王彩鳳* 邱燕玲 刁詩(shī)光 蔣 英 李偉賢 馬占忠 劉紹華

（廣東省韶關(guān)市粵北人民醫(yī)院，廣東 韶關(guān) 8101569）

兒童哮喘IL-4、IFN-γ與總IgE關(guān)系的研究

王彩鳳* 邱燕玲 刁詩(shī)光 蔣 英 李偉賢 馬占忠 劉紹華

（廣東省韶關(guān)市粵北人民醫(yī)院，廣東 韶關(guān) 8101569）

目的 考察兒童哮喘 IL-4、IFN-γ 與總 IgE 的相關(guān)性。方法 采用了雙抗體夾心 ELISA 法、免疫比濁法對(duì) 60 例支氣管哮喘兒童 (觀察組 )與 30 例無(wú)氣喘與特異體質(zhì)住院的支氣管炎、支氣管肺炎兒童 (對(duì)照組 )的血清 IL-4、IFN-γ 與總 IgE 含量進(jìn)行測(cè)定并分析。結(jié)果 觀察組IL-4、總 IgE 水平顯著高于對(duì)照組 (P ＜ 0.01)，而 IFN-γ 水平顯著低于對(duì)照組 (P ＜ 0.01)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，直線回歸分析結(jié)果顯示，觀察組 IL-4 與總 IgE 表 現(xiàn)為 正相 關(guān) (r=0.884，P ＜ 0.01)，IFN-γ 與總 IgE 表 現(xiàn)為 負(fù)相 關(guān) (r=0.759，P ＜ 0.01)；對(duì)照組 IL-4 與總 IgE 表現(xiàn)為正相關(guān) (r=0.887，P ＜ 0.01)，IFN-γ 與總 IgE 表現(xiàn)為負(fù)相關(guān) (r=0.741，P ＜ 0.01)。結(jié)論 早期就兒童血清 IL-4、IFN-γ 以及 IgE 水平實(shí)施監(jiān)測(cè)對(duì)防治無(wú)氣喘與特異體質(zhì)的支氣管炎、支氣管肺炎向哮喘發(fā)展具有十分重要的臨床意義，而通過(guò)研發(fā)改善 Th1/Th2平衡的新型免疫調(diào)節(jié)劑是治療兒童哮喘的可靠方法。

支氣管哮喘；IL-4；IFN-γ；IgE；兒童

當(dāng)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為，哮喘的基本臨床病理特征為患者表現(xiàn)有慢性的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性[1]。近些年來(lái)，隨著分子生物學(xué)以及分子免疫學(xué)的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的試驗(yàn)研究和臨床實(shí)踐已基本證明，患者機(jī)體出現(xiàn)免疫紊亂是引發(fā)哮喘的重要誘因，而在Th0分化的過(guò)程中，出現(xiàn)Th1及Th2的失衡則是最關(guān)鍵的免疫異常變化，也有相關(guān)資料顯示，Th1/Th2細(xì)胞在數(shù)量、活化以及功能等方面的比例失衡，包括細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)因子的失衡是促發(fā)哮喘并發(fā)作的直接因素[2]。白細(xì)胞介質(zhì)素-4（IL-4）與r干擾素（IFN-γ）是Th1和Th2細(xì)胞分泌的兩種重要細(xì)胞因子，可在哮喘病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中相互影響或制約，并共同調(diào)節(jié)免疫球蛋白E（IgE）的合成轉(zhuǎn)換，最終可形成以IgE依賴(lài)為主要特征的遲發(fā)型哮喘反應(yīng)[3]。此外，大量臨床資料顯示，多數(shù)普通支氣管肺炎患兒同樣也存在血清總IgE升高的情況，且在愈后有較高幾率出現(xiàn)反復(fù)喘息甚至升級(jí)為支氣管哮喘，因此有學(xué)者認(rèn)為針對(duì)普通支氣管炎采取積極有效的治療也是預(yù)防支氣管哮喘發(fā)生的重要途徑[4]。為進(jìn)一步探討IL-4、IFN-γ與總IgE的關(guān)系，以期為臨床兒童哮喘患者的防治提供新思路與方法，為制訂兒童哮喘防治策略提供理論依據(jù)，本研究分別采用了雙抗體夾心ELISA法、免疫比濁法對(duì)60例支氣管哮喘兒童與30例無(wú)氣喘與特異體質(zhì)住院的支氣管炎、支氣管肺炎兒童的血清IL-4、IFN-γ與總IgE含量進(jìn)行測(cè)定，一并作出分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究中60例支氣管哮喘患兒與30例無(wú)氣喘與特異體質(zhì)住院的支氣管炎、支氣管肺炎患兒均系隨機(jī)選取于2011年1月至2012年9月期間我院于收治的患者，并分別作為觀察組和對(duì)照組。其中，觀察組包括男患兒34例，女患兒26例，年齡2～14歲，平均年齡3歲，本組患兒均符合兒童支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組30例包括男患兒19例，女患兒11例，年齡1～9歲，平均年齡3.5歲，本組患者均符合普通支氣管炎和支氣管肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

