陜西省人民醫(yī)院兒科（西安710068） 郭向陽 焦富勇 王 俠 高 穎

驚厥發(fā)病機制可能與中樞神經系統(tǒng)發(fā)育不成熟，腦內某些神經內分泌物質的改變以及免疫、遺傳等因素有關。近年來隨著研究的不斷深入，有關神經肽在小兒驚厥性疾病中的作用日益受到關注。我們曾研究發(fā)現(xiàn)在急性驚厥發(fā)作后血漿、腦脊液中神經肽Y（Neuropeptide Y，NPY）的水平增高［1］，為進一步探討 NPY的作用，本研究通過檢測驚厥患兒NPY與腦源性神經營養(yǎng)因子（Brain－derived neurotrophic factor，BDNF）、白介素－6（Interleukin－6，IL－6）的水平，以探討其在小兒驚厥性疾病中的臨床價值及相互關系，為早期診斷提供依據(jù)。

資料與方法

1 一般資料 所有研究對象均隨機來自2007年3月～2008年6月陜西省人民醫(yī)院兒科住院患兒。驚厥組74例，男34例，女30例，其中癲病組28例，熱驚厥組46例，年齡（6．85±2．25）歲，有明確的臨床表現(xiàn)，并經腦電圖、腰穿、頭顱CT/MRI確診。對照組15例（男性8例，女7例），年齡（6．60±2．27）歲，均為臨床疑為神經系統(tǒng)疾病，但無驚厥表現(xiàn)，并經腰穿、腦電圖、頭顱CT/MRI檢查，最后排除神經系統(tǒng)疾病，確診為低血糖、低血鈉、低鉀性麻痹、血管迷走性暈厥。各組在年齡分布、性別構成、體重的差異均沒有顯著性（P＞0．05）。

2 研究方法 分別于入院后第1天、第7天清晨空腹肘部靜脈采血4 ml，且分別于入院后d1行常規(guī)腰穿檢查并進行腦脊液常規(guī)、生化及其它等相關檢查，剔除損傷性標本，并預留2 ml CSF。血和CSF均置于4oC預冷的試管（含10%EDTA．Na230μl和抑肽酶40μl）混勻，3000r離心15 min，放于－75oC貯存?zhèn)錅y。

采用放射免疫方法測定血漿和腦脊液中NPY、BDNF、IL－6水平，嚴格按照試劑盒說明由專門的實驗室人員操作。靈敏度＜10ng/L，批內變異系數(shù)＜10%，批間變異系數(shù)＜10%，單位用ng/L表示。

3 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標準差（ˉ）表示，用SPSS 16．0統(tǒng)計軟件進行分析，兩樣本均數(shù)間的比較用t檢驗，組間比較用方差分析，相關性檢驗用直線相關分析與逐步回歸分析等，均以雙側P＜0．05為顯著性檢驗性水平。

結 果

1 各組血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6水平比較 驚厥組各組血漿和CSF中NPY、IL－6水平均高于對照組（P＜0．001），且熱驚厥組和癲癇組也有顯著差異（P＜0．05），但BDNF水平與對照組比較無統(tǒng)計學差異（P＞0．05），見表1、2。

表1 各組血漿中 NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

表2 各組CSF中 NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

2 在不同類型的熱驚厥患兒血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6水平比較：血漿和CSF中NPY、BDNF水平在單純性熱驚厥和復雜性熱驚厥比較無統(tǒng)計學差異（P＞0．05），但IL－6水平在單純性熱驚厥和復雜性熱驚厥比較顯著差異（P＜0．05），見表3、4。

表3 不同熱驚厥患兒的血漿中NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

表4 兩組CSF中 NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

3 不同類型癲癇患兒血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6水平比較：血漿和CSF中NPY、BDNF水平在部分性發(fā)作和全面性發(fā)作比較無統(tǒng)計學差異（P＞0．05），但IL－6水平在部分性發(fā)作和全面性發(fā)作比較顯著差異（P＜0．05），見表5、6。

表5 不同類型癲癇患兒的血漿中NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

表6 不同類型癲癇患兒的CSF中NPY、BDNF、IL－6水平變化（ng/L）

4 血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6水平與驚厥次數(shù)的關系：血漿和CSF中NPY、IL－6水平驚厥發(fā)作次數(shù)有關，發(fā)作次數(shù)＞3患兒明顯高于發(fā)作次數(shù)≤3者（P＜0．05），而BDNF水平與驚厥發(fā)作次數(shù)無明顯相關（P＞0．05），見表7、8。兩組比較，NPY第1天，第7天P均＜0．05，BDNF第1天，第7天P均＞0．05，IL－6第1天，第7天P均＜0．05

