李麗娟

鄭州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州 450003

乙型病毒性肝炎是同乙型肝炎病毒（HBV）引起的一種世界性疾病。我國是乙型肝炎病毒感染的高流行區(qū)。目前酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA，簡稱酶免）是實(shí)驗(yàn)室最常用的檢測方法，利用酶催化底物反應(yīng)的放大作用，是一種因相酶免測定方法，因其實(shí)用、簡便、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保且敏感度較高，被用為檢測乙肝血清標(biāo)志物的首選方法。但是其影響因素較多，因而難免會造成假陽性或假陰性。所以了解影響因素對減少差錯事故的發(fā)生是極其必要的，本文就ELISA法測定乙肝的影響因素及具體處理方法做如下報(bào)道。

材料：統(tǒng)計(jì)2011年度該院門診、體檢、住院所有酶法檢測乙肝五項(xiàng)標(biāo)本的結(jié)果。儀器和試劑：使用安圖生物酶標(biāo)分析儀、深圳匯松PW-960洗板機(jī)和上?？迫A生物乙肝診斷試劑盒。

1 標(biāo)本因素

①病房標(biāo)本：首先收到后要認(rèn)真核對患者姓名、信息必免錯查，核對后對不符合要求的標(biāo)本（如溶血、嚴(yán)重脂血）和申請單要拒收，并登記拒收登記本，與臨床聯(lián)系。門診標(biāo)本采集時要使用靜脈采集真空玻璃管，避免試管重復(fù)使用造成污染，而且盡量不要使用塑料管，因?yàn)樗芰瞎苣芪娇乖镔|(zhì)，標(biāo)本放置過外會使抗原含量降低，造成假陰性。②正規(guī)操作應(yīng)在血液完全凝固后，運(yùn)用高速離心機(jī)離心，分離血清，清除血清中殘留部分纖維蛋白，否則會在檢測中造成假陽性，分離血清后要及時檢測，避免溶血，如果條件不允許，將標(biāo)本置于4℃冰箱保存，盡快檢測。③出現(xiàn)嚴(yán)重溶血標(biāo)本時，如果用ELISA法檢測乙肝，反應(yīng)孔對血紅蛋白有非特異性吸附作用，細(xì)胞內(nèi)液進(jìn)入造成對血清的稀釋作用，所以輕度溶血也會造成假陽性結(jié)果，因此不能使用溶血標(biāo)本。④在冰箱中保存過外的標(biāo)本，不敢保證保存過程中是否受到細(xì)菌污染，而產(chǎn)生非特異顯色，導(dǎo)致本底深造成的假陽性。

2 試劑影響因素

首先試劑質(zhì)量是影響檢測結(jié)果的直接因素，其抗原抗體純度、抗體的滴度、親和力和特異性對測定結(jié)果產(chǎn)生直接影響，另外試劑應(yīng)該用4℃冰箱保存，使用前必須試溫放置一會且最好一周內(nèi)用完，才能提高操作質(zhì)量。

3 操作失誤

①首先要使用一次性加樣吸頭，必免污染，另外加樣過程中一定要垂直加入準(zhǔn)確量的血清，加樣要準(zhǔn)確。避免出現(xiàn)加錯孔或把血清或酶噴濺到反應(yīng)孔外，造成污染。且勿觸碰包被板底部，使抗體（抗原）脫落影響結(jié)果。②溫浴。一般ELISA檢測乙肝五項(xiàng)的放置的溫度為37℃，如果溫度太高就會使包被物脫落失活，而溫度達(dá)不到37℃時，則影響反應(yīng)速度，從而影響測定結(jié)果。③加樣后序操作。首先是加樣后放置一定時間后洗板，實(shí)驗(yàn)的成功與否洗板有著很大的關(guān)系要嚴(yán)格按照試劑說明書配制洗液，手工洗板一次把反應(yīng)孔內(nèi)的纖維蛋白凝塊洗掉以免堵塞洗板機(jī)。洗板時要注意每孔注滿，且不能讓洗液溢出反應(yīng)孔，否則造成相互污染，還應(yīng)注意的是洗板時要在注入反應(yīng)孔洗液時停頓一定的秒數(shù)（參照說明書），然后棄去用甩板機(jī)甩干，如果板上的殘留液未拍干凈，也會出現(xiàn)假陽性。為了提高洗板的質(zhì)量，洗板機(jī)要定期清洗，以免長細(xì)菌降低洗板質(zhì)量。另外，顯色劑A和B一定要按要求準(zhǔn)確量加入反應(yīng)孔后充分混勻，且要避光反應(yīng)夠規(guī)定時間，如果時間不夠，也可使?jié)舛鹊偷臉?biāo)本不顯色，造成假陰性。

4 結(jié)果判定

ELISA法最早是根據(jù)肉眼觀察顯色的深淺判定結(jié)果，但是肉眼判定結(jié)果存在一定的客觀性，影響判定的準(zhǔn)確性，所以現(xiàn)在在部分醫(yī)院現(xiàn)在都運(yùn)用酶標(biāo)分析儀檢測，設(shè)空白陰、陽對照孔，確?？瞻准瓣帯㈥枌φ湛孜舛仍谟行Х秶鷥?nèi)，否則會致使計(jì)算出來的OD值、S/CO值影響陰陽性判讀。另外要注意，儀器判讀還是要與肉眼觀察相配合，才能得出正確的檢測結(jié)果。

5 各種干擾因素

①帶現(xiàn)象。在平常的操作過程中，有時標(biāo)本的濃度很高時，顯色反而會減弱甚至不顯色，造成假陰性，這是由于固相抗體只結(jié)合一定量的抗原，在抗原濃度過高時，抗體被過量抗原飽和，不能結(jié)合固相抗體，而導(dǎo)致假陰性。②一些藥物會影響乙肝ELISA法檢測，如高效價免疫球蛋白或乙肝疫苗，注射高效價免疫球蛋白后，免疫球蛋白會和乙肝表面抗原結(jié)合，形成復(fù)合物，在乙肝檢測中測不到表面抗原，出現(xiàn)假陰性。而注射乙肝疫苗后，如果注射完馬上檢測乙肝五項(xiàng)，一些人會出現(xiàn)一過性的表面抗原陽性，影響臨床診斷。

綜上所述，ELISA檢測乙肝五項(xiàng)時影響因素較多，我們要在工作中總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，必須規(guī)范、仔細(xì)的操作，盡量避免或減少人為干擾因素對結(jié)果的影響，，協(xié)助臨床，報(bào)出更準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果。

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[2] 楊琳.乙肝檢測的影響因素及其處理方法[J].求醫(yī)問藥（下半月），2012（1）：59.

[3] 張艷華.酶標(biāo)儀檢測乙肝五項(xiàng)的影響因素[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，32（1）：81-82.