劉亞男，姚長(zhǎng)洪，2，周建男，孟迎迎，王海濤，2，曹旭鵬，薛 松

（1.中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所，大連116023；2.中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京100049；3.大連理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，大連116024）

使用BODIPY熒光染料快速測(cè)定微藻油脂含量方法

劉亞男1，姚長(zhǎng)洪1，2，周建男1，孟迎迎3，王海濤1，2，曹旭鵬1，薛 松1

（1.中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所，大連116023；2.中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京100049；3.大連理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，大連116024）

使用BODIPY505／515熒光染料，通過(guò)熒光分光光度法測(cè)定藻細(xì)胞中的油脂含量。結(jié)果表明：BODIPY505／515的最佳染色條件為二甲基亞砜（DMSO）體積分?jǐn)?shù)2%，BODIPY505／515最終質(zhì)量濃度0.25μg／mL，染色時(shí)間30 min，染色溫度35℃。在最佳染色條件下，微藻油脂含量與熒光強(qiáng)度呈線性相關(guān)（R2＝0.976 4）。通過(guò)測(cè)定BODIPY505／515染色的不同種屬微藻的熒光強(qiáng)度，應(yīng)用該關(guān)系計(jì)算其油脂含量，與質(zhì)量法測(cè)定的結(jié)果相比沒有顯著差異。該方法較為普適，比傳統(tǒng)方法相比具有簡(jiǎn)便快捷，試樣用量少的特點(diǎn)，與尼羅紅熒光染料相比具有較窄的發(fā)射波譜范圍，不會(huì)與微藻的自身熒光相互干擾，更適于過(guò)程監(jiān)控及高含油藻株的篩選。

BODIPY；熒光；油脂；微藻

能源是經(jīng)濟(jì)可持續(xù)發(fā)展的動(dòng)力，而石化燃料資源的日益枯竭卻給全球經(jīng)濟(jì)的發(fā)展帶來(lái)了危機(jī)［1］。微藻作為一種潛在的可再生能源的生產(chǎn)者，具有光合效率高、生長(zhǎng)速率快、生長(zhǎng)周期短、單細(xì)胞油脂含量高和不占用耕地等優(yōu)點(diǎn)，在生物質(zhì)能源生產(chǎn)領(lǐng)域受到了越來(lái)越廣泛的重視［2］。

微藻藻種選育是生物柴油生產(chǎn)過(guò)程中關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，其中油脂含量是藻種篩選的重要指標(biāo)，選育富油藻種是規(guī)?；囵B(yǎng)的前提條件［3］。快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的油脂含量測(cè)定方法不僅對(duì)富油藻種的篩選和生物柴油的生產(chǎn)極其重要，對(duì)微藻生物學(xué)的研究也具有十分重要的意義［4］。

質(zhì)量法是最為常用的微藻油脂測(cè)定方法，該方法準(zhǔn)確度高，但存在所需試樣量大、試樣處理與提取過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)、使用有毒的有機(jī)溶劑提取、環(huán)境友好度差且測(cè)量成本較高的缺點(diǎn)。近年來(lái)，文獻(xiàn)［5-7］利用熒光染料特異性結(jié)合微藻中性脂油滴來(lái)分析油脂含量，以尼羅紅熒光染色法最為常見。這種方法能快速、靈敏地實(shí)現(xiàn)微藻中性脂的檢測(cè)，但是尼羅紅的發(fā)射光在590～640 nm范圍內(nèi)，與很多藻的自身葉綠素?zé)晒庀嗷ジ蓴_，導(dǎo)致不能準(zhǔn)確地進(jìn)行檢測(cè)。因此，需要找到一種更為廣泛適用的能夠避免藻類自身熒光干擾的熒光染料。