表7 血漿中 NPY、BDNF、IL－6水平與驚厥次數(shù)的關系（ng/L）

表8 CSF血漿中 NPY、BDNF、IL－6水平與驚厥次數(shù)的關系（ng/L）

5 血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6的相關分析：經直線相關與回歸分析血漿和腦脊液中NPY、BDNF、IL－6均與性別、年齡、體重無相關性，P均＞0．05。無論在正常組和驚厥組、癲癇組，血漿中 NPY、BDNF、IL－6與腦脊液中的NPY、BDNF、IL－6均分別呈正相關（P＜0．05），而且血漿和腦脊液中的NPY與IL－6呈正相關（P＜0．01），與BDNF呈負相關（P＜0．01）；BDNF與IL－6呈負相關（P＜0．01）。

討 論

諸多因素參與驚厥的發(fā)生、發(fā)展，迄今為止驚厥發(fā)病機制尚未完全闡明，神經－免疫－內分泌網絡調節(jié)失衡是其發(fā)生發(fā)展的重要因素之一［2］。在復雜的神經網絡中，神經、內分泌、免疫系統(tǒng)相互影響，三大系統(tǒng)之間通過雙向調節(jié)作用維持機體正常的生理活動，無論哪個系統(tǒng)出現(xiàn)問題都可以影響整個系統(tǒng)的平衡，促進驚厥的發(fā)作。

NPY廣泛分布于中樞及外周組織，尤以神經系統(tǒng)濃度最高，在腦中起著神經遞質和神經調質的作用，主要分布在大腦皮層、丘腦及腦干，尤以海馬濃度最高，而大腦邊緣系統(tǒng)海馬區(qū)與免疫系統(tǒng)關系最為密切，海馬神經元異常電活動是許多類型驚厥和癲癇的始動因素。我們曾觀察了在不同驚厥性疾病中血漿、CSF中NPY的變化［1］。本文結果再次表明驚厥發(fā)作后血漿、CSF中NPY濃度均增高，且二者間有相關性（P＜0．05），提示血漿NPY含量能間接反映CSF中NPY水平。眾多研究證實在動物和人類研究中驚厥發(fā)作后神經肽Y含量增多［3］。在本研究中發(fā)現(xiàn)在第1天血漿、CSF中驚厥組患兒NPY水平明顯較對照組增高（P＜0．001），在第7天血漿中驚厥組患兒NPY水平較第1天升高，有顯著性差異（P＜0．01），驚厥組各組患兒NPY水平第7天較第1天升高也有顯著性差異（P＜0．05），且驚厥組各組患兒NPY水平之間也有顯著性差異（P＜0．001），提示在驚厥發(fā)作后NPY合成與釋放增加，而且血漿、CSF中NPY含量增多，并在驚厥發(fā)展的不同階段其水平不同。在我們的研究中也發(fā)現(xiàn)驚厥發(fā)作次數(shù)＞3次的患兒血漿和CSF中NPY水平與≤3次的患兒在第1天、第7天相比有顯著性差異（P＜0．05），而且前者在第7天增高程度較后者高，提示在驚厥發(fā)作后NPY合成與釋放增多，與驚厥的發(fā)作次數(shù)有關。這表明反復驚厥可導致內源性NPY代償增加，發(fā)揮機體自我保護作用。但在不同驚厥發(fā)作類型、不同癲癇發(fā)作類型的患兒中無顯著差異（P＞0．05），這可能提示驚厥發(fā)作后NPY的釋放與驚厥程度有關，而與發(fā)作形式無關，仍需大樣本進一步探討和研究。

