■陳曉斌 張雙雙 林冬梅 羅海林 林 輝 林興生 林占熺

(福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院菌草研究所，福建福州 350002)

菌草杏鮑菇菌糟飼料是指以五節(jié)芒、芒萁、類蘆、巨菌草等常見菌草為培養(yǎng)基主料，添加麩皮、玉米粉、石膏等輔料組成的培養(yǎng)基栽培杏鮑菇，采摘杏鮑菇子實(shí)體后剩余的培養(yǎng)料，經(jīng)曬干粉碎后作為動物飼料原料或飼料添加料。菌糟由纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、粗蛋白、碳水化合物、水分、無機(jī)鹽以及菌絲體等成分組成。菌糟中含有豐富的菌絲體，菌絲體含有多糖、甾醇、菌絲蛋白等活性物質(zhì)；同時(shí)菌糟還含有經(jīng)菌絲分解來的木質(zhì)素、纖維素、半纖維素等，含有豐富的氨基酸、礦質(zhì)元素等，其營養(yǎng)價(jià)值相當(dāng)于糠麩類飼料。

飼料的安全性是關(guān)系到動物性食品安全的關(guān)鍵性所在，飼料往往是眾多病毒、毒素、病原菌的重要傳播途徑，其中所含的有毒、有害物質(zhì)可以通過食物鏈最終進(jìn)入人體，危害人類健康。菌草杏鮑菇菌糟作為一種新型的飼料資源，其作為飼料資源的飼用安全性一直受到人們的重視，而這一點(diǎn)也是其飼用價(jià)值開發(fā)的關(guān)鍵，但其毒理學(xué)方面安全性評價(jià)未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本文通過對菌草杏鮑菇菌糟進(jìn)行小白鼠的急性毒性試驗(yàn)、30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)對菌草杏鮑菇菌糟進(jìn)行安全性毒理學(xué)評價(jià)說明，以期對菌草杏鮑菇菌糟飼料產(chǎn)品開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌草杏鮑菇菌糟

菌草杏鮑菇菌糟收集：菌草杏鮑菇菌袋采收子實(shí)體后，選取菌絲潔白無雜菌污染的菌袋，去掉外層塑料袋，用手將菌糟掰成小塊，用菌草粉碎機(jī)粉碎成草粉狀，放于鋪有塑料布的水泥平臺上晾曬，待菌糟充分干燥后，用大型菌草粉碎機(jī)粉碎成粗粉狀，作為菌糟飼用安全性毒理學(xué)試驗(yàn)用菌糟原料。

1.1.2 急性毒性試驗(yàn)菌草杏鮑菇菌糟水提濃縮液

稱取20 g菌草杏鮑菇菌糟，在料水比為1∶20、水浴溫度為90℃、提取時(shí)間3 h條件下進(jìn)行水提，提取3次，得到菌草杏鮑菇菌糟水提液，合并3次水提液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至0.5 g/ml。

1.1.3 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)小白鼠基礎(chǔ)日糧飼料

對照組飼喂小白鼠常規(guī)顆粒飼料，試驗(yàn)組小白鼠飼喂分別用菌糟替代5%、15%、25%基礎(chǔ)日糧的顆粒飼料，飼料由福建醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院動物實(shí)驗(yàn)室加工完成。

1.2 試驗(yàn)動物

昆明系小白鼠，購于福建省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院動物實(shí)驗(yàn)室。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 菌草杏鮑菇菌糟小白鼠急性毒性試驗(yàn)

取體重為19～21 g昆明系小白鼠，雌雄各10只。采用最大耐受劑量法，受試物給予1次灌胃，灌胃劑量為0.8 ml/20 g。試驗(yàn)前小白鼠禁食（不禁水）16 h，連續(xù)觀察7 d，記錄動物的中毒表現(xiàn)及死亡情況。方法參照國標(biāo)GB/T 15193.3—2003急性毒性試驗(yàn)方法進(jìn)行。

1.3.2 菌草杏鮑菇菌糟30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

取體重為18～21 g昆明系小白鼠40只，雌雄各半。試驗(yàn)分為3個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)對照組，對照組飼喂小白鼠基礎(chǔ)日糧顆粒飼料，試驗(yàn)組分別飼喂菌糟替代不同比例小白鼠基礎(chǔ)日糧的顆粒飼料。

