顏 松
(福清市質(zhì)量計量檢測所,福建 福清 350300)
目前,我國各級質(zhì)監(jiān)部門下屬的部分產(chǎn)品質(zhì)量檢驗機構(gòu)還依法承擔著各類加工食品的第三方法定質(zhì)量檢驗工作,肩負著各類加工食品的生產(chǎn)許可發(fā)證檢驗、定期監(jiān)督抽查檢驗和出廠委托檢驗等各項任務(wù)。食品安全是直接關(guān)系到人民群眾生命、健康和社會穩(wěn)定的重大公共安全問題,而微生物污染又是其中極為重要的因素[1]。當前最新版的各項食品安全國家標準都已陸續(xù)發(fā)布,其中食品微生物學檢驗對于評價食品安全衛(wèi)生狀況、保證食品質(zhì)量安全、預防食源性疾病的意義十分重大,其各項檢驗結(jié)果作為加工食品安全性和衛(wèi)生學重要指標為質(zhì)監(jiān)監(jiān)督執(zhí)法和食品安全評價提供了重要依據(jù)和技術(shù)支持,因此其檢驗結(jié)果的客觀真實性和準確性顯得尤為重要。無菌室是進行細菌、酵母、霉菌以及各類致病性微生物檢驗的關(guān)鍵場所,其是否達到無菌操作要求,內(nèi)部質(zhì)量控制體系是否完善直接關(guān)系到食品微生物學檢驗結(jié)果的準確性。今后隨著國家對食品安全的重視和群眾食品安全意識的不斷提高,食品微生物學檢驗工作任務(wù)也將日益增多。為了保證食品微生物學檢驗質(zhì)量,提高檢驗結(jié)果的可靠性,除了必須保證檢驗儀器設(shè)備的先進性之外,還必須加強對檢驗環(huán)境的管理,不斷提高檢驗人員的專業(yè)技術(shù)水平和工作能力,所以進行無菌室的內(nèi)部質(zhì)量控制就顯得十分重要。
按照傳統(tǒng)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的定義,無菌室是指環(huán)境空氣懸浮微生物量按無菌要求管理,滿足無菌生產(chǎn)的潔凈室。通過檢測單位體積中所含的微生物粒子(Φ≥0.5μm)的數(shù)量分為不同的級別:100級、1萬級、10萬級和30萬級[2]。在傳統(tǒng)的藥品生產(chǎn)領(lǐng)域,對于無菌條件的要求通常都比較苛刻,一般至少要達到百級凈化要求。目前,在食品微生物學檢驗領(lǐng)域,大多數(shù)現(xiàn)行的國家標準、行業(yè)標準、地方標準等技術(shù)文件規(guī)定的檢驗方法(主要涉及食品、水質(zhì)、化妝品等)中并未對相應(yīng)微生物無菌室的潔凈度等級作出具體明確的規(guī)定,一般來說,在10000級的無菌室中進行食品衛(wèi)生微生物檢驗就能基本達到要求了[3]。
質(zhì)量控制廣義上指的是為達到質(zhì)量要求所采取的作業(yè)技術(shù)和活動,其目的在于監(jiān)視過程并排除質(zhì)量環(huán)的所有階段中導致不滿意的原因[4]。無菌室的內(nèi)部質(zhì)量控制就是對無菌室內(nèi)可能影響檢驗質(zhì)量的所有環(huán)節(jié)和相關(guān)因素制定相應(yīng)控制程序,并在實施過程中定期評價及驗證,對發(fā)現(xiàn)的存在問題及時分析解決并采取有效的糾正和預防措施。其關(guān)鍵就是要保證檢驗結(jié)果能客觀真實地反映產(chǎn)品質(zhì)量情況而建立的控制體系,其最終目標是要保證微生物的培養(yǎng)、菌種分離鑒定和生化及血清免疫學試驗等環(huán)節(jié)的正確性,避免因操作控制體系的不完善或致命缺陷而導致錯誤的檢驗結(jié)果。通常質(zhì)量管理體系的建立為食品微生物學的質(zhì)量控制提供了更系統(tǒng),更科學的理論依據(jù),質(zhì)量控制又保證了檢驗結(jié)果的準確性、有效性和合法性[5]。
