李紅艷　王道坤　段永強(qiáng)

【摘要】 目的 探討抑郁狀態(tài)對實(shí)驗(yàn)大鼠胃潰瘍愈合質(zhì)量及EGF、EGFR的影響及作用機(jī)制。方法 除空白對照組大鼠外，剩余動(dòng)物于乙酸誘導(dǎo)胃潰瘍模型成功后，隨機(jī)分為模型對照組及抑郁狀態(tài)組；給予抑郁狀態(tài)組大鼠慢性不可預(yù)見性應(yīng)激刺激21d，空白對照組及模型對照大鼠正常飲水，飲食，不予任何刺激。21d后殺檢，肉眼及鏡下觀察潰瘍愈合情況，檢測血清、胃組織EGF及EGFR的含量。結(jié)果 鏡下觀察空白組大鼠胃黏膜完好無損，模型對照組大鼠胃潰瘍愈合情況較抑郁狀態(tài)組良好。模型對照組大鼠EGF及EGFR的含量均高于抑郁正常組（P<0.05）。結(jié)論 抑郁狀態(tài)可降低胃潰瘍愈合質(zhì)量，其作用機(jī)制與抑制EGF及EGFR作為保護(hù)性因子的表達(dá)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 抑郁狀態(tài)；胃潰瘍；表皮生長因子；表皮生長因子受體

胃潰瘍（gastric ulcer，GU）是內(nèi)科常見病，多發(fā)病。目前潰瘍病的近期愈合率顯著提高，但復(fù)發(fā)率仍居高不下。潰瘍愈合高質(zhì)量組與低質(zhì)量組，1年潰瘍復(fù)發(fā)率分別為4.5%和75%^[1]。因此，提高潰瘍愈合質(zhì)量，對于緩解患者痛苦，降低潰瘍復(fù)發(fā)率等都具有十分重要的意義。抑郁癥是一種以顯著而持久的心境低落為主要臨床表現(xiàn)的精神疾病，給患者帶來極大的痛苦和心理傷害^[2]。隨著生活節(jié)奏的日益緊張，社會(huì)工作競爭的日益增加，抑郁癥的患病率已在逐年上升^[3]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為胃潰瘍形成后，如果不良情緒刺激仍未解除，病情會(huì)進(jìn)一步加重^[4]。本實(shí)驗(yàn)通過觀察大鼠胃潰瘍愈合情況及檢測胃組織中表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）及表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）水平，欲探討抑郁狀態(tài)對實(shí)驗(yàn)大鼠胃潰瘍愈合質(zhì)量的影響機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)Wistar大鼠52只，雌雄各半，體重（200±30）g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（甘）2011-0001-0001166。

1.2 試劑與儀器 冰乙酸，分析純，w/%≥99.5，天津市百世化工有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20120618；水合氯醛，分析純AR，天津歐博凱化工有效公司產(chǎn)品，批號(hào)20120115；EGF試劑盒，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20120601A。ES-1000E電子天平，長沙湘平科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)；TGL-13低溫電動(dòng)離心機(jī)，金壇市富華儀器有限公司產(chǎn)品；HY-4氣浴恒溫振蕩器，金壇市富華儀器有限公司產(chǎn)品；Bio-rad 680酶標(biāo)儀，美國BIO-RAO產(chǎn)品；Reiehert-Jung 820-Ⅱ型超薄切片機(jī)，德國Reiehert-Jung公司產(chǎn)品；OYLMPUS生物顯微鏡，日本OLYMPUS光學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 胃潰瘍模型的建立 冰乙酸誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍模型的制備。隨機(jī)數(shù)字表法分出10只大鼠作為空白對照組動(dòng)物，其余42只大鼠參照文獻(xiàn)^[5]的造模方法。劍突下0.5 cm縱向切開腹壁約2 cm，自肝后找到胃，暴露胃體于外并在胃前壁體竇交界處靠胃竇側(cè)漿膜面，用微量注射器注入0.03 mL冰乙酸，然后將胃還納入體內(nèi)，逐層縫合，碘伏消毒皮膚創(chuàng)口。

