張智英 董興艷

丙肝病毒實(shí)驗(yàn)室檢查方法及結(jié)果解釋

張智英 董興艷

1實(shí)驗(yàn)室檢查方法

1.1化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)化學(xué)發(fā)光免疫分析是將有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)與高特異性免疫反應(yīng)相結(jié)合利用各種抗原，半抗原、抗體、激素，酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術(shù)?；瘜W(xué)免疫發(fā)光又以標(biāo)記方法不同分為兩種，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析和化學(xué)發(fā)光酶免疫分析?；瘜W(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析是利用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法，常用的標(biāo)記化學(xué)物質(zhì)有吖啶酯類化合物，通過起動發(fā)光試而發(fā)光，強(qiáng)烈直接發(fā)光在1 s內(nèi)完成?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析，其操作步驟與ELISA完全相同。以酶標(biāo)記活性物質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng)，只是反應(yīng)底物為發(fā)光劑。

1.2膠體金快速實(shí)驗(yàn)免疫滲透實(shí)驗(yàn)：斑點(diǎn)免疫膠體金快速實(shí)驗(yàn)以硝酸纖維膜為載體，HCV抗原點(diǎn)狀固定在膜上，加待檢樣品，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯色斑點(diǎn)。反應(yīng)時間在10 min以內(nèi)有效試驗(yàn)質(zhì)控點(diǎn)必需顯色。免疫層析試驗(yàn)，以硝酸纖維膜為載體，HCV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著載體遷移，陽性結(jié)果在膜抗原部位顯示出有色條帶，有效試驗(yàn)質(zhì)控線必須顯色。

1.3抗體補(bǔ)充試驗(yàn)?zāi)壳俺Ｓ每贵w補(bǔ)充試驗(yàn)為免疫印跡試驗(yàn)，免疫印跡法試劑一般將HCV不同編碼區(qū)抗原多種成分噴涂在硝酸纖維薄膜條上，并設(shè)置了兩種不同濃度的IgG對照帶的二條hsoD對照帶，用于內(nèi)部對照結(jié)果判斷。其診斷HCV感染敏感性高，特異性強(qiáng)，可檢測出針對HCV不同編碼區(qū)抗原的抗體，其不需要特殊儀器設(shè)備。

抗-HCV檢測策略及結(jié)果報告，先用篩查試劑進(jìn)行初策實(shí)驗(yàn)，結(jié)果呈陰性報告陰性，不在進(jìn)行復(fù)檢實(shí)驗(yàn)，結(jié)果呈陽性反應(yīng)進(jìn)入復(fù)檢試驗(yàn)，復(fù)檢用篩查試劑2進(jìn)行，結(jié)果呈陰性反應(yīng)報告陰性，呈陽性反應(yīng)報告抗-HCV陽性。

HCV抗原的檢測目的及意義：急性丙型肝炎的輔助診斷，尤其有助于HCV感染窗口期患者，抗HCV檢測結(jié)果確定患者或HCV陽性母親所生嬰兒丙型肝炎輔助診斷。免疫受損或先天性免疫缺陷群體如HCV感染者的篩查，或是抗HCV陽性感染者的病毒血液分析，HCV感染者治療前后，病毒血液分析。

HCV抗原檢測方法，采用ELiSA試劑定性或定量檢測樣品中游離的HCV核心抗原或總核心抗原。HCV抗原檢測策略及報告，初次檢測樣品陰性則報告為陰性，陽性需進(jìn)行雙孔復(fù)檢，如雙孔為陰性報告為陰性，雙孔至少有一孔陽性報告陽性。

丙型肝炎病毒核酸的檢測其目的和意義：HCV-RNA定性檢測可用于血液篩查領(lǐng)域，可使用單份樣品或者多份樣品集合的方法，對獻(xiàn)血員的血液進(jìn)行核酸檢測，降低輸血?dú)堄囡L(fēng)險度，HCV-RNA檢測可用于對HCV抗體陰性的高危人群樣品進(jìn)行核酸檢測及發(fā)現(xiàn)窗口期的感染。HCV-RNA定量檢測主要用于抗病毒治療及療效判定。HCV-RNA檢測方法有:RT-PCR檢測技術(shù)，TMA檢測技術(shù)，實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，P-DNA技術(shù)。

