shí)能夠進(jìn)行快速及時(shí)的應(yīng)對(duì),這一特點(diǎn)使得傳統(tǒng)方法望塵莫及;②操作簡(jiǎn)單、快速。整個(gè)提取流程只有裂解-結(jié)合-洗滌-洗脫四個(gè)步驟,無(wú)需專業(yè)培訓(xùn)技術(shù)人員,即可從樣本中快速高效的提取靶核酸,且大多可以在30~45min內(nèi)完成;③安全環(huán)保。整個(gè)提取過(guò)程無(wú)需用到傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒的有機(jī)試劑,安全無(wú)毒,綠色環(huán)保,且采用封閉式空間,將對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的傷害降低到最少,完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念;④高純度,高得率。磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大,且提取的核酸可直接用于PCR等后續(xù)試驗(yàn);⑤無(wú)污染,且結(jié)果穩(wěn)定。采用智能化操作系統(tǒng),嚴(yán)格控制孔孔之間污染,并采用一次性塑料提取套管,避免不同批次間污染;同時(shí)保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性和可重復(fù)性,避免人工操作引起的差異及錯(cuò)誤;⑥成本低廉,便于廣泛應(yīng)用。由于磁珠合成采用的都是低價(jià)無(wú)機(jī)和有機(jī)原料,無(wú)須特殊的儀器設(shè)備,使得最終的合成和研發(fā)成本都很低,符合我國(guó)的基本國(guó)情和經(jīng)濟(jì)現(xiàn)狀;⑦可以同時(shí)處理不同類型的樣本,適應(yīng)了建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)所需的不同類型大量生物樣本的提取,為我國(guó)DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的建設(shè)鋪平了道路,打下了基礎(chǔ)。
隨著磁珠在基因檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用,越來(lái)越多的核酸自動(dòng)提取裝置被開(kāi)發(fā)出來(lái)。因此如何選擇一款合適的核酸自動(dòng)提取儀,就需要我們根據(jù)機(jī)器特點(diǎn)并結(jié)合實(shí)際需求進(jìn)行認(rèn)真選擇。
磁珠法核酸自動(dòng)提取儀根據(jù)移液特點(diǎn)主要分為磁棒法和抽吸法兩大類,而這兩種類型的儀器又各有利弊。抽吸法磁珠核酸自動(dòng)提取儀通過(guò)吸頭轉(zhuǎn)移液體實(shí)現(xiàn)核酸的分離純化,其優(yōu)點(diǎn)是:(1)無(wú)需提前分裝液體;(2)移液過(guò)程不會(huì)產(chǎn)生因液體掉落造成交叉污染;(3)可以適用于不同的磁珠法核酸提取試劑,即凡是手動(dòng)法可以操作的試劑基本上都可以在該類儀器上使用。但這類儀器,也有一個(gè)很大的缺點(diǎn):為了盡可能徹底地去除廢液,吸頭會(huì)伸到深孔板孔底,但為了避免去除廢液的時(shí)候吸走磁珠,吸頭又不能靠磁珠太近,因而每次抽廢液的時(shí)候總會(huì)有一小部分液體殘留,特別是磁鐵設(shè)計(jì)在底部的裝置,因?yàn)榇胖楸淮盆F吸附在深孔板底部,所以吸頭不能靠底部太近,這樣每次的洗滌液就不能去除完全,而殘留的洗滌液中的鹽和乙醇/異丙醇會(huì)直接影響后面的洗脫效率和PCR成功率;磁鐵設(shè)計(jì)在側(cè)面的裝置殘留的液體相對(duì)較少,但其洗脫的效率卻不好,因其僅靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中,所以會(huì)需要較長(zhǎng)時(shí)間,該類96核酸自動(dòng)提取儀,提取一輪的時(shí)間差不多是32通量磁棒法的5倍。另外該類儀器目前主要由國(guó)外的一些廠家研制,主要依靠機(jī)械臂進(jìn)行運(yùn)行,需要專業(yè)編程和專業(yè)維護(hù),且移液需要很多槍頭,因此機(jī)器設(shè)備成本比較昂貴,所需耗材成本也不低,因而僅推薦經(jīng)費(fèi)充足的實(shí)驗(yàn)室選用。
