李巖巖　王志剛　徐曉婷

（吉林省通化市食品藥品檢驗(yàn)所，通化134001）

HPLC法測(cè)定五加參蛤蚧精中紫丁香苷含量

李巖巖王志剛徐曉婷

（吉林省通化市食品藥品檢驗(yàn)所，通化134001）

目的建立高效液相色譜法測(cè)定五加參蛤蚧精中紫丁香苷含量測(cè)定方法。方法色譜柱：依利特C18（4.6×200mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇-水（17∶83），檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm。結(jié)果紫丁香苷在0.021μg～0.191μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r＝1.0000），平均加樣回收率為98.62%（RSD＝0.54%）。結(jié)論本方法結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)。

五加參蛤蚧精；紫丁香苷；HPLC；含量測(cè)定

五加參蛤蚧精是由刺五加、蛤蚧、肉蓯蓉、人參、人參露組成的中藥制劑。具有補(bǔ)肺氣、益精血功效，用于元?dú)馓潛p，肺虛咳嗽，病后衰弱。本研究以主藥刺五加中紫丁香苷為檢測(cè)指標(biāo)成分。建立了檢測(cè)五加參蛤蚧精質(zhì)量的高效液相色譜方法，適用于該品種的質(zhì)量控制。

1　儀器與試劑

LC-2010AHT型高效液相色譜儀，Lcsolution工作站，紫外檢測(cè)器。紫丁香苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)：111574-200201，規(guī)格：供含量測(cè)定用）。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：依利特C18（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（17∶83）；流速0.80ml·min-1；柱溫：20℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：257nm，理論板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算不低于3000。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取紫丁香苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備取本品5支內(nèi)容物，混勻，精密吸取本品5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4陰性對(duì)照溶液的制備按處方取除刺五加外的其余藥味，按制備工藝制成缺刺五加的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液。吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，按照上述色譜條件，分別注入色譜儀測(cè)定，結(jié)果陰性樣品色譜在與紫丁香苷峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無干擾峰檢出。

2.5線性關(guān)系考察精密稱取紫丁香苷對(duì)照品適量加甲醇制成每1ml含21.18μg的溶液，分別精密吸取1、3、5、7、9μl測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表1。結(jié)果表明紫丁香苷在0.0212μg～0.1906μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系。

表1　標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

2.6精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測(cè)定其色譜峰面積值，結(jié)果精密度RSD 0.85%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品溶液于室溫下放置，分別在0、2、4、8、12小時(shí)進(jìn)樣一次，以峰面積為指標(biāo)，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果RSD為0.85%，表明12小時(shí)內(nèi)供試品溶液中紫丁香苷的含量基本穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品，依法獨(dú)立測(cè)定6份，結(jié)果見表2。結(jié)果表明本法具良好的重復(fù)性。

表2　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.9回收率試驗(yàn)精密吸取已知含量的供試品（吉林一正藥業(yè)集團(tuán)有限公司060401，含量為0.042mg·ml-1）6

份，分別精密加入對(duì)照品溶液（0.053mg·ml-1）2ml，

依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

2.10樣品測(cè)定結(jié)果及限度測(cè)定十三批樣品，結(jié)果見表4。

表3　回收率試驗(yàn)結(jié)果（%）

結(jié)果表明本法回收率較好，準(zhǔn)確度較高。

表4　十三批樣品中紫丁香苷含量測(cè)定結(jié)果

3　討論

3.1柱的選擇及柱效的考察用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（17∶83）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為257nm；柱溫20℃。①采用依利特C18（4.6×200 mm，5μm）的柱測(cè)定；②采用迪馬C18（4.6×250mm，5μm）的柱測(cè)定；③采用kromasil C18（4.6×250mm，5μm）的柱測(cè)定，采用上述三種柱進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見表5。

表5　理論板數(shù)表

根據(jù)上述三種柱的檢測(cè)結(jié)果，確定本品理論板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

3.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇取紫丁香苷對(duì)照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-260紫外分光光度計(jì)200～400nm范圍內(nèi)測(cè)定紫丁香苷在257 nm波長(zhǎng)處，有最大吸收，故選擇257 nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3流動(dòng)相的選擇參照有關(guān)資料［1］我們對(duì)甲醇-水（20∶80）、甲醇-水（19∶81）、甲醇-水（18∶82）、甲醇-水（17∶83）進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。結(jié)果，以甲醇-水（17∶83）為流動(dòng)相分離效果較好，保留時(shí)間適度，因此，確定其為本法的流動(dòng)相。

3.4提取方法的考察方法一：采用了精密吸取本品5ml，置D101大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)15cm）上，以甲醇100ml洗脫，收集洗脫液蒸干，殘?jiān)蛹状嫁D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。結(jié)果測(cè)得的紫丁香苷含量較低，故未采用。方法二：采用了精密吸取本品5ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。結(jié)果見表6。

表6　提取方法表

因此采用方法二所述的供試品溶液的制備方法。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］．2010年版．中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1．

Co n t en t De t e r min atio n o f Sy rin gin in Wujias h en Gejiejing b y HPLC

Li Yanyan W ang Zhigang Xu Xiaoting(Tonghua City Institute for D rug Control，Jilin p rovince，Tonghua，134001，China)

ObjectiveTo establish a HPLC method to determine the content of Syringin in WujiashenGejiejing．MethodsA Elite C18 column was used with methanol-water（17：73）as mobile phase，and detected at the UV wavelength of 257 nm．ResultsThe calibration curve was in good linearity over the range of 0.021μg-0.191μg（r＝1.0000）．The average recovery was 98.62%（RSD＝0.54%）．ConclusionsThe method is accurate and reproducible，it can be used for the drug control．

WujiashenGejiejing；Syringin；HPLC；Content determination

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.16.116

1672-2779（2013）-16-0159-02

吳義紅

2013-06-28）