試驗(yàn)期37 d，其中預(yù)試期（7 d）以試驗(yàn)日糧逐步替代基礎(chǔ)日糧，小白鼠適應(yīng)菌草菌糟飼料后再進(jìn)行正式試驗(yàn)，正式期30 d，試驗(yàn)期間自由采食和飲水。每天定時(shí)投料及稱量剩料，計(jì)算小白鼠的采食量。每周一早上9：00空腹稱量小白鼠的體重，計(jì)算小白鼠體重的增重情況。同時(shí)試驗(yàn)期間觀察小白鼠的采食情況、精神行為等情況，詳細(xì)記錄并分析原因。試驗(yàn)結(jié)束后，全部小白鼠空腹眼眶取血，進(jìn)行血常規(guī)分析。致死，進(jìn)行解剖，準(zhǔn)確稱量各臟器重量，計(jì)算小白鼠臟器指數(shù)。試驗(yàn)方法參照國標(biāo)GB 15193.13—2003 30 d和90 d喂養(yǎng)試驗(yàn)方法進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2010對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，DPS 7.05軟件進(jìn)行單因素LSD方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌草杏鮑菇菌糟小白鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

用菌草杏鮑菇菌糟水提濃縮液進(jìn)行小白鼠急性毒性試驗(yàn)灌胃后，開始時(shí)小白鼠活動減少，行動緩慢，身體有少量顫抖，2 h后恢復(fù)正常，連續(xù)觀察1周，小白鼠無死亡、中毒等不良現(xiàn)象發(fā)生。菌草杏鮑菇菌糟急性毒性試驗(yàn)最大灌胃劑量為20 g/kg，根據(jù)急性毒性試驗(yàn)劑量分級標(biāo)準(zhǔn)，菌草杏鮑菇菌糟屬于無毒級。

2.2 菌草杏鮑菇菌糟30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 小白鼠健康狀況

在30 d的試驗(yàn)周期內(nèi)，各組小白鼠均無不良反應(yīng)發(fā)生，日常行為活潑，毛色順滑光亮，雌、雄間無差異。

2.2.2 小白鼠體重增長情況

小白鼠體重增長情況見表1、圖1，可以看出對照組與試驗(yàn)組小白鼠體重增長趨勢基本一致，隨著菌草杏鮑菇菌糟在小白鼠日糧中的比例越高，小白鼠的總增重越低。

表1 各組小白鼠體重增重情況（g/只）

圖1 各組小白鼠周期內(nèi)平均體重變化情況

2.2.3 試驗(yàn)期內(nèi)各組小白鼠料重比

試驗(yàn)期內(nèi)各組小白鼠料重比見表2、圖2，試驗(yàn)組各組試驗(yàn)期內(nèi)平均日采食量均高于對照組，菌草杏鮑菇菌糟含量越高，其料重比越高，可能與改變其飼料的營養(yǎng)價(jià)值有關(guān)。

2.2.4 各組小白鼠臟器外觀變化

各組小白鼠胸腺、甲狀腺和心、肝、脾、肺、腎等器官外觀正常，病理學(xué)檢查未見異常、無特殊的病理學(xué)變化。

表2 試驗(yàn)周期內(nèi)各組小白鼠料重比

圖2 試驗(yàn)周期內(nèi)各組小白鼠料重比分析

2.2.5 各組小白鼠臟器系數(shù)（見表3）

由表3可知，各組小白鼠胸腺系數(shù)及臟器系數(shù)經(jīng)方差分析差異不顯著（P＞0.05）。

2.2.6 各組小白鼠血常規(guī)檢測

小白鼠血常規(guī)檢測見表4，其中試驗(yàn)1組的血紅蛋白、紅細(xì)胞含量略高于對照組與其它試驗(yàn)組，但試驗(yàn)組與對照組血液中血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞含量差異不顯著（P＞0.05），說明菌草杏鮑菇菌糟對小白鼠血常規(guī)中的4項(xiàng)指標(biāo)基本無影響。

表3 各組小白鼠臟器系數(shù)

表4 各組小白鼠血常規(guī)檢測

3 討論

菌草杏鮑菇菌糟急性毒性試驗(yàn)最大灌胃劑量為20 g/kg，根據(jù)急性毒性試驗(yàn)劑量分級標(biāo)準(zhǔn)，菌草杏鮑菇菌糟屬于無毒級。30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)，試驗(yàn)期內(nèi)小白鼠的增重量隨著菌糟替代量增加而下降，25%組小白鼠增重量最低，其可能的原因是菌草杏鮑菇菌糟替代的同時(shí)，未調(diào)整試驗(yàn)組與對照組基礎(chǔ)日糧的營養(yǎng)及能量水平，所以小白鼠增重量受到了影響。但隨著菌草杏鮑菇菌糟添加量的增加，小白鼠的平均日采食量并沒有受到影響，菌草杏鮑菇菌糟適口性較好，但過多添加會影響其增重量。試驗(yàn)后對小白鼠進(jìn)行解剖，發(fā)現(xiàn)各試驗(yàn)組小白鼠胸腺、甲狀腺和心、肝、脾、肺、腎等器官外觀正常，病理學(xué)檢查、臟器系數(shù)、血常規(guī)檢測均未見異常。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，菌草杏鮑菇菌糟作為飼料原料應(yīng)用是安全的，無毒副作用。