有以下情況者均不納入本研究病例：①合并有嚴(yán)重肝腎疾病、傳染疾病、原發(fā)性結(jié)核病、血液系統(tǒng)相關(guān)疾病、免疫性疾病、寄生蟲(chóng)疾病、皮膚疾病以及除毛細(xì)支氣管炎和哮喘意外的其他呼吸系統(tǒng)疾病；②先天支氣管或肺功能發(fā)育不全、胃食道返流造成支氣管存有異物；③在患兒發(fā)病的前兩個(gè)月內(nèi)，有采用糖皮質(zhì)激素以及其他非糖皮質(zhì)激素類(lèi)抗炎藥、白三烯調(diào)節(jié)劑以及抗組胺抗過(guò)敏類(lèi)藥物進(jìn)行相關(guān)治療等。

1.3 方法

1.3.1 血清樣本采集

觀察組與對(duì)照組患兒在入院后24h內(nèi)應(yīng)用采血管各采集2mL靜脈血樣本，將所有樣本在室溫（20～25℃）條件下放置60min后，以4000rpm進(jìn)行離分處理15min，離心完成后取得上層血清分裝于Eppendorf管中，最后將樣本儲(chǔ)存于溫度為-70℃的冰箱中保存作為本次實(shí)驗(yàn)樣本待測(cè)，需要注意的是在樣本保存期間，勿反復(fù)凍融。

1.3.2 血清IL-4、IFN-γ與IgE含量測(cè)定

采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法進(jìn)行血清IL-4與IFN-γ的定量檢測(cè)，應(yīng)用儀器為美國(guó)雷博公司W(wǎng)ellsanMk3酶標(biāo)儀；血清總IgE的測(cè)定采用免疫比濁法測(cè)定，Randx的試劑。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件包處理并用（χ—±s）表示，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，比較以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 觀察組與對(duì)照組IL-4、IFN-γ與總IgE檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組IL-4、總IgE水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），而IFN-γ水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表1。

表1 觀察組與對(duì)照組IL-4、IFN-γ與總IgE檢測(cè)水平比較（χ—±s）

2.2 觀察組與對(duì)照組IL-4、IFN-γ與總IgE的相關(guān)性

采用直線回歸分析結(jié)果顯示，觀察組IL-4與總IgE表現(xiàn)為正相關(guān)（r=0.884，P＜0.01），IFN-γ與總IgE表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)（r=0.759，P＜0.01）；對(duì)照組IL-4與總IgE表現(xiàn)為正相關(guān)（r=0.887，P＜0.01），IFN-γ與總IgE表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)（r=0.741，P＜0.01）。

3 討 論

無(wú)氣喘與特異體質(zhì)住院的支氣管炎、支氣管肺炎是兒科臨床的常見(jiàn)呼吸道疾病，大量研究資料顯示，該疾病多數(shù)情況下是由細(xì)菌和病毒所引發(fā)，且臨床發(fā)現(xiàn)至少有1/5的嬰兒在出生后會(huì)因此類(lèi)細(xì)菌或病毒的感染而發(fā)生喘息性疾病，且很多時(shí)候還會(huì)在治愈后出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的情況，而這當(dāng)中又有16%的患兒會(huì)發(fā)展成為哮喘，可對(duì)患兒的健康構(gòu)成嚴(yán)重的威脅，故在臨床上，深入探討因細(xì)菌和病毒感染而引發(fā)的無(wú)氣喘與特異體質(zhì)住院的支氣管炎、支氣管肺炎與哮喘的關(guān)系愈發(fā)成為備受關(guān)注的熱門(mén)課題，通過(guò)了解并掌握二者之間的關(guān)聯(lián)因素有望為兒童哮喘的防治提供更科學(xué)的依據(jù)[5]。

