曹賀濤

【摘 要】隨著臨床免疫學(xué)不斷發(fā)展，ELISA法比較靈敏，不需特殊設(shè)備，可以定性分析，所以應(yīng)用發(fā)展迅速。但在實(shí)際工作中，可能會(huì)因操作不當(dāng)而出現(xiàn)一些異常指標(biāo)?？傊?，一點(diǎn)小小的疏忽、失誤可能造成檢驗(yàn)結(jié)果的偏差，給患者及家屬帶來(lái)物質(zhì)精神上的損失，給臨床確診帶來(lái)麻煩。

【關(guān)鍵詞】ELISA；乙肝兩對(duì)半；影響因素；結(jié)果分析

ELISA法廣泛用于乙肝兩對(duì)半檢測(cè)，但ELISA測(cè)定中影響因素較多，有些因素會(huì)導(dǎo)致結(jié)果假陽(yáng)性或假陰性，本文就ELISA測(cè)定乙肝兩對(duì)半的影響因素及結(jié)果分析與對(duì)策討論報(bào)告如下[ 1 ]：

1 樣本采集與處理的影響

1.1 血樣標(biāo)本最好使用新鮮血清，必須嚴(yán)格進(jìn)行標(biāo)本查對(duì)制度。若無(wú)法當(dāng)天檢測(cè)，須將血清樣本放入2℃～8℃冰箱保存，最長(zhǎng)不要超過7天；若要長(zhǎng)期保存的血清樣本須放入-20℃冰箱冷凍保存，并且不可反復(fù)凍融，否則會(huì)直接影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.2 標(biāo)本凝固不全不可使用，正常血液采集后1/2～2h開始凝固，18～24h血塊完全收縮。在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊或附著在酶標(biāo)板孔壁內(nèi)使酶標(biāo)記物不易洗掉，易造成假陽(yáng)（陰）性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>

1.3 標(biāo)本溶血及混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，可出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽(yáng)性，嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。

2 試劑的影響

乙肝兩對(duì)半試劑廠家較多；不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定差別，使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽(yáng)性或假陰性。因此，選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。

3 操作技術(shù)的影響

3.1 選擇準(zhǔn)確的加樣器及一次性吸嘴加樣，將血清加在板孔底部，不要產(chǎn)生氣泡。酶結(jié)合物使用前應(yīng)搖勻并棄去1～2滴后垂直滴入，用振蕩器震蕩使其充分混勻，孵育時(shí)一定要封板防止樣本和酶結(jié)合物蒸發(fā)，且嚴(yán)格孵育溫度與時(shí)間以免影響結(jié)果，酶標(biāo)板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異；盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。

3.2 冼滌是ELISA操作的重要環(huán)節(jié)，洗板時(shí)：①洗板不徹底，未除去實(shí)驗(yàn)中沒參與反應(yīng)的酶類物質(zhì)，造成HBsAg、HBsAb和HBeAg的假陽(yáng)性；或HBeAb和HBcAb的假陰性。②加注洗滌液時(shí)沖力過 ；將包被在固相載體表面的成分脫落導(dǎo)致HBsAg、 HBsAb、HBeAg假陰性；或HBeAb和HBcAb的假陽(yáng)性。

4 干擾物質(zhì)的影響

有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果；常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig （s）抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。如RF因子可與標(biāo)記二抗的FC段法結(jié)合造成假陽(yáng)性，補(bǔ)體從C1q活化，使一抗和酶標(biāo)二抗的抗體分子發(fā)生變構(gòu)，F(xiàn)c的C1q分子結(jié)合點(diǎn)暴露出來(lái)，則補(bǔ)體C1q可將二者連接起來(lái)造成假陽(yáng)性，采用56℃30分鐘滅活補(bǔ)體可降低假陽(yáng)性率，高濃度的AFP（如孕婦），在儲(chǔ)存過程中可能形成二聚體會(huì)導(dǎo)致本底過深影響檢測(cè)結(jié)果。

5 藥物的影響

5.1 高效價(jià)的乙肝免疫球蛋白會(huì)與HBsAg形成復(fù)合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽(yáng)性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測(cè)會(huì)呈陰性反應(yīng)，導(dǎo)致乙肝兩對(duì)半少見模式的出現(xiàn)，如我們常遇到乙肝大三陽(yáng)的孕婦，為阻斷乙肝母嬰垂直傳播時(shí)，在孕第8、9、10月常規(guī)注射200mg乙肝免疫球蛋白，不僅影響孕婦HBsAg的檢出；而且其所生產(chǎn)的生新兒也常出現(xiàn)HBsAg陰性，HBeAg 陽(yáng)性和HBcAb陽(yáng)性等少見模式、可能是乙肝免疫球蛋白屬IgG抗體能通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)與胎兒血液中的HBsAg結(jié)合形成復(fù)合物；則新生兒HBsAg檢測(cè)呈陰性；用0.5M的鹽酸處理標(biāo)本1小時(shí)可提高出率[2]。

5.2 為預(yù)防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗后的1～2周內(nèi)，血清中可檢出HBsAg成份，形成一過性HBsAg陽(yáng)性，這可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.，有方法能夠把它檢出；如電化學(xué)發(fā)光法，建議接種乙肝疫苗后1個(gè)月內(nèi)不應(yīng)作HBsAg檢測(cè)?？傊腋蝺蓪?duì)半檢測(cè)必須排除各種影響因素的干擾才能為臨床提供正確可靠的檢測(cè)結(jié)果。

總之，一點(diǎn)小小的疏忽、失誤可能造成檢驗(yàn)結(jié)果的相悖，給患者及家屬帶來(lái)物質(zhì)和精神上的損失，給臨床確診帶來(lái)麻煩。因此，作為檢驗(yàn)工作人員，工作中要盡量減少失誤，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，并及時(shí)總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，提高我們的檢驗(yàn)工作水平，為臨床提供可靠的診斷依據(jù)和結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1]趙長(zhǎng)春，王庭檢. 臨床免疫檢驗(yàn)學(xué)[M].天津科學(xué)技術(shù)出版社，2001：58-82.