1.4 動(dòng)物分組 確定胃潰瘍模型制備成功后，按隨機(jī)數(shù)字表法將剩余的40只大鼠分為模型對照組及抑郁狀態(tài)組2組，每組20只，均標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.5 抑郁狀態(tài)模型的建立 采用Willner^[6]不可預(yù)測性長期溫和應(yīng)激刺激造模方法并略加改進(jìn)，抑郁狀態(tài)組大鼠接受21 d應(yīng)激刺激，包括晝夜顛倒、禁食24 h、禁水24 h、4℃冷水強(qiáng)迫游泳5 min、40℃高溫環(huán)境1 h、倒立束縛2 min、夾尾1 min、勻速震蕩5 min、墊料潮濕24 h、單籠飼養(yǎng)24 h，以上10種不同的應(yīng)激因子順序隨機(jī)，每天抽取2-3種刺激，同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)，使動(dòng)物無法預(yù)料刺激的發(fā)生。空白對照組及模型對照大鼠正常飲水，飲食，不予任何刺激。

1.6 標(biāo)本采集與處理方法 在抑郁狀態(tài)組大鼠末次應(yīng)激刺激后，所有大鼠禁食不禁水24 h，腹主動(dòng)脈采血5 mL于真空管內(nèi)，傾斜放置30 min后，放入低速離心機(jī)，以3000 r/min，離心30 min，取上清2 mL，入-20 ℃冷藏；剝離胃，結(jié)扎幽門，于十二指腸和食管處結(jié)扎胃，100 g/L 甲醛10 mL至賁門注入胃腔，固定30 min；以潰瘍病灶或潰瘍瘢痕平行于胃長軸方向的最長徑為中心取材，100 g/L 甲醛固定，備用制作病理切片。于潰瘍周圍取一塊組織放入生理鹽水中沖洗，吸干，用電子天平稱取0.3-0.4 g，加入9倍量的生理鹽水，低溫快速勻漿制成100 g/L 的組織勻漿液，將勻漿液移入離心管中，3000 r/min，離心30 min，取上清液，-20℃冷藏保存。

1.7 檢測指標(biāo) 觀察大鼠一般情況；肉眼及鏡下觀察潰瘍愈合情況，采用ELISA法檢測血清及胃組織EGF含量及免疫組化SP法檢測胃組織EGFR的含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以Mean士Std.Error表示，SPSS17.0軟件進(jìn)行One-way ANOVA的樣本均數(shù)多重比較的F檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況對比 除空白對照組大鼠外，其余大鼠于造模后均出現(xiàn)精神差，主動(dòng)活動(dòng)減少，進(jìn)食減少，被毛無澤，糞便干溏不調(diào)等。以上情況均于造模后第5天開始逐漸好轉(zhuǎn)。

2.2 大體標(biāo)本觀察 空白對照組：未見明顯胃腸脹氣，胃內(nèi)基本無殘留食物；胃黏膜呈淡紅色，皺襞連續(xù)，光整無破壞。模型對照組 腹腔可見偶明顯胃腸脹氣，較抑郁狀態(tài)組為輕；漿膜面少許粘連；胃內(nèi)潴留物量約占1/5胃容量、有輕度異味；胃竇區(qū)黏膜皺襞欠完整，周圍可見糜爛點(diǎn)及小范圍瘢痕收縮，部分可見潰瘍周圍黏膜水腫。抑郁狀態(tài)組：腹腔可見明顯胃腸脹氣，范圍至回腸末端，漿膜面有明顯組織粘連；胃內(nèi)潴留物量約占3/5胃容量、有明顯異味；胃竇處黏膜均有一圓形或橢圓形潰瘍，潰瘍中心蒼白，表面覆污濁腐苔，周圍明顯充血水腫。

2.3 光學(xué)顯微鏡下觀察 空白對照組：胃竇黏膜黏膜層結(jié)構(gòu)完整，腺體排列整齊，黏膜下層未見炎性細(xì)胞浸潤，漿膜層完整。抑郁狀態(tài)組：潰瘍造模處黏膜缺損，部分已及肌層，腺體正常結(jié)構(gòu)消失；表層可見大量壞死組織；潰瘍邊緣黏膜炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重；黏膜下層可見新生肉芽組織，新生血管數(shù)量較少。模型對照組：潰瘍病灶處可見新生胃上皮細(xì)胞，但排列欠整齊，病灶周圍偶見少量壞死組織；黏膜全層有少量炎性浸潤；新生肉芽組織較多。

2.4 ELISA法檢測血清及胃組織EGF的結(jié)果 MG大鼠中血清及胃組織中EGF含量均較BG、DG增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.5 免疫組化SP法檢測胃組織EGFR的含量 高倍鏡下可見EGFR陽性標(biāo)本，表現(xiàn)為棕黃色顆粒。主要表達(dá)在黏膜層與黏膜下層中。

