王揚陽 周小航 孫 暉 張愛華 王喜軍

（黑龍江中醫(yī)藥大學中藥血清物化學國家中醫(yī)藥管理局重點實驗室·哈爾濱 150040）

肝纖維化是指肝臟受到持續(xù)損傷，免疫系統(tǒng)被激活后組織反復修復至過度及失控時，細胞外基質(zhì)合成增多與降解相對不足而引起的病理過程。進一步則使肝小葉結構改建，假小葉及結節(jié)形成，發(fā)展為肝硬化。對肝纖維化進行早期防治，可以在發(fā)展到肝硬化前進行逆轉(zhuǎn)，具有重要的臨床意義和實踐價值[1]。而肝纖維化模型的建立，既是研究肝纖維化發(fā)病機制和病理過程的先決條件，也是研究中醫(yī)藥防治肝纖維化動物實驗的的重要支撐。國內(nèi)外學者一直致力于肝纖維化的研究，通過進行大量動物實驗，摸索出了一些較經(jīng)典的動物模型。本文根據(jù)近年來對肝纖維化動物模型的研究，對不同因素誘導的肝纖維化模型進行綜合探討和比較。

1 化學性肝纖維化動物模型

化學性肝纖維化動物模型是指大劑量或長時間給予大鼠具有肝毒性的化學物質(zhì)而引起的肝纖維化，造模方法簡便易行、肝毒性物質(zhì)價格適中故得到廣泛的應用，以下簡單介紹幾種常用的化學性肝纖維化模型。

1.1 四氯化碳誘導的肝纖維化模型

CCL4誘導的肝纖維化模型是國內(nèi)外最廣泛應用的肝纖維化和肝損傷模型，CCL4進入體內(nèi)后通過P450氧化酶激活后，生成活潑的三氯甲基自由基同時引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用,導致肝細胞變性、壞死，長期反復刺激形成纖維化[2]。

四氯化碳誘導法一般采用40%～60%[3]的CCL4溶于橄欖油、花生油等油溶液中，可口服、吸入、皮下注射、腹腔注射[4]等,給藥初期即可見明顯的肝細胞損傷和炎癥反應，根據(jù)給藥途徑和劑量的不同，在實驗第6～9wk基本可見纖維組織明顯增生[5]。它的優(yōu)點是病變過程穩(wěn)定，價格低廉，可操作性強，且與人肝纖維化的形態(tài)學病理學的某些方面有相似性。缺點是肝纖維化程度個體性差異較大，若CCL4溶液劑量過大或操作不夠嫻熟，動物死亡率很高。造模周期較長，停止給藥后有自然恢復的趨勢。

1.2 二甲基亞硝胺（DMN）誘導的肝纖維化模型

DMN是一種具有肝毒性的化學試劑，經(jīng)微粒體轉(zhuǎn)化引起核酸與蛋白質(zhì)的甲基化從而導致肝細胞壞死,細胞外基質(zhì)合成增加,大劑量長期應用時可使大鼠肝細胞壞死后纖維組織增生產(chǎn)生纖維化[6]。常用方法是采用0.5%~1%DMN給大鼠腹腔注射，每周3次，一般4至6周即可見肝纖維化形成[7]。此模型的造模周期較短，形成的肝纖維化較穩(wěn)定，停止給藥后一般較少自愈，因此適用于藥物的治療研究。缺點是大鼠易形成腹腔積液，死亡率高，而且DMN為一級誘癌劑，在實驗操作中必須加強實驗人員的防護措施。

1.3 硫代乙酰胺（TAA）誘導的肝纖維化模型

TAA也是一種具有肝毒性的化學物質(zhì)，長期給藥可引起肝細胞的變性壞死甚至癌變。Moller等[8]認為TAA能減少肝細胞核P-450的含量，影響依賴酶代謝過程，妨礙DNA合成與有絲分裂，從而導致肝細胞變性壞死、纖維增生等變化，最后發(fā)展為肝纖維化甚至肝硬化。TAA一般選用腹腔注射等方式給藥[9]，大鼠在造模期間并發(fā)癥少，死亡率低，造模結束后基本無自愈傾向，在血流動力學和生化代謝變化部分與人體肝纖維化方面較相似。但造模周期長，需8周左右。TAA有毒性易揮發(fā)，操作時需謹慎。

