費 剛

(吉林長春物制品研究所疫苗三室，吉林 長春 130062)

雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

費 剛

(吉林長春物制品研究所疫苗三室，吉林 長春 130062)

目的 建立雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。方法 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的定量測定法與凝膠限量法兩種方法進(jìn)行干擾實驗。結(jié)果 通過樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，凝膠法：樣品濃度為1.2×10-3mg/mL，使用靈敏度為0，06EU/mL的鱟試劑進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無干擾作用；定量測定：與凝膠法相同的樣品濃度回收率好，無干擾作用。結(jié)論 雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）可以建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。

雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法；干擾作用

雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）在2000年版中國生物制品規(guī)程中執(zhí)行熱原檢查法[1]，2005年版中國藥典三部中規(guī)定執(zhí)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，檢查內(nèi)容為每瓶（1.0 mL）應(yīng)不高于100 EU/劑，2010年版中國藥典三部中規(guī)定執(zhí)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法毒（凝膠限度試驗），檢查內(nèi)容為每瓶（1.0 mL）應(yīng)不高于50 EU/劑。鑒于細(xì)菌內(nèi)素檢查法有快速、準(zhǔn)確、靈敏、經(jīng)濟(jì)適用等特點，本文采用細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢查法和凝膠法兩種方法進(jìn)行實驗，評價2010年版中國藥典中雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的影響[1]，現(xiàn)報道如下。

1 實驗材料與儀器

1.1 鱟試劑（TAL）

1.1.1 凝膠法鱟試劑

批號：0909021，靈敏度：0.25EU/mL；批號：0910014，靈敏度：0.125EU/mL；批號：0907012，靈敏度：0.06EU/mL。來源：湛江博康海洋生物有限公司。

1.1.2 內(nèi)毒素動態(tài)濁度法鱟試劑

批號：0908120，規(guī)格：1.2mL/支，靈敏度：0.06EU/mL。來源：湛江博康海洋生物有限公司。

1.2 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水

批號：0905100，規(guī)格：50mL。來源：湛江博康海洋生物有限公司。

1.3 細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)

批號：931，效價：9000 EU/支；來源：湛江博康海洋生物有限公司。

1.4 樣品（S）

雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）；批號：20091005、20091106、20091107。來源：長春生物制品研究所。

1.5 EDS—細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測儀

來源：湛江博康海洋生物有限公司。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 樣品內(nèi)毒素限值（L）的確定

中國藥典2010年版三部細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中規(guī)定應(yīng)不高于50 EU/劑（50 EU/ mL）。

2.2 樣品的制備

由樣品最小濃度MVC=λ/L，當(dāng)λ為0.25EU/mL、0.125EU/mL、0.06EU/mL時，MVC分別為5×10-3mg /mL、2.5×10-3mg /mL、1.2× 10-3mg /mL。

2.3 鱟試劑靈敏度復(fù)合實驗

結(jié)果符合藥典規(guī)定。

2.4 樣品凝膠法干擾試驗

2.4.1 樣品的初選試驗

結(jié)果符合藥典規(guī)定。樣品的干擾試驗 ：當(dāng)樣品濃度為5×10-3mg /mL時對2 λ內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)，濃度為2.5×10-3mg/mL的溶液，使用靈敏度為0.125EU/mL的鱟試劑進(jìn)行干擾驗證試驗，結(jié)果符合規(guī)定。

2.4.2 取樣品濃度為1.2×10-3mg /mL的溶液，干擾實驗（0.06EU/ mL）的鱟試劑進(jìn)行，結(jié)果表明，該濃度下的樣品已經(jīng)消除對鱟試劑試驗的抑制作用， 光度測定法 取樣品濃度為5×10-3mg /mL、2.5× 10-3mg /mL、1.2×10-3mg /mL的三種溶液進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素定量測定。見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的數(shù)據(jù)

R=-0.9826，從中可以看出，樣品溶液濃度為5×10-3mg /mL，回收率僅為55.9%、59.2%，還有抑制作用，而將濃度降為2.5×10-3mg /mL、1.2×10-3mg /mL時，回收率均上升至92%～119%。結(jié)果表明稀釋倍數(shù)逐漸增加情況下，供試品干擾因素逐漸減少，逐漸排除了鱟試劑與內(nèi)毒素的干擾作用。

3 討 論

3.1 雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查中有一定干擾作用，但其干擾程度可通過對樣品進(jìn)行逐漸的稀釋得以排除，在光度法中樣品稀釋至2.5×10-3mg /mL時干擾作用已消除，當(dāng)樣品稀釋至1.2×10-3mg /mL時在凝膠法中效果明顯。

3.2 凝膠法與定量法測定結(jié)果一致。

3.3 結(jié)論：由上述試驗數(shù)據(jù)表明，雙價腎綜合征出血熱滅活疫苗（地鼠腎細(xì)胞）以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查（＜50 EU/劑）是可行的。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(三部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

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B

1671-8194（2013）01-0076-02