黃永存 于 玲 王艷蘋 張 敏 孫 華 宋俊蘭 邢 建 劉 彤

肺動脈血栓栓塞與凝血-纖溶因子關(guān)系的臨床研究※

黃永存1于 玲2王艷蘋1張 敏1孫 華1宋俊蘭1邢 建1劉 彤1

目的探討肺動脈血栓栓塞患者與組織型纖溶酶原激活物（t-PA）和組織型纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）血漿水平的關(guān)系。方法選取2008年6月～2011年6月間在我院進行住院治療的53例肺動脈血栓栓塞患者，作為觀察組，另外選擇同期健康體檢者57例作為對照組。通過聚合鏈酶式反應(yīng)（PCR）來檢測肺動脈血栓栓塞患者基因型及其多態(tài)性；并通過酶聯(lián)免疫吸附法進行t-PA和PAI-1血漿水平的檢測，比較兩組患者的凝血-纖溶因子水平。結(jié)果通過PCR檢測發(fā)現(xiàn)PTE患者主要有三種PAI-1基因型，主要以4G/4G和4G/5G基因型為主，并且該基因型PAI-1水平顯著高于5G/5G基因型（P＜0.05）；ELISA法檢測顯示觀察組t-PA水平（53.14±18.24）μg/L顯著低于對照組的（70.45 ±20.08）μg/L，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74±18.65）μg/L顯著高于對照組（48.62±15.60）μg/L（t=3.0948，P＜0.05）。結(jié)論肺動脈血栓栓塞患者與健康者相比，顯然具備較低的纖溶狀態(tài)。

肺動脈血栓栓塞；組織型纖溶酶原激活物（t-PA）；組織型纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）；聚合鏈酶式反應(yīng)（PCR）

肺動脈血栓栓塞（PTE）是一種具有高發(fā)病率、高誤診率和漏診率、高病死率的常見疾病。組織型纖溶酶原激活物（Tissue plasminogen activator,t-PA）以及它的抑制物-1（Plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1）對患者機體纖溶系統(tǒng)活性具有重要的調(diào)節(jié)功能。PAI-1血漿水平增加往往與人體心臟、血管等疾病嚴重程度相關(guān)[1-2]。本文對2008年6月～2011年6月間在我院進行住院治療的53例肺動脈血栓患者臨床資料進行研究，探討肺動脈血栓栓塞患者與組織型纖溶酶原激活物（t-PA）和組織型纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）血漿水平的關(guān)系。具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2008年6月～2011年6月間在我院進行住院治療的53例肺動脈血栓患者，作為觀察組，所有患者均符合中華醫(yī)學會呼吸病學分會制定的PTE患者診斷標準[3]，其中男30例，女23例，患者年齡在28～73歲，平均年齡為（52.9±8.6）歲，其中合并深靜脈血栓患者為32例。另外選擇同期健康體檢者57例作為對照組，男33例，女24例，年齡在29～71歲，平均年齡（53.6±9.7）歲。對照組均無靜脈曲張、近期手術(shù)、靜脈置管以及肺動脈血栓家族史等。兩組患者在年齡、性別等方面均無顯著差異，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取和聚合鏈酶式反應(yīng)（Polymerase chain reaction, PCR）抽取53例肺動脈血栓患者5ml外周靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝處理，4℃條件下3000r/ min冷凍離心12min，分離血細胞和血漿（80℃）保存?zhèn)溆谩Ｊ褂梅?氯仿抽提技術(shù)從外周血白細胞中提取基因組DNA。使用PCR儀（TC-98/T/Hca，Bioer Technology）進行PCR，反應(yīng)體系中所涉及的4條引物為：4G引物：5'-GTCTGGACACGTGGGGA-3'；5G引物：5'-GT-CTGGACACGTGGGGG-3'；上游引物：5'-AAGCTTTTAACCATGGTAACCCCTGGT-3'；下游引物：5'-TGCAGCCAGCCACGTGATTGTCTA G-3'。

PCR反應(yīng)過程為，首先進行94℃條件下預(yù)變性5min，進行94℃變性50s，58℃退火50s，72℃延伸1min，連續(xù)進行32個循環(huán)，進行72℃延伸10min后4℃水浴1h。接著進行瓊脂糖凝膠電泳（質(zhì)量分數(shù)為1%瓊脂糖，體積分數(shù)0.1%的溴化乙錠）進行恒壓（80～120V）條件下電泳40～60min。使用紫外燈進行DNA條帶觀察，確定纖溶酶原激活物抑制物-1基因型。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進行t-PA、PAI-1測定將兩組患者外周靜脈血進行上述低溫離心分離的白細胞和血漿細胞，采用ELISA試劑盒進行t-PA、PAI-1的含量水平測定。

1.3 統(tǒng)計學方法所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件統(tǒng)計包進行分析，計量資料以計量資料以均數(shù)±標準差表示，計量資料的組間比較進行t檢驗，在P＜0.05時，差異顯著具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 PTE患者PAI-1基因型分布通過PCR檢測發(fā)現(xiàn)PTE患者主要有三種PAI-1基因型，其中4G/4G患者26例，占總數(shù)的（49.06%），4G/5G基因型為24例，占總數(shù)的（45.28%），5G/5G基因型為3例，占總數(shù)的（5.66%）。