從總體布局上看,無菌室的墻壁、地面和天花板要求表面平整光滑、易于清洗,不易滲漏液體,并能抵抗常用消毒劑的腐蝕。無菌室一般要求要完全密閉,并保持好日常衛(wèi)生,以防止室外不凈氣體和部分昆蟲進入,與外界應(yīng)有完善的物流窗和高效空氣過濾除菌設(shè)備。無菌室內(nèi)應(yīng)備有工作濃度的常用消毒液,如苯酚酸(堿)溶液,75%的酒精,0.1%的新潔爾滅溶液等等[6]。
無菌室的位置一般要求建在人員流動較少的地方,距離普通的辦公環(huán)境或者微生物準備室要有一定的距離。無菌室內(nèi)必須配備相應(yīng)的緩沖工作間用于擺放專用白大褂或?qū)S靡旅钡取o菌室中的物流窗應(yīng)避免與空氣產(chǎn)生直接對流,最好不要正對著無菌室大門;空調(diào)需有可靠的多重高效過濾除菌系統(tǒng);所有照明和紫外燈電源總開關(guān)應(yīng)設(shè)置于無菌室門口或門外。無菌室整個布局設(shè)計應(yīng)按照人、物分離原則,防止交叉污染。此外,在人員通道可配備高效風淋室以減少實驗人員帶入的污染。對無菌室和其內(nèi)部的超凈工作臺、生物安全柜都必須進行定期監(jiān)測和日常維護,并有監(jiān)測和維護記錄。日常維護主要包括紫外線燈擦拭、濾網(wǎng)擦洗更換、空氣消毒及全面清潔衛(wèi)生等[7]。
用于無菌室建設(shè)的所有材料均應(yīng)符合消防和環(huán)保要求,具有耐腐蝕和易清潔的特點[8]。無菌室的內(nèi)部裝修應(yīng)整齊、光滑、避免凹凸、所有角落最好設(shè)置為球弧體狀以避免灰塵長期堆積難以清掃和消毒。無菌室的各個通道進出口應(yīng)采用門縫緊密且打開后能自動閉合的推拉式門,墻壁及吊頂應(yīng)采用隔熱防火、耐化學腐蝕、耐水分滲透、隔音且易清潔的新型建材以防止塵垢堆積、材料脫落、滋生霉菌、不易清潔等情況的發(fā)生??傮w上,無菌室應(yīng)盡量設(shè)計成完全封閉的模式,一般僅靠高效過濾系統(tǒng)與外界進行空氣交換。當前空氣潔凈技術(shù)已經(jīng)發(fā)展得比較成熟,在很多學科領(lǐng)域都得到了廣泛的應(yīng)用,目前很多食品微生物檢測用的無菌室也都已采用比較先進和方便易用的的層流凈化系統(tǒng)裝置,基本上都能保證食品微生物學檢驗過程中無菌狀態(tài)、恒溫恒濕、穩(wěn)定風速風量和空氣潔凈度的要求。
無菌室無菌環(huán)境的質(zhì)量控制是微生物檢驗獲得準確數(shù)據(jù)極為重要的環(huán)節(jié)[9]。食品微生物學檢驗對無菌的環(huán)境和無菌操作的要求非常嚴格,整個檢測過程始終要求在無菌狀態(tài)下以無菌操作方式進行,所以對無菌狀態(tài)的質(zhì)量控制是微生物檢驗結(jié)果準確可靠的保證。操作人員要嚴格定期對無菌室消毒效果進行評價,同時要制定合理的環(huán)境監(jiān)測程序,對環(huán)境監(jiān)測結(jié)果進行數(shù)據(jù)分析,嚴格按照相應(yīng)國家標準設(shè)定的不同工作區(qū)域可接受的菌落數(shù)量,對出現(xiàn)超標情況的處理要進行文件化控制。
