李 崢 成 軍 陳 輝

HER-2、GH/GHR在胃癌患者血清與腫瘤組織中的表達及其在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用

李 崢 成 軍 陳 輝

目的探討人表皮生長因子受體(HER-2)、生長激素(GH)/生長激素受體(GHR)在胃癌患者血清與腫瘤組織中的表達及其在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法收集62例胃癌患者的血標本、術(shù)后癌組織及癌旁組織，同時收集同期50例健康者的血標本，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中HER-2、GH的表達，采用免疫組化(IHC)法檢測癌組織及癌旁組織中HER-2、GHR的表達。結(jié)果HER-2、GH在胃癌患者血清中的陽性表達率均明顯高于健康者(P<0.05)；HER-2在胃癌患者癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織，而GHR陽性表達率明顯低于癌旁組織(P<0.05)。HER-2與GH在胃癌患者血清中的表達呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，在胃癌患者癌組織中的表達亦呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。GH在胃癌患者血清中的表達陽性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系(P<0.05)；HER-2在胃癌患者癌組織中的陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期有一定的關(guān)系(P<0.05)，而GHR與分化程度有一定的關(guān)系(P<0.05)。結(jié)論HER-2與GH/GHR在胃癌患者血清與腫瘤組織中的表達存在緊密聯(lián)系，可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起著協(xié)同作用。

HER-2；GH/GHR；胃癌；臨床病理特征

胃癌(gastric cancer，GC)是臨床十分常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，在我國的患病率與病死率均很高，好發(fā)于50歲以上人群及男性。手術(shù)輔以化放療是治療胃癌的主要手段，而對進展期胃癌患者而言，多數(shù)已喪失了最佳的治療時機，主要只能通過傳統(tǒng)化放療及姑息手術(shù)進行治療，但總體效果不佳，轉(zhuǎn)移與復發(fā)的可能性很高，5年生存率低至20%～30%[1]。因此，目前對胃癌的研究已成為消化內(nèi)科，腫瘤科，普外科臨床醫(yī)生的關(guān)注熱點。胃癌易侵襲周圍組織器官，早期便可能出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移，確切病因尚不完全清楚。胃癌早期缺乏特異性的臨床表現(xiàn)，故容易被患者與醫(yī)生忽視，導致很多患者在確診時已進入中晚期，存在周圍組織器官浸潤、遠處轉(zhuǎn)移等危象。傳統(tǒng)胃鏡檢查不能作為普查手段，且無法滿足臨床分期評估的要求。超聲、螺旋CT及MRI等技術(shù)雖可將胃癌的臨床分期提高到90%以上[2]，但在診斷早期胃癌方面仍存在一定的局限。血清腫瘤標志物CEA對早期胃癌也無法完全體現(xiàn)出其臨床價值，報道稱其敏感性只有22%[3]。近年的研究發(fā)現(xiàn)，胃癌的發(fā)生于發(fā)展與人表皮生長因子受體(human epidermal growth factor receptor2,HER-2)、生長激素(growth hormone,GH)及生長激素受體(growth hormone receptor,GHR)等多種因子均存在一定的關(guān)系，但目前有關(guān)此方面的研究尚不多。為此，本研究分別比較了胃癌患者與健康者的血清中、癌組織及癌旁組織中HER-2、GH/GHR的表達情況，以為胃癌的早期診斷與治療及監(jiān)測復發(fā)與預后提供參考，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

本研究為我院消化內(nèi)科，普外科與腫瘤科一起聯(lián)合開展，選擇2014年3月至2016年7月收治并確診62例胃癌患者，排除伴其它惡性腫瘤及臨床資料不全者。其中男性36例，女性26例；年齡35～71歲，平均(63.9±6.1)歲；均為腺癌，分化程度：低分化33例，中分化22例，高分化7例；腫瘤部位：賁門胃底37例，胃體13例，胃竇12例；腫瘤大?。?5 cm 29例，≥5 cm 33例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無20例，有42例；TNM 分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期31例，Ⅳ期 14例。同時選擇同期50例健康者，男性29例，女性21例；年齡29～65歲，平均(53.3±4.3)歲。