磁棒法核酸自動(dòng)提取儀相對(duì)應(yīng)用較多,通量通常有8、16、32、96通道,相對(duì)于抽吸法,磁棒法的最大優(yōu)點(diǎn)就是:每一步的液體不會(huì)殘留,因?yàn)榇虐糁粠ё叽胖?,然后轉(zhuǎn)移到下一個(gè)步驟相應(yīng)的反應(yīng)孔中,且其編程簡(jiǎn)單,易維護(hù);不足之處就是需要提前手工加試劑,且不能將手動(dòng)法磁珠提取試劑直接拿來(lái)使用,而需要根據(jù)機(jī)器特點(diǎn)優(yōu)化試劑操作。在選擇磁棒法提取儀時(shí),我們還需要根據(jù)實(shí)際試驗(yàn)需要盡可能選擇功能更齊全的,比如可以加熱、制冷的,且每個(gè)加熱槽最好獨(dú)立溫控,這樣就可以設(shè)置加熱、裂解、洗脫的不同溫度,有助于提高裂解和洗脫效率,而采用制冷裝置的則有助于RNA提取過(guò)程中避免RNA的降解。最重要的是,帶動(dòng)磁棒的電機(jī)要能帶動(dòng)磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌,這樣才能有利于自動(dòng)化和有助于裂解和漂洗的徹底。磁棒法的通量最好選擇32通道,96通道雖然通量更高,但96個(gè)磁棒上面的液體在從一個(gè)板轉(zhuǎn)移至另外一個(gè)板的過(guò)程中可能會(huì)滴落造成污染,而32通道的磁棒運(yùn)行軌跡不經(jīng)過(guò)其他樣本的上空,不會(huì)造成交叉污染。目前國(guó)內(nèi)基本都是該類型的提取儀,機(jī)器成本低,且效果也與國(guó)外產(chǎn)品相當(dāng),比較而言,國(guó)產(chǎn)磁珠法核酸自動(dòng)提取儀成本低廉,供貨周期短,且不依賴于進(jìn)口試劑。
磁珠法核酸自動(dòng)提取儀國(guó)內(nèi)外有很多種品牌,目前國(guó)際市場(chǎng)上的主流品牌有:Thermo的Kingfisher系列、InnuPure?C12/C16、ROCHE 的 MagNA Pure LC、Qiagen的 Biorobot 9604、ABIPrism?6100Nucleic Acid PrepStation、epMotion 5075TMX、QuickGene610等;國(guó)內(nèi)品牌主要有:西安天隆的NP968系列、廈門(mén)歐達(dá)的 MP-120系列、臺(tái)灣圓點(diǎn)奈米的Smart LabAssist-32、科華生物的 DP-3000、上海浩源(臺(tái)灣基亞)的 ChiTaSBSS1200、杭州博日的NPA-32等。
磁珠法核酸自動(dòng)提取儀基于其獨(dú)特的磁珠分離技術(shù),實(shí)現(xiàn)了核酸提取的高通量自動(dòng)化,是傳統(tǒng)手工提取方法的大革命。由于其操作簡(jiǎn)單、快速,重復(fù)性好,能從血液、動(dòng)物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA來(lái),可應(yīng)用在疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、畜牧業(yè)和分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。
磁珠法核酸自動(dòng)提取儀可用于解決H7N9禽流感、SARS(Severe Acute Respiratory Syndromes)、兒童手足口病、麻疹病毒等的快速自動(dòng)化疾病監(jiān)測(cè)系統(tǒng),提高重大疫情應(yīng)對(duì)響應(yīng)能力。
2013年春節(jié)后,我國(guó)突發(fā)了H7N9禽流感。面對(duì)重大疫情,由國(guó)家863計(jì)劃支持取得的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的核酸提取儀及配套提取試劑,成功應(yīng)用于H7N9禽流感篩查工作,實(shí)現(xiàn)了從呼吸道分泌物樣品中提取H7N9禽流感病毒核酸到檢測(cè)的自動(dòng)化過(guò)程,為H7N9禽流感篩查提供了快速集成解決方案,有力地支撐了我國(guó)應(yīng)對(duì)禽流感的防控工作。
目前,核酸提取儀及配套提取試劑已經(jīng)在浙江省H7N9定點(diǎn)篩查醫(yī)院浙江大學(xué)第一附屬醫(yī)院,北京市、陜西省、青海省、西安市和湖州市等各級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行了超過(guò)2400多例流感樣的H7N9病毒核酸提取及篩查。國(guó)產(chǎn)的核酸提取儀及試劑產(chǎn)品與國(guó)外同類產(chǎn)品相比具有快捷方便、價(jià)格便宜、供貨期短等優(yōu)點(diǎn),適合在大面積篩查中應(yīng)用。