此外,無菌室內(nèi)的環(huán)境情況例如溫度和濕度等可能會影響無菌室內(nèi)的消毒滅菌效果,通常情況下溫度應(yīng)控制在22℃左右,相對濕度不超過65%會比較適宜。整個無菌室應(yīng)采用先進高效層流空氣凈化系統(tǒng)以保證恒溫、恒濕、換氣量和空氣潔凈度的相關(guān)要求??諝鈨艋到y(tǒng)中的高效過濾膜能對空氣中不同大小規(guī)格的塵埃粒子進行有效過濾,防止附著在塵埃粒子上的微生物污染無菌室;采用從頂部送風、下側(cè)回風的氣流組織方式既保證了潔凈度,又節(jié)約了能源。在無菌室、人員通道及物流窗內(nèi)安裝紫外殺菌燈能對物體表面和空氣進行消毒;工作時風淋室內(nèi)的高效過濾空氣能吹去附著在操作者工作服上的部分塵埃,物流窗可傳遞實驗用品和樣品,這些設(shè)計都能保證無菌室的潔凈要求。同時高效空氣過濾系統(tǒng)通風量能滿足人員的需要,較好解決傳統(tǒng)無菌室不能置換新鮮潔凈空氣、工作環(huán)境差等問題。此外,應(yīng)定期對無菌室的無菌程度進行監(jiān)測,可參考醫(yī)藥工業(yè)潔凈室相關(guān)標準對于塵埃粒子、沉降菌、浮游菌等項目的限量對食品微生物無菌室進行定期測試。沉降菌法有最簡單、最直觀,也最能真實地反映物體表面(特別是控制部位)自然污染程度的特點[10],故也可采用平板計數(shù)瓊脂和孟加拉紅瓊脂平板各3塊,等距離置于無菌室工作位置的一條對角線上,開蓋暴露15min,分別在36℃培養(yǎng)48h,28℃培養(yǎng)5d后計數(shù)沉降的細菌和霉菌及酵母的菌落數(shù),若平均菌落數(shù)超過3CFU/皿,則應(yīng)當對無菌室空氣和無菌室內(nèi)的物體表面進行消毒以改善其無菌環(huán)境。同時微生物無菌室應(yīng)制定切實有效的各項生物安全制度并嚴格執(zhí)行[11],例如在進入放置有生物安全柜的致病菌操作間大門要裝透明的可視玻璃,大門上要貼上相應(yīng)安全等級的“生物危害”圖標,并清晰附上緊急情況聯(lián)絡(luò)人的聯(lián)系方式。在不同區(qū)域放置可自動關(guān)閉的專用垃圾桶,有裝紫外燈的區(qū)域如物流窗外要貼上相應(yīng)的“內(nèi)有紫外殺菌燈”等警示標識。
無菌室的硬件控制只要條件許可往往比較容易建立,而檢驗人員的無菌操作意識和相關(guān)微生物檢驗技能則顯得更加重要。總體來說,一個好的微生物檢驗人員,除具有高度的責任心和實事求是的工作態(tài)度外,還要有熟練的業(yè)務(wù)技能,扎實的理論功底,比較強的自學能力[12]。在無菌室內(nèi)進行食品檢驗前應(yīng)保證其無菌狀態(tài),先打開空氣凈化系統(tǒng)和紫外燈,至少保證紫外燈對空氣和無菌室內(nèi)物體表面殺菌30min。由于紫外線殺菌不會產(chǎn)生二次污染,因此,此方法優(yōu)于化學殺菌,保證了室內(nèi)人員及設(shè)備的安全[13]。進入無菌區(qū)應(yīng)洗手、更衣、換鞋。戴帽子和口罩, 以保證無菌物品存放區(qū)的空氣潔凈度[14]。無菌室一般僅限實驗操作人員進入,協(xié)助人員可在物流窗以外進行觀察或協(xié)助,實驗操作進行時人員不得頻繁進出,要嚴格保證風淋設(shè)備的運行和各扇門的關(guān)閉狀態(tài)。檢驗人員首先要嚴格保證自身的凈化,在進入無菌室前先用洗手液洗手后進入緩沖間換專用鞋和白大褂,在風淋室風淋后進入無菌室。開始檢驗時用75%酒精對雙手進行擦拭消毒。操作人員進入無菌室操作,動作要輕,幅度要小,盡量避免不必要的走動[15];檢驗時要盡量避免頻繁談話,盡量縮短無菌檢驗樣品在空氣中的暴露時間;應(yīng)通過物流窗傳遞實驗物品,人員進出要隨手關(guān)門;應(yīng)最大限度縮短在無菌室內(nèi)的操作時間,能在無菌室外進行的準備工作,應(yīng)杜絕在無菌室內(nèi)進行;要嚴格保證無菌室的清潔度,檢驗完畢可用棉花蘸取75%酒精擦拭工作臺面,人員最后離開無菌室后再打開無菌室和超凈工作臺內(nèi)的紫外燈照射30min后關(guān)閉。