1.2 標本采集

胃癌患者術(shù)前采集晨空腹肘靜脈血4 mL，離心處理取血清，儲備于醫(yī)用冰箱中待檢；術(shù)中分別切取癌組織及癌旁組織(癌組織附近5 cm外，無腫瘤細胞浸潤)。健康者于體檢當日抽取晨空腹肘靜脈血4 mL，獲取血清待檢。

1.2.1 試劑與方法 HER-2/neu ECD ELISA試劑盒(安徽安科生物股份有限公司)、人生長激素ELISA試劑盒(杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司)、HER-2單克隆兔抗試劑盒(上海恒遠生物科技有限公司)、鼠抗人GHR單克隆抗體試劑盒(上海恒遠生物科技有限公司)。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中HER-2、GH的表達，采用免疫組化(IHC)法檢測癌組織及癌旁組織中HER-2、GHR的表達，按試劑盒進行操作。

1.2.2 結(jié)果判斷[4]血清中陽性表達參考范圍：HER-2≥15 μg/L；GH≥7.5 μg/L。組織中陽性表達判斷：根據(jù)切片著色的強度與范圍計算陽性細胞的百分比。HER-2分布于細胞膜，將5% 以上的細胞膜被染成棕黃色，染色連續(xù)并環(huán)繞整個細胞膜判斷為陽性；GHR主要分布于細胞質(zhì)，在細胞膜與細胞核中也可見，將切片染色細胞計數(shù)超過25%判斷為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 HER-2、GH/GHR在血清與組織中的表達

HER-2、GH在胃癌患者血清中的陽性表達率分別為25.81%、29.03%，均明顯高于健康者(P<0.05)；HER-2、GHR在胃癌癌組織中的陽性表達率分別為32.26%、53.23%，HER-2陽性表達率明顯高于癌旁組織，而GHR陽性表達率明顯低于癌旁組織(P<0.05)，見表1，2。

表1 HER-2、GH在血清中陽性表達情況(例，%)

表2 HER-2、GHR在組織中陽性表達情況(例，%)

2.2 HER-2與GH在胃癌患者血清中表達的相關(guān)性

HER-2與GH在胃癌患者血清中的表達呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，見表3。

2.3 HER-2與GHR在胃癌癌組織中表達的相關(guān)性

HER-2與GHR在胃癌、癌組織中的表達呈正顯著相關(guān)(P<0.05)，見表4。

表3 HER-2與GH在胃癌患者血清中表達的相關(guān)性/例

表4 HER-2與GHR在胃癌癌組織中表達的相關(guān)性/例

2.4 血清中HER-2、GH表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

HER-2、GH在胃癌血清中的陽性表達均與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、TNM 分期、分化程度無明顯關(guān)系，而GH表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系(P<0.05)，見表5。

表5 HER-2、GH表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.5 癌組織中HER-2、GHR的表達及與其臨床病理特征的關(guān)系

HER-2在胃癌癌組織中的陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期有一定的關(guān)系(P<0.05)，GHR與分化程度有一定的關(guān)系(P<0.05)，此外兩者均與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小無明顯關(guān)系，見表6。

