■張媛媛 羅 正 鄢紅國 陽艷林 黃廣明 勞 曄

（建明工業(yè)（珠海）有限公司，廣東珠海 519040）

產(chǎn)氣莢膜梭菌又被稱為魏氏梭菌，是革蘭氏陽性致病菌，根據(jù)分泌的毒素不同被分為A、B、C、D 4個型。其中A型和C型對豬的影響最大，C型產(chǎn)氣莢膜梭菌是引起仔豬紅痢的病原。仔豬在3 d至1周內(nèi)發(fā)病，發(fā)病急、病程短、死亡率高、中大豬有時突然死亡，常來不及治療，給養(yǎng)殖戶帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。產(chǎn)氣莢膜梭菌廣泛分布在自然環(huán)境當(dāng)中，如泥土、河水、飼料、糞便等，新生仔豬主要通過糞口途徑感染，由于新生仔豬對病原沒有抵抗能力，梭菌在腸道后端迅速大量繁殖，產(chǎn)生大量毒素和氣體，造成新生仔豬死亡。沒有健康的母豬就沒有健康的小豬，因此在仔豬梭菌性疾病的控制必須從母豬開始。目前國內(nèi)控制梭菌主要是在飼料中添加抗革蘭氏陽性菌藥物或者廣譜抗生素，很少有人采取免疫的方法。由于長時間使用抗生素導(dǎo)致梭菌的耐藥性顯著增加，用藥成本也隨之增加，大大降低了養(yǎng)殖的盈利能力，同時也帶來了藥物殘留超標(biāo)，急需新的有效的解決方案。

克洛生TM是建明工業(yè)開發(fā)的專門用于控制畜禽腸道梭菌，維持腸道平衡的益生菌，主要成分是獲得專利的枯草芽孢桿菌PB6（Bacillius subtilis PB6）。克洛生進(jìn)入動物腸道后會迅速繁殖，產(chǎn)生表面素(Surfactin)A和表面素B，這兩種分子體外實(shí)驗被證明能有效抑制產(chǎn)氣莢膜梭菌生長，克洛生在多個國家被批準(zhǔn)作為飼料添加劑用于梭菌性疾病的預(yù)防。本研究旨在通過動物試驗來驗證克洛生在我國豬體內(nèi)抑制梭菌的能力，同時了解母豬梭菌感染情況，為無抗健康養(yǎng)殖場提供新的梭菌防控選擇方案。

1 材料和方法

1.1 材料

梭菌含量檢測試劑盒和克洛生11粉劑由建明工業(yè)（珠海）有限公司提供。懷孕母豬、哺乳母豬和試驗場地由廣東某豬場提供。懷孕母豬試驗期間分別飼喂于限位欄中，每頭哺乳母豬與各自的小豬在一個產(chǎn)床內(nèi)。

1.2 試驗方法

試驗最先在沒有使用克洛生的情況下檢測懷孕母豬和哺乳母豬糞便中梭菌的含量，檢測結(jié)束后將克洛生拌料飼喂試驗?zāi)肛i，添加劑量為200 g/t。在飼喂含克洛生飼料12 d后分別采集所有試驗?zāi)肛i的糞便，檢測梭菌的含量。

梭菌含量檢測按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，在第4 h讀1次結(jié)果，第5 h讀1次結(jié)果用于判定母豬梭菌感染情況，判斷標(biāo)準(zhǔn)見表1。梭菌檢測試劑盒的主要原理是梭菌可以代謝含硫氨基酸產(chǎn)生硫化氫氣體，在堿性條件下硫化氫氣體與亞鐵離子反應(yīng)生成不溶的黑色硫化亞鐵沉淀，反應(yīng)方程式如下：

如果糞便中梭菌含量越高，在培養(yǎng)的過程中相同時間繁殖出的產(chǎn)氣莢膜梭菌就越多，代謝產(chǎn)生的硫化氫也更多，因此生成的硫化亞鐵也會相應(yīng)增加，同理產(chǎn)生相同量黑色沉淀菌含量越高所需的時間也就越短。因此可以根據(jù)培養(yǎng)過程中開始產(chǎn)生黑色沉淀的時間以及量來判定糞便中產(chǎn)氣莢膜梭菌的含量。表1為梭菌含量與出現(xiàn)顏色反應(yīng)的對應(yīng)關(guān)系。