無菌是指在環(huán)境中一切有生命活動的微生物的營養(yǎng)細胞及其芽孢或孢子都不存在的狀態(tài)[16]。要保證食品微生物指標檢驗的準確性,就必須做到環(huán)境無菌、儀器無菌、培養(yǎng)基無菌、人員無菌、操作無菌這5個無菌[17]。一般要求微生物液體培養(yǎng)基要進行高壓蒸汽滅菌,培養(yǎng)皿和吸管等物品應(yīng)該用報紙包嚴實進行170℃干熱滅菌2h。干熱滅菌后的物品應(yīng)放置于烘箱內(nèi)或無菌室的超凈工作臺內(nèi),保證報紙包裝無破損并盡快使用;滅菌后的液體培養(yǎng)基若不立即使用應(yīng)置于4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。無菌物品存放的有效期,受到滅菌后物品的干燥度,包裝材料、封口的嚴密性、滅菌條件和儲存環(huán)境等諸多因素影響[18]。對于干熱滅菌后的無菌培養(yǎng)皿和吸管等物品,若能保證報紙無破損并能阻擋空氣中微生物滲入,其有效期一般能適當延長,至少能保存一個月的時間;對于滅菌后放置于4℃冰箱內(nèi)的液體培養(yǎng)基最好不要超過一周。此外,保存期受到環(huán)境影響較大,對于潮濕天氣和多雨季節(jié)應(yīng)縮短其保存天數(shù)。
一般在無菌室內(nèi)不要擺放太多不必要的實驗物品以減少無菌室內(nèi)物品污染的幾率,只需要放置酒精燈、接種環(huán)、無菌剪刀和鑷子,消毒酒精等常規(guī)用品和電子天平、均質(zhì)器、水浴鍋等儀器設(shè)備,物品要歸位放置,不可隨意擺放移動。無菌室無菌程度要定期監(jiān)控并及時進行適當消毒處理;紫外線燈管表面也要防止灰塵堆積,及時用酒精棉球擦拭,有損壞的要及時更換。有條件的檢測室可用塵埃粒子計數(shù)器定期測定工作區(qū)的潔凈度,一年左右可聯(lián)系廠家清理或更換高效空氣過濾器的濾芯。此外,當檢測人員患感冒等呼吸道疾病時應(yīng)暫時避免進入無菌室。
在硬件方面,當前的一些食品微生物檢驗無菌室確實存在一些問題,例如整體設(shè)計不夠完善、建材的選擇和使用不合理、污染率過高、內(nèi)部空氣潔凈度偏低、檢測環(huán)境不良等問題。一些無菌室的地板采用普通磁磚,墻壁采用乳膠白漆和涂料往往在濕度大的情況下容易滋生霉菌,墻壁角落沒有設(shè)計成圓弧狀造成灰塵堆積不易清掃等。此外,有些無菌室的建設(shè)方面為了控制質(zhì)量成本,采用陳舊的通風過濾設(shè)備,空氣置換情況不佳,當檢驗人員在無菌室內(nèi)操作時,往往因工作量大、時間長使得檢驗環(huán)境較為惡劣。由于空氣潔凈度不高,一旦滋生霉菌往往不易清除并對檢驗結(jié)果的準確性造成不良影響。在操作控制方面,一些檢測機構(gòu)沒有建立完善的質(zhì)量手冊和程序文件,缺乏相關(guān)教育背景和工作經(jīng)驗的微生物檢驗專業(yè)技術(shù)人員,管理制度不夠健全等問題也是造成質(zhì)量控制不佳的根本原因。隨著各相關(guān)學科的迅速發(fā)展和相關(guān)體系的不斷完善,對于檢驗質(zhì)量控制和質(zhì)量改進的方法和程序?qū)粩嘟∪?,為食品安全起到進一步的把關(guān)作用。