表6 HER-2、GHR在胃癌癌組織中的表達及與其臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

胃癌的發(fā)生發(fā)展過程具有多因素、多步驟、多階段的特點，雖然近些年人們在診斷與治療胃癌方面取得了一定的成效，但確診時已進入中晚期的胃癌患者仍不在少數(shù)，且多數(shù)并未從姑息手術(shù)、放化療等手段中獲得滿意的臨床受益。胃癌患者的轉(zhuǎn)歸及生存期的延長無疑有賴于疾病的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。我國由于在胃癌早期方面的研究工作相對于一些發(fā)達國家來說比較滯后，故早期胃癌的檢出率很低，而亞洲其他國家如韓國、日本等可達到30%～60%[5]。胃癌的診斷手段較多，但均存在不同程度的限制，目前來說，尋找特異性腫瘤標記物，研究基因檢測以及基因靶點治療已成為包括胃癌在內(nèi)的各種腫瘤診治的研究熱點，對推動當代腫瘤診療事業(yè)具有重要意義。近些年，消化內(nèi)科在研究胃癌以及協(xié)助胃癌的發(fā)現(xiàn)方面取得了一定的進步，對胃癌高度重視，并開展了發(fā)現(xiàn)早癌的一些內(nèi)鏡檢查及相關(guān)基礎(chǔ)研究，以進一步研究胃癌的發(fā)生發(fā)展，提高胃癌檢出率。

HER-2基因在人第17號染色體長臂21位，編碼具有酪氨酸激酶活性的細胞膜磷酸糖蛋白P185。P185中的胞外區(qū)被基質(zhì)金屬蛋白酶切割后進入血液，從而可在血清中檢測到HER-2。研究發(fā)現(xiàn)，HER-2可參與胚胎形成、調(diào)節(jié)細胞增殖分化及組織修復等，正常來說僅在胎兒期表達，在成年人中幾乎不表達，而卻可在一些惡性腫瘤組織中異常表達。HER-2在正常人血清中的含量不超過15 μg/L，而Van等[6]研究中16%的胃癌患者超過此界值，Lordick 等[7]亦指出血清HER-2濃度與胃癌惡性程度有明顯的關(guān)系。本研究顯示，HER-2胃癌患者血清中的陽性表達率(25.81%)明顯高于健康者(0)，這說明血清HER-2可能對胃癌有一定的指示作用，有望在胃癌的臨床診療中發(fā)揮應用價值。血清學標本取材簡便，重復性好，客觀可靠，故葛爾樹等[8]提出可聯(lián)合血清HER-2與血清學腫瘤指標進行早期胃癌的篩查診斷。分析其與臨床病理特征的關(guān)系，HER-2在胃癌患者血清中的表達陽性均與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期、分化程度無明顯關(guān)系，這提示血清HER-2濃度可能獨立于胃癌的生物學行為，不受以上因素的影響，故有望成為胃癌特異的血清學檢測指標。研究表明，HER-2在癌組織中的陽性表達率在6%～38%[9]，本研究為32.26%，與研究相符，且明顯高于癌旁組織(0)，提示胃癌腫瘤組織中有HER-2表達，對胃癌的診斷及靶向治療有所幫助。 分析其與胃癌生物學行為的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，HER-2在胃癌患者癌組織中的表達陽性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期有一定的關(guān)系，這提示，通過檢測腫瘤組織中HER-2的表達情況，對評估胃癌的侵犯、轉(zhuǎn)移有一定幫助。Surmaez等[10]研究指出組織中HER-2的陽性表達也與腫瘤位于賁門胃底、胃體或胃竇有明顯的關(guān)系，但本研究顯示無統(tǒng)計學意義。