BDNF對中樞神經系統(tǒng)的多種類型神經元的生長、發(fā)育、分布、維護和再生都具有重要作用，主要由腦組織合成，在中樞神經系統(tǒng)中主要分布在與驚厥敏感性密切相關的海馬、杏仁核和皮質。在神經元內BDNF主要定位于胞體和軸突。研究顯示BDNF有著營養(yǎng)和保護神經元、促進神經發(fā)育的作用，但在BDNF與驚厥的發(fā)作關系上存在不同的觀點，有研究顯示BDNF減低神經元興奮性，延緩點燃模型的發(fā)作，降低內源性BDNF表達可加重驚厥發(fā)作，可能通過增加NPY的表達而達到延緩發(fā)作［4］；另一方面也有研究顯示BDNF有增強興奮性遞質的作用，導致驚厥發(fā)作，進一步發(fā)現(xiàn)海馬內注入BDNF能夠誘發(fā)自發(fā)性發(fā)作［5］。驚厥發(fā)作后BDNF含量在動物或人類研究中也有增加或降低的報道［6～8］。在本研究中發(fā)現(xiàn)在驚厥組血和CSF中BDNF第1天和第7天均比對照組低，統(tǒng)計學無差異，但第7天較第1天有所增高。在不同驚厥發(fā)作類型、不同癲癇發(fā)作類型的患兒中無顯著差異（P＞0．05），并與發(fā)作次數(shù)無顯著關系（P＞0．05），這提示驚厥發(fā)生后BDNF水平的變化與驚厥發(fā)生的形式和程度關系不大，很可能是在驚厥發(fā)生發(fā)展的不同階段其水平不同，這一點與最近研究報道相符［8］，也有研究認為在驚厥發(fā)作后BDNF含量變化與引起驚厥發(fā)作的病變腦區(qū)、時間、年齡等有關系［8，9］。另外，由于驚厥發(fā)作與諸多因素有關，對于驚厥后BDNF的變化和驚厥間的關系，仍需進一步的動物和臨床研究。

IL－6主要由單核/巨噬細胞產生，廣泛參與中樞神經系統(tǒng)內的免疫反應，可促進小鼠中樞神經系統(tǒng)海馬和小腦部位的星狀膠質增生，并可誘導中樞神經系統(tǒng)中的B淋巴細胞分化成為可分泌免疫球蛋白的漿細胞，參與腦組織的免疫性炎癥。研究表明IL－6對谷氨酸釋放、興奮傳播具有明顯的抑制作用，減輕NMDA的神經毒效應及其對神經元的損傷，有助于神經元的存活和神經元的保護，而且驚厥發(fā)作后IL－6 mRNA在大腦皮質、海馬和視丘下部的表達明顯增加［10］。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)在驚厥發(fā)作后IL－6在血和CSF中都是增高的，均較對照組明顯升高，有明顯的統(tǒng)計學差異（P＜0．001），這與文獻結果相同［10～12］，而且在血中驚厥組各組患兒第7天較第1天升高，有顯著性差異（P＜0．05），驚厥組各組患兒血中IL－6水平在第1天、第7天也有顯著性差異（P＜0．05），并且血和CSF中的IL－6有一定的相關性，在不同的驚厥類型、癲癇類型間有差異（P＜0．05），與驚厥的發(fā)作次數(shù)也有關（P＜0．05），與文獻報道相同［10］。這些說明IL－6與驚厥之間存在著密切的關系。

有研究表明，BDNF可誘導NPY在海馬高表達，而且注射NPY也可促進致癇大鼠海馬內BDNF的表達［13］，可見在驚厥中二者之間有一定的相互作用。本研究中，我們同時測定了驚厥患兒血漿和CSF中的NPY、BDNF、IL－6的水平，并發(fā)現(xiàn)CSF中 NPY、BDNF、IL－6水平的含量均高于其各自在血漿水平，且無論在正常組和驚厥組、癲癇組，血漿中NPY、BDNF、IL－6與CSF中的NPY、BDNF、IL－6均分別呈正相關（P＜0．05），提示血漿中NPY、BDNF、IL－6水平能間接反映其在CSF中水平，而且血漿和CSF中NPY、BDNF、IL－6均與性別、年齡、體重無相關性（P＞0．05）。在我們的研究中也發(fā)現(xiàn)血漿和CSF中的NPY與IL－6呈正相關（P＜0．01），與BDNF呈負相關（P＜0．01）；BDNF與IL－6呈負相關（P＜0．01）。這提示在驚厥的發(fā)生和發(fā)展中三者具有相互影響的作用。

總之，在本研究中觀察到在驚厥的發(fā)作和發(fā)展中，NPY、BDNF、IL－6三者在血和CSF中的水平在不同的驚厥階段是不同的，參與了驚厥時的異常神經免疫應答，從而導致神經網絡失衡，進而內分泌免疫功能紊亂。不同水平的神經肽、細胞因子等參與驚厥的發(fā)生過程，這可能是其發(fā)病的分子生物學基礎之一。同時，本文結果表明其共同參與了神經免疫應答反應，其水平的變化間接反映了驚厥對腦組織的損傷。通過對其水平變化的檢測，可能有助于對驚厥的臨床診斷、治療及預后的判斷。

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