2 免疫性肝纖維化模型

異種動物血清或異體蛋白反復注入大鼠體內(nèi)后，刺激大鼠形成過量的免疫復合物，在肝臟門脈匯管區(qū)及中央靜脈周圍大量沉積，引起周圍炎癥反應，刺激膠原的增生，引發(fā)一系列病理變化，最終形成肝纖維化[10]。

目前大多采用腹腔注射、皮下多點注射或尾靜脈注射異種血清和異種蛋白的方式[11]。該模型在發(fā)病機理上歸屬免疫損傷，與人類慢性肝炎所致的肝纖維化較相似，因此適合免疫方面肝纖維化發(fā)病機制的研究。但其造膜周期較長，并有自愈傾向。

3 膽汁性肝纖維化模型

膽汁性肝纖維化模型是采用人為結扎膽總管或注入硬化劑的方法，造成肝外膽道梗阻，引起梗阻部位之上膽管擴張，肝細胞因而變性壞死，膠原組織沉積、纖維組織增生及小葉改建，最終形成肝纖維化[12]。此模型肝纖維化出現(xiàn)率高，造模周期短[13]，炎癥反應輕，自發(fā)逆轉(zhuǎn)率低，大鼠及實驗人員均不接觸毒害物質(zhì)，被認為是一種較理想的能模擬人肝纖維化模型。但其要求實驗者必須操作精準熟練使膽管完全阻塞，否則大鼠死亡率很高，這可能是其沒有得到廣泛應用的原因，是條件充足的實驗室適合選擇的模型。

4 酒精性肝纖維化模型

飲酒是當今世界普遍性的問題，乙醇吸收入血后約90%被肝臟代謝，故長期大量飲酒者中常出現(xiàn)肝纖維化[14]。其發(fā)病機理和治療方面的研究也被大家所廣泛關注，國外已有多位學者在該領域進行了研究，并創(chuàng)建了Liber-Decarli液體食料模型、Tsukamato-French大鼠模型、Liber-Decarli液體食料加輔劑模型等模型[15-17]。但由于實驗費用、實驗周期和實驗難度等原因，國內(nèi)少有人采用。

國內(nèi)方面以賁長恩教授為首的研究者借鑒國外造模經(jīng)驗，結合國內(nèi)現(xiàn)實條件創(chuàng)立了一套價格低廉、操作簡便的酒精性肝纖維化模型制備方法，即給大鼠灌胃白酒、玉米油、吡唑的混懸液，同時間斷給予高脂飼料[18]。造模大鼠均形成肝纖維化，程度主要為輕度酒精性肝纖維化和中度酒精性肝纖維化。此模型縮短了實驗周期，已經(jīng)得到普遍認可并在國內(nèi)得到廣泛應用。缺點為因大鼠天生厭酒，對酒的代謝也較快，劑量過低模型不易成功，劑量過高死亡又增加，死亡率為30%～40%左右。

5 其他肝纖維化動物模型

近年來，多種因素引起的非酒精性肝病的發(fā)病率逐年上升，因此非酒精性脂肪性肝纖維化模型的研究也有較大進展。其特點與人類非酒精性肝病在發(fā)病原因、病理改變上相類似，一般采取給予大鼠高脂或高脂低蛋白飼料的方法誘導[19]。

肝纖維化復合模型的使用近年來也較為常見，主要為化學性與免疫性[20]、酒精性肝纖維化相結合，造模周期較短，成模率高。缺點為肝纖維化形成機制復雜，不利于對發(fā)病機理的研究，適用于研究藥物的治療方面。

6 討論

各種因素誘導的模型發(fā)病機理有所差異，與人類肝纖維化發(fā)病機制和進程的相似程度也不盡相同，一種模型大多只與其某方面有一定的相似性，并無能完全反應人類肝纖維化疾病的模型。主要原因可能是大鼠與人類的種屬差異較大、人類疾病形成機制更為多樣和復雜等。

建立與人類肝纖維化疾病的基本病變特征相似，病變的發(fā)展過程顯著、穩(wěn)定，成模率高，死亡率低，重復性好，方法易操作且經(jīng)濟實用的肝纖維化動物模型，目前仍是實驗研究中的一個難點問題，需眾多學者更進一步的深入研究。

[1] 徐珊,包劍鋒,周敏,等.肝纖維化病證結合模型的研制[J].中國中醫(yī)藥科技,2009,16(2)∶81-83.