以上數(shù)據(jù)來(lái)源于國(guó)家科技成果網(wǎng)2013年5月1日科技新聞:國(guó)產(chǎn)核酸提取檢測(cè)設(shè)備助力H7N9禽流感篩查。
輸血是臨床上治療和搶救病人常用的醫(yī)療措施,近年來(lái),隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步,安全輸血越來(lái)越受到人們的重視。而輸血相關(guān)傳染病的預(yù)防和控制已成為全社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn),隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步,輸血傳播相關(guān)病毒的危險(xiǎn)性大大降低,但由于我國(guó)是肝炎的高發(fā)區(qū),艾滋病亦處于快速發(fā)展趨勢(shì)[4],為避免病毒感染傳播,加強(qiáng)輸血安全檢查尤為必要,國(guó)內(nèi)外眾多采供血機(jī)構(gòu)因此在血液篩選中引入核酸檢測(cè)(Nucleic acid test,NAT)。應(yīng)用血液核酸檢測(cè)技術(shù),對(duì)HBV、HCV和HIV等病毒感染者進(jìn)行檢測(cè),可以有效地縮短病毒特異抗原和抗體免疫測(cè)定的“窗口期”,并檢出病毒變異株,從而降低輸血風(fēng)險(xiǎn),提高輸血安全。而核酸提取是NAT檢測(cè)的重要環(huán)節(jié),核酸提取效果直接影響到NAT檢測(cè)的靈敏度和特異性[5]。因此核酸提取采用的試劑和方法就顯得尤為重要。由于在大批量進(jìn)行血液篩查時(shí)手工混樣繁瑣、難標(biāo)識(shí),且核酸手工提取技術(shù)要求高、操作復(fù)雜、耗時(shí),結(jié)果重現(xiàn)性差及進(jìn)口試劑成本高等諸多因素[6],限制了該技術(shù)在我國(guó)血液常規(guī)篩查中的推廣應(yīng)用。為了進(jìn)一步提高血液的安全性,很多科研者紛紛嘗試將國(guó)產(chǎn)自動(dòng)化儀器及NAT試劑應(yīng)用到血液核酸篩查中[4],而磁珠法核酸自動(dòng)提取儀不僅可以高效的提取血液中的核酸,而且可以進(jìn)行高通量處理,從而大大縮短操作時(shí)間,提高工作效率,因而在血液篩查方面取得了廣泛應(yīng)用。
早在2003年前日本和羅氏公司應(yīng)用MPLC全自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)應(yīng)用于血液篩查的研究[7]。2004年葉賢林等[8]人也將磁珠法核酸自動(dòng)提取儀用于血液篩查中HBV DNA的提取,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法靈敏度高,能在1h內(nèi)迅速完成480例份核酸的提取,大大提高了工作效率。2005年葉賢林等[9]人將磁珠法核酸自動(dòng)提取儀應(yīng)用于16 512份血液標(biāo)本中HBV DNA的提取,并進(jìn)行基因分型分析,結(jié)果取得了良好的應(yīng)用效果。
磁珠提取純化系統(tǒng)可快速高通量的處理臨床樣品,提取的核酸可直接用于后續(xù)的分子診斷。采用磁珠法自動(dòng)核酸純化儀可以高效便捷地應(yīng)用于乙肝、丙肝、艾滋病、流行性病毒、感染性病毒等各種病毒、病原體核酸的快速提取。
2003年Julia H等[10]人比較了兩種核酸自動(dòng)提取儀與手工提取試劑盒在提取腸病毒RNA上的效果,結(jié)果表明四種方法都可以有效的應(yīng)用于腸病毒RNA的提取。2004年Deborah Wilson等[11]人比較了磁珠法核酸自動(dòng)提取儀與其他四種商業(yè)化核酸提取試劑從臨床樣本中提取嗜肺軍團(tuán)菌的效率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)用磁珠法核酸自動(dòng)提取儀從痰液中提取軍團(tuán)菌的濃度遠(yuǎn)高于其中三種商業(yè)化核酸提取試劑盒提取的核酸。2005年Kurt Beuselinck等[12]人運(yùn)使用自動(dòng)樣本準(zhǔn)備系統(tǒng)通過(guò)磁珠從血清或血漿中提取HCV、HBV、CMV和EBV的核酸,提取的核酸直接進(jìn)行定量PCR,結(jié)果與手工操作相比,大大縮短了操作時(shí)間,而且結(jié)果穩(wěn)定可靠。