2.2 兩組患者t-PA和PAI-1血漿水平比較經(jīng)過ELISA法檢測兩組患者t-PA和PAI-1血漿水平，其中觀察組t-PA水平（53.14±18.24）μg/L顯著低于對照組，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74 ±18.65）μg/L顯著高于對照組（t=3.0948，P＜0.05），具體數(shù)據(jù)詳見表1。

表1 兩組患者t-PA和PAI-1血漿水平比較[μg/L,(±s)]

表1 兩組患者t-PA和PAI-1血漿水平比較[μg/L,(±s)]

注：#與*分別代表觀察組相交于對照組（P＜0.01）和（P＜0.05）

組別 n t-PA PAI-1觀察組 53 53.14±18.24#58.74±18.65*對照組 57 70.45±20.08 48.62±15.60

2.3PTE患者PAI-1不同基因型與PAI-1水平關(guān)系4G/4G患者26例，PAI-1水平為（64.78±19.78）μg/L；4G/5G基因型為24例，PAI-1水平為（54.75±15.72）μg/L；5G/5G基因型為3例，PAI-1水平為（47.68 ±13.25）μg/L；4G/4G和4G/5G基因型PAI-1水平顯著高于5G/5G基因型（P＜0.05）。

3 討論

PET為來自靜脈系統(tǒng)或右心的血栓阻塞肺動脈或其分支所致的疾病，肺動脈血栓栓塞的臨床以及病理特征主要表現(xiàn)為肺循環(huán)和呼吸功能障礙。肺動脈血栓栓塞患者的栓塞主要有單一部位和多部位的形式出現(xiàn)。臨床病理檢查結(jié)果顯示，單一部位栓塞相對較少，取而代之的以多部位、雙側(cè)性的血栓栓塞為主要形式[4]。肺動脈右側(cè)以及下肺葉比較容易發(fā)生栓塞，栓塞發(fā)生后得不到及時治療可局部繼發(fā)形成血栓，最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生。肺動脈及其分支在遭受栓子阻塞情況上升到一定程度后，產(chǎn)生的機械阻塞作用聯(lián)合神經(jīng)體液因素、低氧情況致使患者肺動脈收縮，肺循環(huán)阻力以及肺動脈高壓提高；右心室后負荷增高、右心室壁張力增高嚴重時導(dǎo)致急性肺源性心臟病形成，右心室擴大則會導(dǎo)致右心功能不全，最終因為回心血量不足形成靜脈系統(tǒng)瘀血；右心擴大致室間隔左移，使左心室功能受損，導(dǎo)致心排出量下降，進而可引起體循環(huán)低血壓或休克[5]。

神經(jīng)-體液及循環(huán)內(nèi)分泌激素在調(diào)節(jié)PTE的病理生理過程中起到非常重要的作用，組織型纖溶酶原激活物（t-PA）就是一種纖溶酶原生理性激活劑[6]，在血栓纖溶過程中起到關(guān)鍵性的啟動作用。而t-PA的作用要受到t-PA抑制物PAI的控制與調(diào)節(jié)，PAI活性較高或者含量過高則是主要導(dǎo)致血栓形成的原因之一，若出現(xiàn)活性或水平過低則容易導(dǎo)致出血。PAI-1則是PAI中最重要的一種t-PA抑制物，PAI-1對t-PA抑制作用約為整個血漿中PAI抑制作用的六成[7]。在對PAI-1血漿水平與心、肺疾病的相關(guān)關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，PAI-1的血漿水平增加與很多心、肺疾病嚴重程度相關(guān)，并且發(fā)現(xiàn)PAI-1也可以幫助PTE的診斷[8]。同時有研究證實PTE患者合并DVT存在纖溶活性失調(diào)，PAI-1水平性對于正常水平出現(xiàn)升高[9]。文中觀察組53例肺動脈血栓患者中，32例并深靜脈血栓，觀察組t-PA水平（53.14±18.24）μg/L顯著低于對照組的（70.45±20.08）μg/L，（t=4.7207，P＜0.01）；而PAI-1水平（58.74±18.65）μg/L顯著高于對照組48.62±15.60）μg/L（t=3.0948，P＜0.05）。在對肺動脈血栓患者PAI-1基因型研究發(fā)現(xiàn)，患者主要以4G/4G基因型、4G/5G基因型為主。同時發(fā)現(xiàn)4G/4G和4G/5G基因型PAI-1水平顯著高于5G/5G基因型（P＜0.05）。

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R563.5

A

1673-5846(2013)04-0308-03

1牡丹江醫(yī)學院紅旗醫(yī)院一分院檢驗科，黑龍江牡丹江 157000

2牡丹江市第二人民醫(yī)院腦科醫(yī)院，黑龍江牡丹江 157000

黑龍江省教育廳科學技術(shù)研究項目，項目編號：12521587