[1]王莎莎.食品微生物快速檢測技術(shù)的研究進展[J].生命科學儀器,2009,7(8):60-63.
[2]汪穗福.微生物檢測驗證技術(shù)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005,9-10.
[3]孟建彤,黃劍屏,徐東,等.衛(wèi)生微生物無菌操作實驗室設(shè)計建造探討[J].預防醫(yī)學情報雜志,2002,18(3):261-262.
[4]范媛媛,王樹祥.食品微生物實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007,17(12):2322-2323.
[5]徐艷麗.食品微生物學檢驗的質(zhì)量控制分析[J].安徽預防醫(yī)學雜志,2008,14(1):63-65.
[6]陳雨.無菌室標準化規(guī)程及驗收規(guī)范[J].科技視界,2012,3(7):32-33.
[7]李貽漢,蔡妙森,王琳,等.衛(wèi)生微生物檢驗的質(zhì)量控制[J].中國衛(wèi)生質(zhì)量管理,2008,15(6):78-80.
[8]楊國才.微生物檢測室的設(shè)計與管理[J].中國藥物經(jīng)濟學,2013,(2):271-272.
[9]辛若竹,丁梅,張凱,等.質(zhì)量控制圖在無菌室無菌環(huán)境監(jiān)控中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2009,19(7):1538-1539.
[10]呂洪浩,姚輝.關(guān)于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室測試中浮游菌與沉降菌的關(guān)系及應(yīng)用[J].天津藥學,2006,18(3):72-73.
[11]?;覆?,張金菊.疾控機構(gòu)微生物檢驗室質(zhì)量控制探討[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,16(5):596-597.
[12]殷淑權(quán).淺談微生物實驗室的質(zhì)量控制[J].中國醫(yī)藥指南,2012,10(33):390-392.
[13]張振和.人員對室內(nèi)微生物(沉降菌)的影響及殺菌辦法[J].廣西紡織科技,2009,38(3):36-37.
[14]鄭忠立,郭凱,王麗娟.無菌室的質(zhì)量控制[J].吉林醫(yī)學,2009,30(4):350-351.
[15]肖蘭芳,周玲莉.空氣層流無菌室不同狀態(tài)下潔凈度的比較[J].護士進修雜志,2000,15(5):331-332.
[16]王燕玲,鄭雅楠,彭輝,等.微生物檢驗中的無菌操作[J].食品安全導刊,2008,(3):50-51.
[17]趙利軍.食品微生物指標檢驗的無菌問題[J].大眾標準化,2008,(5):56-57.
[18]徐然,梁樹森,王華生.無菌物品存放時間的探討[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2001,11(5):374-375.
質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督研究2013年6期