BODIPY是一類近紅外的短波長(zhǎng)熒光染料，常見的有BODIPY493／503、BODIPY500／510、BODIPY505／515、BODIPY530／550、BODIPY558／568，它們可以特異性地作用于中性脂組成的油滴，使得油滴可以被檢測(cè)，且其發(fā)射波長(zhǎng)可以避開大部分藻自身葉綠素?zé)晒獾母蓴_［8］，目前，已有在流式細(xì)胞儀中使用BODIPY505／515進(jìn)行產(chǎn)油微藻篩選的報(bào)道［9-10］，但流式細(xì)胞儀操作復(fù)雜，價(jià)格昂貴，不宜推廣。利用BODIPY染色可以在熒光顯微鏡下定性觀察微藻油脂積累的情況［11］，但還沒有利用該染料的熒光強(qiáng)度定量檢測(cè)微藻油脂含量的報(bào)道。

筆者以湛江等鞭金藻（Isochrysis zhangjiangensis）為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用BODIPY505／515對(duì)其中性脂進(jìn)行染色，使用熒光分光光度計(jì)進(jìn)行熒光強(qiáng)度的測(cè)定，考察該染料的最佳染色條件，并通過(guò)與傳統(tǒng)質(zhì)量法的比較，建立熒光強(qiáng)度與油脂含量的關(guān)系，將應(yīng)用到綠藻、硅藻等其他藻中，以實(shí)現(xiàn)熒光分光光度計(jì)快速檢測(cè)微藻油脂含量，為藻類培養(yǎng)的過(guò)程監(jiān)控及產(chǎn)油微藻的篩選奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藻種

海水藻：湛江等鞭金藻（Isochrysis zhangjiangen?sis）、亞心形四爿藻（Tetraselmis subcordiformis）、新月藻（Nitzschia closterium）、巴夫藻（Pavlova viridis）和牟氏角毛藻（Chaetocerosmuelleri），由遼寧海洋水產(chǎn)研究所提供。淡水藻：蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa），購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)淡水藻種庫(kù)（FACHB?Collection）。

1.1.2 培養(yǎng)基

海水藻培養(yǎng)基由來(lái)自大連附近海域的天然海水添加相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)鹽組成，淡水藻培養(yǎng)基由去離子水添加相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)鹽組成。

1）康維方營(yíng)養(yǎng)鹽（1 L） NaNO3100 mg，NaH2PO4·2H2O 20.0 mg，EDTA?Na245.0 mg，H3BO333.6 mg，MnCl2·4H2O 0.36 mg，F(xiàn)eCl3·6H2O 1.3 mg，ZnCl20.21 mg，CoCl2·6H2O 0.20 mg，（NH4）4Mo7O24· 4H2O 0.09 mg，CuSO4·5H2O 0.20 mg，KNO31 g，KH2PO40.05 g，Tris 0.81 g，CH3COOH 0.346 g，用于培養(yǎng)亞心形四爿藻。

2）f／2營(yíng)養(yǎng)鹽（1 L） NaNO375 mg，NaH2PO4· 2H2O 5 mg，VB120.5μg，生物素（Biotin）0.5μg，VB10.1 mg，F(xiàn)eCl3·6H2O 3.16 mg，Na2EDTA·2H2O 4.36 mg，CuSO4·5H2O 9.8μg，Na2MoO4·2H2O 6.3μg，ZnSO4·7H2O 22μg，CoCl2·6H2O 12μg，MnCl2· 4H2O 0.18 mg，用于培養(yǎng)湛江等鞭金藻和巴夫藻。

3）f／2＋硅酸鈉營(yíng)養(yǎng)鹽 上述f／2營(yíng)養(yǎng)鹽添加Na2SiO330 mg／L，用于培養(yǎng)新月藻和牟氏角毛藻。

4）SE培養(yǎng)基（1 L） NaNO30.25 g，K2HPO4· 3H2O 0.075 g，MgSO4·7H2O 0.075 g，CaCl2·2H2O 0.025 g，KH2PO40.175 g，NaCl 0.025 g，F(xiàn)eCl3· 6H2O 0.005 g，EDTA?Fe 0.005 g，H3BO32.86 mg，MnCl2·4H2O 1.86 mg，ZnSO4·7H2O 0.22 mg，Na2MoO4·2H2O 0.39 mg，CuSO4·5 H2O 0.08 mg，Co（NO3）2·6H2O 0.05 mg，胰蛋白胨1 g，用于培養(yǎng)蛋白核小球藻。