[2] Peter Starkel,Clinical Professor,I.A.Leclercq,etal.Animal models for the study of hepatic fibrosis[J].Best Practice & Research Clinical Gastroenterolo gy,2011,25∶319-333.

[3] 王喜軍,孫文軍,孫暉.CCL4誘導大鼠肝損傷模型的代謝組學及茵陳蒿湯的干預作用研究[J].世界科學技術-中醫(yī)藥現(xiàn)代化 ,2006,8(6)∶101-106.

[4] 曹正柳,資曉飛,熊耀斌,等.金水寶膠囊對肝纖維化大鼠模型TIMP-1及HA等的影響[J].中成藥,2011,33(9)∶1497-1499.

[5] 林興,黃權芳,張士軍,等.山芝麻對肝纖維化大鼠血清學指標的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(12)∶3085-3086.

[6] 孫明瑜,王磊,慕永平,等.茵陳蒿湯對二甲基亞硝胺與四氯化碳誘導的肝硬化大鼠模型凋亡相關基因影響的比較研究[J].中西醫(yī)結合學報,2011,9(4)∶423-433.

[7] 張永生,徐珊,趙育芳,等.三七總苷對二甲基亞硝胺致肝纖維化大鼠膠原代謝的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2012,27(2)∶437-440.

[8] Moller B,Dargel R.Structural and functional impairment of mitochondria from ratliver chronically injured by thioacetamide[J].Acta Pharmacol Toxicol.1984,55(2)∶126-132.

[9] 黃亮,漆林艷,陳志良,等.復方抗肝纖維化處方的優(yōu)化[J].南方醫(yī)科大學學報,2012,32(1)∶109-111.

[10] 魏偉,董晨.免疫性肝纖維化模型和病理機制及其治療的研究[J].安徽醫(yī)科大學學報,2001,36(6)∶411-416.

[11] 于震,楊麗,羅海燕.大黃蜇蟲丸影響免疫性肝纖維化大鼠TIMP-1表達的動態(tài)觀察[J].右江醫(yī)學,2011,39(2)∶134-136.

[12] 黃珊,張文雍,潘春球,等.膽管結扎誘導的肝纖維化大鼠肝臟上皮間質(zhì)表型的變化[J].南方醫(yī)科大學學報 ,2012,32(2)∶173-176.

[13] 劉迎春,顧曉紅.SD大鼠膽汁淤積性肝纖維化動物模型的建立與評價[J].重慶醫(yī)學,2012,41(5)∶458-460.

[14] 王喜軍,劉蓮,孫暉,等.乙醇誘導大鼠肝損傷的代謝組學和茵陳蒿湯的干預研究[J].中國藥理學通報,2008,24(4)∶452-457.

[15] LIEBER C S,DECARLI LM.The feeding of ethanol inliquid diets∶1986update[J].Alocohol Clin Exp Res,1986,10∶550-553.

[16] TSUKAMOTO H,HORNE W,KAMIMURA S,et al.Experimental liver cirrhosis induced by alcohol andiron[J].J Clin Invest,1995,96∶620-630.

[17] YOKOYAMA H,NAGATA S,MORIYA S,etal.Hepatic fibrosis produced in guinea pigs by chronic ethanol administration and immunization withacet adehyde adducts[J].Hepatology,1995,21∶1438-1442.

[18] 丁霞,蒙一純,賁長恩,等.酒精性肝纖維化動物模型的建立[J].中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,1999,5(7)∶47-48.

[19] 孫林林,石軍,郝菁華,等.高脂飲食致大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝纖維化模型的建立[J].臨床肝膽病雜志，2011,27(3)∶254-257.

[20] 趙瑩,王靈臺,張斌.靈甲方對血瘀型肝纖維化大鼠骨橋蛋白的干預研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2011,13(1)∶56-58.