表1 梭菌含量與顏色反應(yīng)的關(guān)系

2 試驗結(jié)果（見圖1、圖2、圖3）

按照梭菌檢測試劑盒說明書操作，在未飼喂克洛生前對20頭懷孕母豬進(jìn)行糞便梭菌含量檢測，分別在4 h、5 h以及6 h記錄試驗結(jié)果。圖1a、1b為20頭懷孕母豬4 h顯色結(jié)果，此時有8個樣明顯變黑。圖2a、2b為20頭懷孕母豬5 h顯色結(jié)果，此時有15個樣明顯變黑。說明該20頭懷孕母豬，有8頭是梭菌嚴(yán)重感染，有7頭是梭菌輕度感染。

圖1 懷孕母豬使用克洛生之前（a，b）和使用克洛生之后（c，d）糞便梭菌含量4 h檢測結(jié)果

圖3a為哺乳母豬4 h顯色結(jié)果，此時有3個樣品變黑。圖4a為哺乳母豬5 h顯色結(jié)果，有3個樣品變黑。說明該5頭哺乳母豬中有3頭是梭菌嚴(yán)重感染。

圖2 懷孕母豬使用克洛生之前（a、b）和使用克洛生之后（c、d）糞便梭菌含量5 h檢測結(jié)果

圖3哺乳母豬使用克洛生之前（a）和使用克洛生之后（b）糞便梭菌含量4 h檢測結(jié)果

通過變色情況初步判斷母豬感染梭菌的情況十分嚴(yán)重，因此所有母豬使用添加克洛生200 g/t的飼料進(jìn)行飼喂，共12 d。采集相同懷孕母豬和哺乳母豬糞便檢查梭菌含量。圖1c、1d為飼喂克洛生后20頭哺乳母豬4 h梭菌檢測顯色結(jié)果，圖2c、2d為飼喂克洛生后20頭懷孕母豬5 h梭菌檢測顯色結(jié)果，圖3b、4b分別為5頭懷孕母豬飼喂克洛生后4 h和5 h梭菌檢查顯色結(jié)果。從圖上可以看出在飼喂克洛生后試管變黑的數(shù)量和程度明顯下降。

圖4 哺乳母豬使用克洛生之前（a）和使用克洛生之后（b）糞便梭菌含量5 h檢測結(jié)果

3 分析和討論

中國豬場母豬攜帶梭菌的情況并不清楚，本研究利用梭菌檢測試劑盒對豬場梭菌含量進(jìn)行調(diào)查。被檢測的25頭母豬中有18頭梭菌超標(biāo)，嚴(yán)重感染的懷孕母豬和哺乳母豬分別達(dá)到75%和60%，提示母豬攜帶梭菌較為普遍，對母豬感染情況進(jìn)行統(tǒng)計（見表2）。

表2 母豬使用克洛生前后梭菌攜帶情況統(tǒng)計

在使用克洛生12 d后再次檢測可以看出，嚴(yán)重感染的懷孕母豬和哺乳母豬總數(shù)從11頭減少到2頭，總計減少9頭，改善率81.3%。輕度感染母豬由7頭減少到3頭，減少4頭，改善率達(dá)到57.1%。改善最明顯的是哺乳母豬，使用克洛生后3頭母豬全部從重度感染變?yōu)檎?，改善率達(dá)到100%。其中輕度感染母豬變化看上去不如重度感染母豬變化明顯，可能是因為原來重度感染母豬，使用克洛生后從重度感染變成了輕度感染，掩蓋了克洛生對輕度感染梭菌母豬的治療效果。飼喂含克洛生200 g/t飼料12 d后所有母豬梭菌超標(biāo)情況由18頭變?yōu)?頭，有13頭母豬恢復(fù)正常，治療有效率達(dá)到72%。該試驗結(jié)果證明克洛生可以有效減少豬腸道中的梭菌，改善動物健康狀態(tài)，這與國外發(fā)表的文章結(jié)果一致，也與克洛生體外抑制梭菌的結(jié)果一致。

4 結(jié)論

通過母豬糞便梭菌檢測表明，母豬普遍攜帶梭菌，且大多數(shù)母豬梭菌含量超標(biāo)，是仔豬梭菌性疾病的主要來源。

克洛生添加到飼料中能顯著降低梭菌在豬腸道內(nèi)的含量，保證豬群健康。