1.1.3 儀器和試劑

Cary Eclipse熒光分光光度計(jì)（安捷倫公司），二甲基亞砜（DMSO，Sigma公司），BODIPY 505／515（4，4?difluro?1，3，5，7?tetramethyl?4?bora?3a，4adiazas?indacene，Invitrogen公司）。其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)條件

6株藻的培養(yǎng)條件相同：溫度（25±1）℃，光暗時(shí)間比14∶10，日光燈作光源。藻種培養(yǎng)于3 L錐形瓶中，光強(qiáng)為（50±5）μmol／（m2·s），培養(yǎng)至指數(shù)期接種使用。培養(yǎng)均在600 mL鼓泡式柱狀反應(yīng)器中完成，培養(yǎng)體積為500mL，光強(qiáng)（200±10）μmol／（m2·s），CO22%（體積分?jǐn)?shù)），通氣速率100 mL／min，接種初始密度2×106個(gè)／mL。

1.2.2 測(cè)定方法

1）油脂含量的測(cè)定 使用正己烷對(duì)干燥的藻粉進(jìn)行油脂的提取，稱取100 mg藻粉，加入2 mL正己烷進(jìn)行總脂的提取，提取3遍，合并3次的提取液，N2吹掃至無(wú)溶劑后，烘干稱質(zhì)量即可測(cè)得油脂占干質(zhì)量百分比。

2）熒光強(qiáng)度的測(cè)定［12］使用熒光分光光度計(jì)的孔板閱讀模式進(jìn)行測(cè)定，依次向96孔板中加入5 μL稀釋后的藻液，3μL一定濃度的BODIPY505／515熒光染料，292μL一定濃度的DMSO水溶液，共300μL體系，使藻液的終濃度保持在OD680值0.15左右，一定溫度下避光染色一定時(shí)間。選擇470 nm作為激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)定在發(fā)射波長(zhǎng)515 nm的熒光強(qiáng)度。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析

用SPSS 16.0單因素方差分析（ANOVA）中的LSD多重比較進(jìn)行數(shù)據(jù)差異性分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 染料濃度對(duì)染色效果的影響

在不同的BODIPY最終質(zhì)量濃度條件下對(duì)藻細(xì)胞進(jìn)行染色，分別考察BODIPY濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響，每個(gè)濃度下有8個(gè)重復(fù)，結(jié)果見圖1。

由圖1可知：當(dāng)染料質(zhì)量濃度小于0.187 5 μg／mL時(shí)，熒光強(qiáng)度保持在135，多重比較顯示無(wú)顯著性差異（p＞0.05）。隨著染料濃度增加，熒光強(qiáng)度逐漸增加，到0.25μg／mL時(shí)達(dá)到2 171，此后增加染料濃度到1μg／mL，熒光強(qiáng)度無(wú)顯著增加（p＞ 0.05）。只有當(dāng)染料濃度增加到1.25μg／mL時(shí)熒光強(qiáng)度迅速增加到6 857，同時(shí)考慮到染色的靈敏度和染料用量，選擇最佳的染料終質(zhì)量濃度為0.25 μg／mL。

圖1 染料濃度對(duì)染色效果的影響Fig.1 Effects of dye concentrations on fluorescence intensity

2.2 染色溫度對(duì)染色效果的影響

在不同的溫度下對(duì)藻細(xì)胞進(jìn)行染色，分別考察染色溫度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響，染料終質(zhì)量濃度為0.25μg／mL，每個(gè)溫度下有8個(gè)重復(fù)，結(jié)果見圖2。

圖2 染色溫度對(duì)染色效果的影響Fig.2 Effects of staining tem peratures on fluorescence intensity

