江志杰 高春

注射劑是當代常用的劑型之一，它在治療常見病、多發(fā)病及急重癥的搶救上發(fā)揮了獨特的作用［1］。而中藥注射劑作為中藥制劑的新劑型，已廣泛應用于臨床。舒血寧注射液系銀杏葉經(jīng)提取制成的滅菌水溶液，其有效成分主要是黃酮苷類和萜類內酯活性物質，臨床用于治療心腦血管疾患［2］。穿心蓮注射液是由穿心蓮藥材經(jīng)加工制成的注射液。主要用于咽喉腫痛，肺熱咳嗽，熱痢，亦可用于上呼道感染，細菌性痢疾等［3］。銀杏葉提取物注射液屬心腦血管擴張藥，主要用于腦部、周邊和冠狀血流循環(huán)障礙。而中藥注射劑的不良事件的發(fā)生，引起大家的強烈關注，比如雙黃連事件、刺五加事件等，但中藥注射劑不良反應的主要原因有兩方面，首先是藥物本身問題，質量不合要求，是發(fā)生嚴重不良反應的根本原因［4］。本實驗三個品種劑型均屬注射劑類，為確保臨床用藥安全，《中國藥典(一部)》2010年版［5］規(guī)定需進行無菌檢查，為確保無菌檢查方法的科學性和檢驗結果的準確可靠，藥典明確規(guī)定對所用的無菌檢查法必須經(jīng)過驗證，才能確保檢驗結果的準確可靠［6］。本實驗旨在按藥典要求對舒血寧注射液、穿心蓮注射液和銀杏葉提取物注射液進行無菌方法學驗證，按建立無菌檢查方法，對其進行檢驗，考察市場上三種中藥注射劑能否達到無菌要求。

1 試驗材料

1.1 驗證菌種 金黃色葡萄球菌［CMCC(B)26 003］、大腸埃希菌［CMCC(B)44 102］、枯草芽孢桿菌［CMCC(B)63 501］、生孢梭菌［CMCC(B)64 941］、白色念珠菌［CMCC(F)98 001］、黑曲霉［CMCC(F)98 003］均購自中國食品藥品檢定研究院。

1.2 培養(yǎng)基及沖洗液 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，改良馬丁培養(yǎng)基，營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，0.1%蛋白胨水溶液，均按照《中國藥典》2010年版二部附錄ⅪH無菌檢查法項下要求配制。

1.3 樣品 本試驗所用樣品，舒血寧注射液來自8個生產(chǎn)企業(yè)159批次，穿心蓮注射液來自5個生產(chǎn)企業(yè)107批次，銀杏葉提取物注射液來自1個生產(chǎn)企業(yè)158批次，見表1。

表1 三種中藥注射劑的品名、生產(chǎn)廠家、規(guī)格和批次

1.4 儀器和濾器 HTY無菌隔離器、HTY22000A集菌儀和一次性使用的全封閉三聯(lián)集菌培養(yǎng)器(杭州泰林生物技術設備有限公司)，生化培養(yǎng)箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)，生物安全柜(力康生物醫(yī)療科技控股有限公司)。

2 方法與結果

2.1 菌液制備 按照《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅺ H無菌檢查法［5］項下對照菌液配制，最終制備的菌液濃度每1 ml含10～100個菌(cfu)，同時進行平板計數(shù)，計數(shù)結果見表2。

表2 菌落計數(shù)結果(cfu/ml)

2.2 樣品的取樣量 3種中藥注射劑均為液體制劑，規(guī)格為2 ml或5 ml，根據(jù)2010年版中國藥典無菌檢查法的有關要求，一次試驗中一組三聯(lián)集菌培養(yǎng)器(其中1個濾筒檢查細菌、1個濾筒檢查真菌、另1個濾筒作為陽性對照)需要的樣品量最少應為30支。過濾樣品溶液前，先經(jīng)少量0.1%蛋白胨水溶液潤濕濾器、排空，再進行樣品溶液的過濾。