2檢測策略及結(jié)果報告

2.1HCV核酸定性用于血液測查的策略及結(jié)果報告。

對血液HCV抗體陰性樣品可用結(jié)合NAT進(jìn)行復(fù)檢實(shí)驗(yàn)，如是陽性反應(yīng)做單人份的NAT檢測。陽性結(jié)果報告陽性待查!血液報廢，如果需要進(jìn)一步獻(xiàn)血員感染狀況，執(zhí)行臨床診斷策略，如果陰性報告復(fù)檢陰性，血液供應(yīng)臨床。

2.2HCV核酸定性檢測用于臨床診斷結(jié)果報告，抗HCV復(fù)檢實(shí)驗(yàn)陽性反應(yīng)樣品，進(jìn)行定性NAT實(shí)驗(yàn)。結(jié)果陽性者，報“HCV陽性”定性NAT結(jié)果陰性，須做免疫印跡實(shí)驗(yàn)確證。

HCV基因型的檢測主要用于HCV病毒基因分型，我國主要為1b,其次為2a，還有其他少見的型別，如西南地區(qū)的3型和廣東地區(qū)的6型等，基因分型的檢測主要用于抗病毒治療的應(yīng)答·不同，采取治療方案也不同，對于RNA定量結(jié)果有一定影響。

丙型肝炎病毒的細(xì)胞培養(yǎng)：建立體外丙型肝炎病毒的臨床檢測及治療方案的優(yōu)化和個性化治療至關(guān)重要。但現(xiàn)在還不能用于臨床，目前丙型肝炎病毒感染主要依賴于抗原抗體及核酸的檢測，細(xì)胞培養(yǎng)方法將是丙型肝炎病毒臨床檢測的一個非常主要補(bǔ)充。

3檢測結(jié)果解釋

3.1HCVRNA(+) 抗HCV(+)提示活動性HCV感染。

3.2抗HCV(+)HCVRNA(-)提示既往感染或現(xiàn)在感染，由于 有的HCV慢性感染HCVRNA間隙陽性，因此一次HCVRNA結(jié)果陰性不能排除活動性感染。

3.3抗HCV陰性 HCVRNA陰性未感染HCV

3.4HCV不確定HCVRNA陰性抗HCV結(jié)果可能為假陽性，在這種情況下提示未感染HCV。

[1]王蘭蘭,吳健民.臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn).人民衛(wèi)生出版社，2007.

154101 鶴崗市人民醫(yī)院

丙型肝炎病毒(heptatitiscvitus,HCV)是腸道外傳播的非甲非乙型肝炎的主要病原體，其導(dǎo)致的肝炎為丙型肝炎。HCV感染途徑主要為血液傳播，也可能存在其他傳播途徑。如：母嬰傳播、性傳播等、約有半數(shù)的HCV傳播途徑不明確。HCV同時也重疊其他肝炎病毒，(如：HBV)引起嚴(yán)重肝炎者在我國較為多見。HCV感染的重要特點(diǎn)是慢性化幾率很高，感染過程長，存在不同程度的肝組織病變，并且進(jìn)行性加重，部分患者可轉(zhuǎn)為自發(fā)性肝癌。

丙肝的實(shí)驗(yàn)檢查主要包括免疫學(xué)及分子生物學(xué)檢測。針對特異抗體、HCV-IgG HCV-IgM的免疫學(xué)檢查是臨床常用的診斷方法?？笻CV抗體不是中和性抗體，沒有保護(hù)性，但它卻是HCV感染的重要標(biāo)志物質(zhì)，同時也是慢性肝炎、肝硬化的重要指標(biāo)。

抗-HCV檢測分為篩查實(shí)驗(yàn)(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、膠體金法快速實(shí)驗(yàn))化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)和補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)(免疫印記實(shí)驗(yàn))。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是抗-HCV檢測的常用方法，其基本原理是以HCV抗原包被固相載體，用辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG與被檢樣中的抗-HCV反應(yīng)，以鄰苯二胺(OPD)或3、3′,5、5′四甲基聯(lián)苯胺(TMB)等底物顯色后使用酶標(biāo)儀等儀器進(jìn)行陰陽性結(jié)果判斷。