由圖2可知：在25～35℃的范圍內(nèi)，隨著染色溫度的升高，熒光強(qiáng)度逐漸升高，到35℃達(dá)到最大，這可能是因?yàn)闇囟鹊纳哂欣贐ODIPY進(jìn)入細(xì)胞與油滴結(jié)合；之后熒光強(qiáng)度隨著溫度升高而迅速減小，可能是由于溫度過(guò)高會(huì)使熒光染料淬滅［13］。因此，選擇最佳染色溫度為35℃。

2.3 染色時(shí)間對(duì)染色效果的影響

為了獲得最優(yōu)的染色時(shí)間，考察染色時(shí)間對(duì)熒光強(qiáng)度的影響，染料終質(zhì)量濃度為0.25μg／mL，染色溫度為35℃。每個(gè)染色時(shí)間下有8個(gè)重復(fù)，結(jié)果見圖3。

圖3 染色時(shí)間對(duì)染色效果的影響Fig.3 Effects of staining time on fluorescence intensity

由圖3可知：染色效果隨染色時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，染色60 min以后熒光強(qiáng)度幾乎不變。在本實(shí)驗(yàn)中，為了縮短染色時(shí)間而又能達(dá)到較好的染色效果，選擇30 min為后續(xù)的染色時(shí)間。

2.4 DMSO對(duì)熒光染料染色效果的影響

由于湛江等邊金藻沒有細(xì)胞壁，故使用其進(jìn)行DMSO濃度對(duì)染色效果的促進(jìn)實(shí)驗(yàn)就沒有意義，本文在研究DMSO體積分?jǐn)?shù)時(shí)僅選用了具有較厚細(xì)胞壁的綠藻——亞心形四爿藻。

在不同的DMSO的體積分?jǐn)?shù)條件下對(duì)藻細(xì)胞進(jìn)行染色，分別考察不同的DMSO濃度對(duì)藻細(xì)胞染色的熒光強(qiáng)度的影響，染料終質(zhì)量濃度為0.25μg／mL，染色溫度為35℃，染色30 min。每個(gè)體積分?jǐn)?shù)下有8個(gè)重復(fù)，結(jié)果見圖4。

圖4 DMSO體積分?jǐn)?shù)對(duì)染色效果的影響Fig.4 Effects of DMSO concentrations in BODIPY505／515 on fluorescence intensity

由圖4可知：DMSO體積分?jǐn)?shù)的增加，對(duì)扁藻的染色效果有所加強(qiáng)，隨著DMSO濃度的增加，熒光強(qiáng)度也相應(yīng)地增加，當(dāng)DMSO的量從0.1%增加到2%時(shí)，相應(yīng)的熒光強(qiáng)度從375增加到446，當(dāng)DMSO體積分?jǐn)?shù)增加到5%時(shí)，熒光強(qiáng)度更是增加到了474，比0.1%時(shí)增加了100。選擇DMSO添加的最終體積分?jǐn)?shù)為2%。

DMSO能夠改變生物膜對(duì)電解質(zhì)、藥物和代謝產(chǎn)物的通透性，促進(jìn)染料進(jìn)入藻細(xì)胞［14］。Chen等［15］采用DMSO和微波輔助NR染色顯著提高了采用普通的染色方法不易染色的普通小球藻（Chlorella vulgaris）、假綠球藻（Pseudochlorococcum sp.）、雙形柵藻（Scenedesmus dimorphus）和若夫小球藻（Chlorella zofingiesis）的染色效果。

2.5 油脂含量與熒光強(qiáng)度的相關(guān)性

在以上優(yōu)化的染色條件下，根據(jù)熒光強(qiáng)度與對(duì)應(yīng)的油脂含量制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，考察其線性相關(guān)性，結(jié)果見圖5。

圖5 油脂含量與熒光強(qiáng)度的相關(guān)性Fig.5 Correlation of lipid content and fluorescence intensity

由圖5可知：在油脂含量11%～26%的范圍內(nèi)，油脂含量與熒光強(qiáng)度有較好的線性關(guān)系，R2＝0.976 4，并得到油脂含量與熒光強(qiáng)度的回歸方程y＝0.035x＋1.293 4（y為油脂含量，%；x為熒光強(qiáng)度），根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線方程來(lái)計(jì)算微藻油脂含量。