2007年K.Loens等[13]人比較了磁珠法核酸自動(dòng)提取儀與QIAGEN手工法從不同臨床樣本中提取核酸的效率,結(jié)果表明核酸自動(dòng)提取儀無(wú)論是從咽拭子還是從全血中提取核酸,均比手工法產(chǎn)量高。2011年易勇等[14]人比較了國(guó)產(chǎn)磁珠法核酸自動(dòng)提取系統(tǒng)與傳統(tǒng)的沉淀離心提取法提取血清HBV DNA的效果,結(jié)果表明國(guó)產(chǎn)磁珠法核酸自動(dòng)提取系統(tǒng)對(duì)血清HBV DNA的提取效果良好,操作簡(jiǎn)單,自動(dòng)化程度高,重復(fù)性好,適宜用于臨床HBV DNA檢測(cè)前處理的核酸提取。
對(duì)于法醫(yī)工作而言,核酸提取的效率和穩(wěn)定性都是十分重要的。磁珠提取純化系統(tǒng)與專門(mén)的法醫(yī)樣品核酸提取磁珠試劑配合使用,可從不同來(lái)源的材料中純化高質(zhì)量的DNA,包括煙蒂、毛根、干血、指甲、血痕等,最大處理量可達(dá)96個(gè)樣品/每次。
2009年楊電等[4]人應(yīng)用國(guó)產(chǎn)磁珠結(jié)合自動(dòng)化核酸提取儀批量提取血痕、口腔拭子、軟骨、口香糖等9 100份生物檢測(cè)的DNA,結(jié)果表明磁珠法自動(dòng)化核酸提取儀具有實(shí)驗(yàn)條件標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一、操作穩(wěn)定可靠、重復(fù)性好、效率高、速度快、減輕檢驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度等優(yōu)點(diǎn),可用于案件中常見(jiàn)的大部分生物樣本核酸的抽提。
2009年匡金枝等[15]人比較了應(yīng)用磁珠法核酸自動(dòng)提取儀與Chelex-100-工作站法、手工法提取1 552份各類涉案檢測(cè)DNA的效果,結(jié)果表明磁珠法核酸自動(dòng)提取儀提取DNA效果最佳,且較手工操作DNA檢測(cè)時(shí)間可縮減1.25倍。
隨著生物和醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,原有的手工純化核酸的方法,已經(jīng)很難滿足大規(guī)模、高通量的實(shí)驗(yàn)要求,因此出現(xiàn)了許多核酸分離純化的新技術(shù)及商品化試劑,其中采用磁珠分離是一種已被證實(shí)為高效、簡(jiǎn)便、易于自動(dòng)化的可行方法[16]。隨著磁珠分離技術(shù)在生物科學(xué)領(lǐng)域不斷普及和廣泛的應(yīng)用[17],一些生物制品公司將磁珠分離技術(shù)用于核酸自動(dòng)提取,大大提高了核酸提取的效率,降低了人工操作的誤差[18]。目前,國(guó)外已有數(shù)家公司的核酸自動(dòng)提取系統(tǒng)進(jìn)入市場(chǎng);國(guó)內(nèi)一些公司也開(kāi)始各展所長(zhǎng)分別研發(fā)核酸提取用磁珠及自動(dòng)化設(shè)備,并有相應(yīng)的產(chǎn)品上市。目前已有很多研究表明,國(guó)產(chǎn)磁珠法自動(dòng)核酸提取系統(tǒng)的應(yīng)用效果不遜于現(xiàn)在普遍采用的沉淀離心提取法,因此非常值得推廣使用。同國(guó)外進(jìn)口價(jià)格昂貴的同類儀器和磁珠試劑相比,儀器試劑的國(guó)產(chǎn)化能顯著降低使用成本,有利于節(jié)省社會(huì)財(cái)富和衛(wèi)生資源[14],因此國(guó)產(chǎn)磁珠法核酸自動(dòng)提取系統(tǒng)具有較好的應(yīng)用潛力。相信隨著核酸檢測(cè)技術(shù)在分子生物學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用,磁珠法核酸自動(dòng)提取儀在核酸提取中將發(fā)揮越來(lái)越重要的作用,而各種不同類型的核酸自動(dòng)提取儀,將為各分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的核酸提取完全實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化提供條件。
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