GH為1種含191個氨基酸多肽的蛋白質(zhì)激素，由腦垂體前葉嗜酸性細胞分泌，可通過GHR介導機體中蛋白質(zhì)及其它組織的合成。鑒于其生長因子的特性，可能對腫瘤細胞的有絲分裂與生長有一定的促進作用，可能對腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移有所影響。一項關(guān)于胃癌、直腸癌的研究顯示，這類患者血清中的GH濃度明顯比健康人高，但陳美芳等[11]研究表明，胃癌患者血清中的GH濃度與健康人無明顯差異。由于內(nèi)分泌系統(tǒng)各種激素間的影響較大，故目前對胃癌與GH/GHR之間關(guān)系的定論存在較大分歧。本研究結(jié)果顯示，GH在胃癌患者血清中的陽性表達率(29.03%)明顯高于健康者(0)，這說明血清GH濃度與胃癌有一定的關(guān)系，有望在胃癌的診斷及內(nèi)分泌治療方面發(fā)揮應有價值。分析其與胃癌生物學行為的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，血清GH的陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系，這說明血清GH濃度越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風險越大，提示對胃癌的預后監(jiān)測有積極的意義。既往研究已發(fā)現(xiàn)GHR在結(jié)直腸癌、肝癌等癌組織中有異常表達，并且腫瘤惡性程度會影響其表達水平。但Hang等[12]又發(fā)現(xiàn)胃癌患者的癌組織與癌旁組織中的GHR不存在明顯差異。本研究顯示，GHR陽性表達率(53.23%)明顯低于癌旁組織(82.26%)，這說明胃癌可能削弱腫瘤組織中GHR的表達水平，故對胃癌的診斷及靶向治療有所幫助。分析其與胃癌生物學行為的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，組織中GHR的陽性表達與分化程度有一定的關(guān)系，隨分化程度的降低，GHR在組織中的表達越低，與Monig等[13-14]研究部分相符。

本研究顯示，HER-2與GH在胃癌患者血清中的表達呈正顯著相關(guān)，且HER-2與GHR在胃癌患者癌組織中的表達亦呈正顯著相關(guān)，提示二者可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起著協(xié)同作用，但至于何種機制目前尚不清楚，可能其中存在某種正反饋機制[15]，促使腫瘤發(fā)生并不斷生長、轉(zhuǎn)移。

綜上所述，HER-2與GH/GHR在胃癌患者血清與腫瘤組織中的表達存在緊密聯(lián)系，可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起著協(xié)同作用。鑒于此，臨床可聯(lián)合檢測HER-2與GH/GHR來幫助胃癌的診斷，同時進一步研究其中的作用形式與相互聯(lián)系，為胃癌的靶向治療奠定基礎(chǔ)。

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ExpressionandEffectofHER-2andGH/GHRinSerumandTumorTissueofPatientwithGastricCancer

LIZheng,CHENGJun,CHENHui.

HubeiCollegeofArtsandSciencesAffiliatedXiangyangCentralHospital,Xiangyang,441021

ObjectiveTo investigate the expression of HER-2 and GH/GHR in serum and tumor tissue of patient with gastric cancer and their effect on the development of gastric cancer.MethodsThe blood specimens,postoperative carcinoma tissues and adjacent tissues of 62 cases patients with gastric cancer were collected,and blood specimens of 50 cases healthy people in the corresponding period were collected.HER-2 and GH in serum were detected by ELISA,and HER-2 and GHR in carcinoma tissues and adjacent tissues were detected by IHC.ResultsThe positive expression rate of HER-2 and GH in serum of patients with gastric cancer was significantly higher than healthy people(P<0.05).The positive expression rate of HER-2 in carcinoma tissues was significantly higher than adjacent tissues(P<0.05),while GHR in carcinoma tissues was significantly lower than adjacent tissues(P<0.05).The expression of HER-2and GH in serum of patients with gastric cancer had positive significant correlation(P<0.05),and in carcinoma tissues also had positive significant correlation(P<0.05).The relationship,positive expression of GH in serum of gastric cancer had a certain relationship with lymph node metastasis (P<0.05).The positive expression of HER-2 in carcinoma tissues had a certain relationship with lymphatic metastasis and TNM staging (P<0.05),and GHR had a certain relationship with differentiation degree(P<0.05).ConclusionThe expression of HER-2 and GH/GHR in serum and tumor tissue of patient with gastric cancer are closely correlated,it maybe play a synergistic effect on the occurrence,development,and metastasis of gastric cancer.

HER-2;GH/GHR;Gastric cancer;Clinical pathological characteristics

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1748～1751)

441021 湖北文理學院附屬襄陽市中心醫(yī)院

陳 輝

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.003

R735.2

A

1001-5930(2017)11-1748-04

2016-10-07

2017-06-12)

(編輯：吳小紅)