空白對照組大鼠腺細(xì)胞間散在少量的棕黃色顆粒。抑郁狀態(tài)組大鼠新生上皮細(xì)胞及肉芽組織中僅見極少量棕黃色顆粒。模型對照組大鼠新生上皮細(xì)胞及肉芽組織中可見較多的棕黃色顆粒。

3 討 論

古代中醫(yī)文獻(xiàn)中并無“胃潰瘍”的記載，據(jù)其臨床癥狀，多屬中醫(yī)學(xué)“胃脘痛”范疇，亦與“痞滿”“吞酸”等病證相關(guān)。對本病病因的認(rèn)識(shí)，歷代文獻(xiàn)多有記載，大體可歸納為4類：六淫傷中、飲食不節(jié)、情志內(nèi)傷及脾胃虛弱。如《黃帝內(nèi)經(jīng)素問·舉痛論篇第三十九》寒邪致病的特點(diǎn)^[7]：“寒氣客于胃腸之間，膜原之下，血不得散，小絡(luò)急引故痛”。如李東垣在《東垣試效方·心胃及腹中諸痛門》^[8]中指出飲食不節(jié)的病因：“夫心胃痛及腹中諸痛，皆因勞役過甚，飲食失節(jié)，中氣不足，寒邪乘虛而入客之，故卒然而作大痛”。對胃脘痛的辨證治療，首位醫(yī)家當(dāng)推漢代張仲景。以“按之不痛為虛，痛者為實(shí)”的原則辨其虛實(shí)，這兩大辨證原則均為后世治療本病的準(zhǔn)繩。其創(chuàng)制的許多方劑如黃芪建中湯，小建中湯，芍藥甘草湯等皆為后世治療胃脘痛的常用效方。

抑郁癥屬現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中精神病的范疇，在中醫(yī)古代文獻(xiàn)中無本病名記載。根據(jù)抑郁癥臨床表現(xiàn)，一般將其歸于“郁證”“臟躁”“百合病” “不寐”等病的范疇中。對于本病病因的認(rèn)識(shí)，在《黃帝內(nèi)經(jīng)素問·疏五過論》^[7]中將其總結(jié)為：“離絕菀結(jié)，憂恐悲怒，五臟空虛，血?dú)怆x守”，認(rèn)為本病是因?yàn)榍橹疽蛩卮碳さ那闆r下，五臟不養(yǎng)，氣血虧虛離散而致。情志病發(fā)生后可影響其他疾病的發(fā)生或預(yù)后，如唐容川在《血證論·臟腑病機(jī)論》^[9]中指出：“木之性主乎疏泄，食氣之胃，全賴肝木之氣以疏泄之，則水谷乃化。設(shè)肝木不能疏泄水谷，滲泄中滿之證在所不免”，他認(rèn)為肝氣郁結(jié)，就會(huì)影響脾胃功能，出現(xiàn)中滿不消、腹脹、泄瀉等病證。這說明抑郁狀態(tài)的持續(xù)存在會(huì)影響胃腸道正常生理功能，而產(chǎn)生一系列疾病或加重已有的胃腸道癥狀。

EGF具有促進(jìn)上皮增殖，組織修復(fù)和細(xì)胞保護(hù)作用，在保護(hù)胃黏膜免受損傷因子破壞，維持胃腸黏膜完整性方面起著非常重要的作用^[10]。EGF都要通過結(jié)合其受體EGFR發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)證明，抑郁狀態(tài)下的大鼠血清及胃組織EGF的含量、EGFR表達(dá)減少，明顯低于模型對照組；胃潰瘍面積明顯大于模型對照組。EGF作為保護(hù)性因子，結(jié)合其受體EGFR可加快潰瘍愈合速度，提高組織修復(fù)能力，保證潰瘍愈合質(zhì)量。在胃黏膜經(jīng)冰乙酸燒灼形成潰瘍后，無應(yīng)激刺激的大鼠機(jī)體內(nèi)EGF及EGFR明顯增高，從而加速潰瘍愈合速度、提高潰瘍愈合質(zhì)量。抑郁狀態(tài)可降低乙酸性大鼠胃潰瘍愈合質(zhì)量，減慢胃潰瘍愈合時(shí)間。

本研究突出中醫(yī)學(xué)中的“整體觀念”和“情志致病”的原始創(chuàng)新，為臨床認(rèn)識(shí)和治療疾病提供一定的實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)探討其作用機(jī)制并為其治療胃潰瘍提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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