范雙莉王志舉* 任亞麗

（1 鄭州大學基礎醫(yī)學院，河南 鄭州 450001；2 濟源職業(yè)技術學院，河南 濟源 459000）

黃芪注射液對H22荷瘤小鼠抑瘤作用的細胞免疫機制

范雙莉1,2王志舉1* 任亞麗2

（1 鄭州大學基礎醫(yī)學院，河南 鄭州 450001；2 濟源職業(yè)技術學院，河南 濟源 459000）

目的探討黃芪注射液體內抑瘤作用的細胞免疫機制。方法將昆明小鼠移植H22肝癌細胞后，分為五組：模型組，5-氟尿嘧啶組，黃芪注射液低、中、高劑量組。分別測定各組小鼠腫瘤生長抑制率（IR）和腹腔巨噬細胞的吞噬指數；采用MTT法測定各組小鼠脾淋巴細胞增殖指數。結果5-氟尿嘧啶組和高、中劑量黃芪注射液實驗組小鼠H22實體瘤IR分別為59.45%、50.62%和40.47%，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05）；黃芪注射液實驗組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分數、吞噬指數和脾臟淋巴細胞增值指數都明顯高于模型組小鼠（P＜0.05）。結論黃芪注射液在荷瘤小鼠體內具有一定的抑瘤作用，其機制可能與其提高荷瘤小鼠的細胞免疫功能有關。

黃芪；H22荷瘤小鼠；細胞免疫；抑瘤率

黃芪是豆科多年生草本植物，其味甘，性微溫，是重要的補益類中藥。據報道，黃芪中含有大量微量元素，如Fe2+、Mn2+、Zn2+、Se等。黃芪注射液是從黃芪中提取的有效成分精制而成，含有五十多種皂甙和數種黃芪多糖，具有提高機體免疫能力的作用[1]。本研究通過觀察黃芪注射液對H22肝癌實體瘤的抑瘤效應，探討黃芪注射液抗腫瘤作用的細胞免疫機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及瘤株

昆明種健康小鼠100只，體質量18～22g，雌雄不拘（由本院動物中心提供）；選用H22肝癌實體瘤為動物模型，瘤株（由本學院藥理學教研室提供）。

1.2 藥品、試劑及儀器

黃芪注射液，每5mL含生藥10g；5-氟尿嘧啶（5-FU），25mg/支；噻唑藍（MTT）；刀豆蛋白（ConA）；DJ5031酶聯免疫檢測儀。

1.3 方法

1.3.1 模型制備與動物分組

每一只小鼠左腋皮下注射0.2mL的瘤懸液，形成實體瘤，移植后將動物隨機分為模型組，5-氟尿嘧啶組，黃芪注射液低、中、高劑量組，每組10 只小鼠。24h后開始給藥。低、中、高劑量實驗組小鼠分別腹腔注射黃芪注射液0.1、0.2、0.4mL/d，劑量分別為2g、4g、8g/kg，1次/d；5-氟尿嘧啶組小鼠腹腔給予5-氟尿嘧啶30mg/kg，1次/d；模型組小鼠腹腔給予氯化鈉注射液0.2mL，1次/d。連續(xù)給藥7d為1個療程。

1.3.2 實驗方法

①抑瘤率的測定：給藥7d后頸椎脫臼處死小鼠，剝瘤稱量，計算各組腫瘤生長抑制率（抑瘤率，IR）。IR =（模型組平均瘤重量-實驗組平均瘤重量）/模型組平均瘤重量×100%。②腹腔巨噬細胞功能的測定：給藥7 d后，測定各組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率和吞噬指數[2]。③脾臟淋巴細胞增殖指數：給藥7d后頸椎脫臼處死小鼠，摘取脾臟，MTT法測定各組小鼠脾淋巴細胞轉化指數[3]。

1.4 統(tǒng)計學方法

數據采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量數據用均數±標準差（χ—±s）表示，兩組間比較采用配對資料的t檢驗，計數資料進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 黃芪對各組小鼠瘤重的影響

療程結束后取出腫瘤，比較各組瘤重，結果顯示5-FU組和黃芪注射液高、中劑量組小鼠H22肝癌實體瘤瘤重與模型組比較明顯減輕，差異有顯著性（P＜0.05），抑瘤率分別為59.45%、50.62%和40.47%；但黃芪注射液低劑量組與模型組比較，瘤重差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結果見表1。

表1 H22荷瘤小鼠各組瘤重的比較（n=10，χ—±s）

表2 各組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率、吞噬指數及脾淋巴細胞增殖指數（n=10，χ—±s）

2.2 黃芪對各組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率、吞噬指數及脾淋巴細胞增殖指數的影響高、中劑量實驗組和5-FU組荷瘤小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率、吞噬指數及脾淋巴細胞增殖指數均顯著高于模型組小鼠（P＜0.05）。結果見表2。

3 討 論

現代藥理學研究表明，黃芪有提高和調節(jié)機體的免疫功能的作用，其活性成分為皂苷和多糖。多糖作為生物效應調節(jié)劑可影響網狀內皮系統(tǒng)、外周血T淋巴細胞、NK細胞及巨噬細胞，并影響補體的形成以及細胞因子的分泌。單核巨噬細胞系統(tǒng)廣泛參與免疫應答、免疫效應和免疫調節(jié)，在機體維持內環(huán)境穩(wěn)定方面起到了關鍵性的作用。巨噬細胞的吞噬功能是機體細胞免疫清除突變細胞、抑瘤抗瘤的重要因素，是衡量機體細胞免疫水平的一個重要標志。T淋巴細胞在免疫應答全過程中起著重要調節(jié)的作用，是介導機體細胞免疫的免疫活性細胞，T淋巴細胞要轉化為淋巴母細胞后才能發(fā)揮免疫調節(jié)作用，T淋巴細胞轉化率（增殖指數）的高低直接反映機體細胞免疫的水平[4]。

小鼠H22肝癌實體瘤是抗腫瘤藥物研究中常用的動物移植性腫瘤模型。本實驗利用此模型觀察了黃芪注射液的體內抑瘤作用，結果表明黃芪注射液對小鼠H22肝癌實體瘤的生長有明顯的抑制作用，抑瘤率達50.62%。同時黃芪各治療組小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能、脾淋巴細胞的增殖指數均顯著高于模型組小鼠，說明黃芪可能通過提高細胞免疫功能，達到治療小鼠腫瘤的作用。

[1] 張慧,韓志紅.黃芪注射液對荷瘤小鼠免疫功能的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2002,13(3)∶132-133.

[2] 昊雄文,梁智輝.實用免疫學實驗技術[M].武漢∶湖北科技出版社,2002∶29-35.

[3] 巴德年.當代免疫學技術與應用[M].北京∶北京醫(yī)科大學/中國協和醫(yī)科大學聯合出版社,1989∶303-135.

[4] 梅龍,董曉慧,段剛,等.參芪注射液對H22荷瘤小鼠抑瘤作用的細胞免疫機制[J]. 西安交通大學學報(醫(yī)學版),2007,28(3)∶279-282.

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1671-8194（2013）13-0076-02

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