支氣管哮喘是一種誘發(fā)型慢性氣道炎癥，其誘發(fā)介質(zhì)主要由Eos和MC以及T淋巴細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞所分泌，也就是說(shuō)，支氣管哮喘是基于多種細(xì)胞相互作用的結(jié)果[6]。其中，對(duì)哮喘發(fā)生起著至關(guān)重要作用的物質(zhì)為活化的CD4+T淋巴細(xì)胞以及Eos、MC的聚集和分泌產(chǎn)生的毒性蛋白。CD4+T淋巴細(xì)胞在活化后，可促使多種細(xì)胞因子的分泌，這些細(xì)胞因子通?？筛鶕?jù)其差異性分為T(mén)h1和Th2兩個(gè)亞群。有研究顯示，Th1和Th2兩亞群比例以及功能的失衡形成了哮喘發(fā)作的主要病例機(jī)制，而具體的表現(xiàn)則是Th1細(xì)胞亞群出現(xiàn)功能下降、Th2細(xì)胞亞群出現(xiàn)功能亢進(jìn)的情況[7]。從本研究結(jié)果也可以看出，觀察組患有支氣管哮喘的患兒的血清IL-4水平較對(duì)照組顯著升高（P＜0.01），而IFN-γ水平較對(duì)照組顯著下降（P＜0.01），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示支氣管哮喘患兒血清IL-4的Th2細(xì)胞分泌旺盛，而Th1細(xì)胞則相對(duì)分泌較少，進(jìn)一步佐證了Th1和Th2的不平衡所引發(fā)IL-4與IFN-γ的不平衡可視為導(dǎo)致哮喘發(fā)生的重要因素。與此同時(shí)，在大量存在IL-4的情況下，CD4+T細(xì)胞會(huì)不斷向Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)變，而新生成的Th2細(xì)胞又可繼續(xù)分泌更多的IL-4，經(jīng)過(guò)這般循環(huán)的過(guò)程，血清IL-4水平自然會(huì)持續(xù)升高，由此便可解釋為何支氣管哮喘患兒會(huì)出現(xiàn)IL-4升高的現(xiàn)象。繼而，在IL-4升高的情況下，B細(xì)胞及肥大細(xì)胞的增殖與分化加劇，可促進(jìn)B細(xì)胞分泌IgE抗體和表達(dá)親和力IgE受體，因此IgE水平會(huì)同時(shí)得以提升，亦即IL-4水平與IgE水平表現(xiàn)為正相關(guān)（r=0.884，P＜0.01）。同時(shí)，正是因?yàn)楦咚降腎L-4導(dǎo)致Th2細(xì)胞成為了CD4+T細(xì)胞的主要分化產(chǎn)物，所以Th1細(xì)胞會(huì)相對(duì)偏少，其分泌產(chǎn)物IFN-γ自然也會(huì)隨之減少，而IFN-γ不但具有抑制Th2細(xì)胞形成降低IL-4分泌的作用，同時(shí)也能在很大程度上阻礙IL-4誘導(dǎo)B細(xì)胞合成IgE抗體，故在哮喘發(fā)病的過(guò)程中具有重要的保護(hù)作用[8]。本次研究結(jié)果顯示，在血清IgE水平居高的同時(shí)，IFN-γ水平顯著偏低，二者為負(fù)相關(guān)（r=0.759，P＜0.01），提示IFN-γ水平較低為T(mén)h1細(xì)胞數(shù)量較少所致。回頭再分析無(wú)氣喘與特異體質(zhì)住院的支氣管炎、支氣管肺炎患兒，進(jìn)過(guò)查閱資料，其IL-4與IgE水平均較正常兒童有所增加，IFN-γ較正常兒童有所下降，但增加或下降的程度均不及支氣管哮喘患兒，但與觀察組情況相似，其IgE水平與IL-4呈正相關(guān)（r=0.887，P＜0.01），與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)（r=0.741，P＜0.01）。

綜上所述，細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ在兒童哮喘與普通支氣管炎、支氣管肺炎發(fā)病的過(guò)程中，均分別與IgE水平成正相關(guān)與負(fù)相關(guān)，兩種疾病均存在細(xì)胞因子失衡的情況，具有相似的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制，且普通支氣管炎、支氣管肺炎可當(dāng)作部分支氣管哮喘疾病的首次發(fā)作，早期就兒童血清IL-4、IFN-γ以及IgE水平實(shí)施監(jiān)測(cè)對(duì)防治毛細(xì)支氣管炎向哮喘發(fā)展具有十分重要的臨床意義，而通過(guò)研發(fā)改善Th1/Th2平衡的新型免疫調(diào)節(jié)劑是治療兒童哮喘的可靠方法。

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Asthma in Children IL-4, IFN-γ and Total IgE Relation Research

WANG Cai-feng*, QIU Yan-ling, DIAO Shi-guang, JIANG Ying, LI Wei-xian, MA Zhan-zhong, LIU Shao-hua
(Yuebei People′s Hospital of Shaoguan, Shaoguan 8101569, China)

ObjectiveTo investigate childhood asthma IL-4, IFN-γ and total IgE correlation.MethodUsing double antibody sandwich ELISA assay, immune turbidimetry on 60 cases of bronchial asthma in children ( observation group) and 30 cases of normal bronchial pneumonia in children ( control group) . Serum IL-4, IFN-γ and total IgE concentrations were determined and analyzed.ResultsIn the observation group, IL-4, total IgE levels were significantly higher than that in control group (P＜0.01), and the levels of IFN-γ were significantly lower than those in control group (P＜0.01), difference has statistical significance, linear regression analysis showed that, the observation group IL-4 and total IgE showed positive correlation (r=0.884, P＜0.01), IFN-γ total IgE showed negative correlation (r=0.759, P＜0.01); the control group IL-4 and total IgE showed positive correlation (r=0.887, P＜0.01), IFN-γ and total IgE showed negative correlation (r=0.741, P ＜0.01).ConclusionEarly children's serum IL-4, IFN-γ and IgE level implementation of monitoring on the prevention and treatment of bronchiolitis to asthma development has very important clinical significance, and through the development of improved Th1/Th2 equilibrium model of immune modulators is a reliable method for the treatment of asthma in children.

Bronchial asthma; IL-4; IFN-γ; IgE; Children

R562.2+5

：B

：1671-8194（2013）02-0065-02

廣東省韶關(guān)市醫(yī)藥衛(wèi)生科研計(jì)劃項(xiàng)目（No.Y11008）

*通訊作者：E-mail：isillycati@yahoo.com