在質(zhì)量法中，正己烷由于其極性較弱，提取的主要是微藻的中性脂，如甘油三酯（TAG）、甘油二酯（DAG）、甘油一酯（MAG）和游離脂肪酸（FFA），而BODIPY熒光染料也主要是與中性脂組成的油滴結(jié)合才能在相應(yīng)的波長(zhǎng)下發(fā)熒光［16］，因此用正己烷提取法測(cè)得的油脂含量與BODIPY熒光強(qiáng)度有較好的相關(guān)性。

2.6 熒光染料BODIPY505／515優(yōu)化的染色方法在其他藻上的應(yīng)用

對(duì)于不同的微藻，使用2.5中的回歸方程，根據(jù)測(cè)得的熒光值計(jì)算得到油脂占干質(zhì)量百分比，使用質(zhì)量法獲得的油脂含量進(jìn)行比較，結(jié)果見圖6。

由圖6可知：除新月藻外，其余3株藻用熒光值計(jì)算的油脂含量與質(zhì)量法測(cè)定的油脂含量沒有顯著差異（p＞0.05）。因此，利用BODIPY熒光染料可以在較廣的微藻范圍（如硅藻、綠藻、金藻等多種藻類）內(nèi)快速、準(zhǔn)確測(cè)定油脂含量。同時(shí)，也可以應(yīng)用于培養(yǎng)過(guò)程油脂代謝監(jiān)控、藻種篩選等方面。

圖6 使用熒光值計(jì)算油脂含量與質(zhì)量法測(cè)定油脂含量比較Fig.6 Comparison of lipid contents in different algae species determ ined by fluorescencemethod and conventional gravimetric method（n＝3）

3 結(jié) 論

探索了利用BODIPY505／515熒光染料，通過(guò)熒光分光光度法測(cè)定藻細(xì)胞中的油脂含量的方法，確定了最適的染色條件，即染料質(zhì)量濃度為0.25 μg／mL，DMSO的體積分?jǐn)?shù)為2%，在35℃下避光染色30 min。利用該方法可以較準(zhǔn)確地測(cè)定不同種屬的微藻細(xì)胞內(nèi)中性脂的含量，且具有不與微藻自身熒光相互干擾、試樣和熒光染料用量少、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、可定量動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞內(nèi)油脂積累情況等優(yōu)點(diǎn)，可應(yīng)用于培養(yǎng)過(guò)程油脂代謝監(jiān)控、藻種篩選等方面，將成為微藻油脂研究的有力工具。

［1］ 蔣曉菲，周紅茹，金青哲，等.微藻油脂提取技術(shù)的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)油脂，2012，37（10）：62?66.

［2］ Amaro H M，Guedes A C，Malcata F X.Advances and perspectives in using microalgae to produce biodiesel［J］.Appl Energy，2011，88（10）：3402?3410.

［3］ 楊忠華，李方芳，曹亞飛，等.微藻減排CO2制備生物柴油的研究進(jìn)展［J］.生物加工過(guò)程，2012，10（1）：70?76.

［4］ 梁英，石偉杰，田傳遠(yuǎn).微藻總脂含量測(cè)定方法概述［J］.中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，42（5）：35?40.

［5］ 王金娜，嚴(yán)小軍，周成旭，等.產(chǎn)油微藻的篩選及中性脂動(dòng)態(tài)積累過(guò)程的檢測(cè)［J］.生物物理學(xué)報(bào)，2010，26（6）：472?280.

［6］ 張敬鍵，呂雪娟，李愛芬，等.微藻細(xì)胞油脂含量的快速檢測(cè)方法［J］.中國(guó)生物工程雜志，2012，32（1）：64?72.

［7］ 林義，鐘添華，駱祝華，等.尼羅紅染色法篩選產(chǎn)油酵母及定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)油脂含量的研究［J］.微生物學(xué)通報(bào)，2012，39（1）：125?137.