2.3 中藥制劑的抑菌性的初步考察 采用直接接種法，最少的培養(yǎng)基的量(硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基15 ml和改良馬丁培養(yǎng)基10 ml)，樣品接種量為 1 ml，加入陽性菌(10～100cfu)，培養(yǎng)16 h后，結果發(fā)現(xiàn)，與陽性菌對照(用0.1%蛋白胨水溶液代替樣品)相比，舒血寧注射液的金黃色葡萄球菌長的菌柱數(shù)或是其長度要差很多，其余試驗菌株相差不明顯，說明舒血寧注射液對金黃色葡萄球菌有微弱的抑菌作用，而穿心蓮注射液和銀杏葉提取物注射液的所有菌株與陽性對照組相比幾乎沒有差異，說明它們對試驗菌株沒有抑菌作用或抑菌作用可以忽略不計，但它們本身帶一定的顏色，結合藥典附錄要求首選薄膜過濾法，用0.1%無菌蛋白胨水溶液沖洗1次，去除樣品本身的顏色或可能存在的抑菌作用。

2.4 中藥注射劑的無菌檢查方法學驗證 采用薄膜過濾法，取一次性全封閉集菌培養(yǎng)器(三聯(lián))，先用沖洗液(0.1%無菌蛋白胨水溶液)潤濕濾膜，取規(guī)定量的供試液全部通過3個濾器，濾干后用沖洗液沖洗一次，每次每膜100 ml，過濾后2個濾筒加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基各100 ml，另1個濾筒加改良馬丁培養(yǎng)基100 ml，平行兩份，分別加入上述6種驗證菌株(10～100cfu)，作為試驗組;另取一裝有同體積相同培養(yǎng)基的濾筒，加入等量試驗菌，作為陽性對照組，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的濾筒置33℃培養(yǎng)，改良馬丁培養(yǎng)基置25℃培養(yǎng)，觀察驗證菌生長情況，結果見表3。

表3 中藥注射劑采用薄膜過濾法的驗證結果

由表3中的結果可以發(fā)現(xiàn)，樣品本身和陰性對照組均無菌生長，試驗組各濾筒中試驗菌與陽性對照組比較均生長良好，說明三種中藥注射劑的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計，上述檢查方法可行。

2.5 三種中藥注射劑的無菌檢驗結果 根據(jù)藥典要求，中藥注射劑必須達到無菌要求，采用驗證后的無菌檢查方法，對表1中所有來自8個生產(chǎn)企業(yè)159批次的舒血寧注射液，來自5個生產(chǎn)企業(yè)107批次的穿心蓮注射液和來自1個生產(chǎn)企業(yè)158批次的銀杏葉提取物注射液進行無菌檢查試驗，結果供試品筒均澄清，陽性對照均生長良好，判定中藥注射劑無菌檢查均符合規(guī)定。

3 討論

3.1 三種中藥注射劑無菌檢查方法的確定 取供試品，用封閉式薄膜過濾器全部過濾，以0.1%無菌蛋白胨水溶液為沖洗液，沖洗1次，每筒100 ml，以金黃色葡萄球菌作為陽性對照菌，依法檢查(中國藥典2010年版一部附錄ⅩⅢB薄膜過濾法)。

3.2 試驗小結，無菌試驗必須注重試驗操作細節(jié)，比如試驗過程中不能讓針頭在外面暴露的時間太長，也不能讓樣品本身接觸安瓿瓶斷截面，容易導致人為污染等;檢驗結果顯示，所有來自14個生產(chǎn)企業(yè)424批次的中藥注射劑無菌檢查結果均符合規(guī)定。

［1］BAI X J.An objective view of traditional Chinese medicine injection.Journal of Traditional Chinese medicine(中醫(yī)雜志)，2009，50(9):842-843.

［2］封淑華，馮麗，趙志軍，等.舒血寧注射液生產(chǎn)工藝探討.中國中藥雜志，2010，35(14):1909-1910.

［3］袁夢哲，李紹峰.穿心蓮注射液含量測定方法的改進.數(shù)理醫(yī)藥學雜志，2010，23(5):617-618.

［4］李貽奎，張金艷.中藥注射劑的改進與提高.中國中藥雜志，2011，36(14):1905-1909.

［5］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［6］趙亞麗，吳 英.雙黃連注射液無菌檢查的方法驗證.黑龍江醫(yī)藥，2011，24(1):31-32.