［8］ Haugland R P.Handbook of Fluorescent Probes and Reasearch Chemicals［M］.6thed.Eugene：Molecular Probes Inc.，1996：13?19.

［9］ Cooper M S，Hardin W R，Petersen TW，etal.Visualizing＂green oil＂in live algal cells［J］.J Biosci Bioeng，2010，109（2）：198?201.

［10］ Pereira H，Barreira L，Mozes A，et al.Microplate?based high throughput screening procedure for the isolation of lipid?rich marinemicroalgae［J］.Biotechnol Biofuels，2011，4（1）：61.doi：10.1186／01754?6834?4?61.

［11］ Ohsaki Y，Shinohara Y，Suzuki M，et al.A pitfall in using BODIPY dyes to label lipid droplets for fluorescencemicroscopy［J］.Histochem Cell Biol，2010，133（4）：477?480.

［12］ 薛松.一種使用BODIPY類熒光染料測(cè)定微藻油脂含量的方法：中國(guó)，201210442558.6［P］.2012?11?08.

［13］ Chen W，Zhang C，Song L，et al.A high throughput Nile red method for quantitative measurement of neutral lipids in microalgae［J］.JMicrobiol Methods，2009，77（1）：41?47.

［14］ 王海英，符茹，黃寶祥.基于尼羅紅熒光染色的小球藻脂質(zhì)快速檢測(cè)方法研究［J］.中國(guó)油脂，2012，37（3）：78?81.

［15］ Chen W，Sommerfeld M，Hu Q.Microwave?assisted Nile red method for in vivo quantification of neutral lipids in microalgae［J］.JMicrobiol Methods，2011，102（1）：135?141.

［16］ Elle IC，Olsen L C，Pultz D，et al.Something worth dyeing for：molecular tools for the dissection of lipid metabolism in Caenorhabditis elegans［J］.FEBS Lett，2010，584（11）：2183?2193.

Rapid method for lipid content quantifiction ofm icroalgae based on BODIPY fluorescence

LIU Yanan1，YAO Changhong1，2，ZHOU Jiannan1，MENG Yingying3，WANG Haitao1，2，CAO Xupeng1，XUE Song1

（1.Dalian Institute of Chemical Physics，Chinese Academy of Sciences，Dalian 116023，China；2.University of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China；3.School of Life Science and Biotechnology，Dalian University of Technology，Dalian 116024，China）

A method formicroalgae oil contentmeasurement based on fluorescent dye BODIPY505／515 is introduced.The optimum dyeing conditions for BODIPY505／515 were：BODIPY505／515 final concentration 0.25 g／mL with 2%DMSO，and dyeing at35℃for 30 min.Under optimal conditions，the correlation between oil content and fluorescence was built with R2＝0.976 4.Samples of four different species ofmicroalgae were tested by using the above optimal conditions，gravimetricmethod and Nile red fluorescence dye method.Compared with the gravimetric method，the advantages of the method were universal，simple，less sample required.Compared with the Nile red fluorescence dyes，BODIPY505／515 had narrow emission spectrum without the microalgal autofluorescence interference，more suitable foroleaginous algal strain screening and processmonitoring.

BODIPY；fluorescent；lipid；microalgae

Q949

A

1672-3678（2013）06-0068-05

10.3969／j.issn.1672-3678.2013.06.014

2013-01-31

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）（2011CB200903）；國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃（863計(jì)劃）（2012AA052101）；中國(guó)科學(xué)院百人計(jì)劃（A1097）；遼寧省自然科學(xué)基金（2012010263）；中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所知識(shí)創(chuàng)新項(xiàng)目（K2010A3）；中國(guó)科學(xué)院知識(shí)創(chuàng)新工程領(lǐng)域前沿項(xiàng)目——大連化學(xué)物理研究所科研基金——青年基金

劉亞男（1982—），女，黑龍江雙鴨山人，碩士，助理研究員，研究方向：微藻生物能源；薛 松（聯(lián)系人），研究員，E?mail：xuesong＠dicp.ac.cn