陸山河 吉慶偉 林英忠 (廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，南寧530000)

動(dòng)脈粥樣硬化斑塊是始于動(dòng)脈壁，尤其是針對(duì)氧化型脂蛋白內(nèi)在結(jié)構(gòu)修復(fù)的慢性炎癥性反應(yīng)過程。在此基礎(chǔ)上，先天性和獲得性免疫反應(yīng)激活，引起血管壁病變進(jìn)一步惡化，促進(jìn)疾病的進(jìn)展并最終導(dǎo)致一系列并發(fā)癥發(fā)生[1，2]。天然的或獲得性的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell，Treg)可能與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過程有關(guān)。越來越多研究證實(shí)，在小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，CD4+LAP+Treg為一種新的Tregs亞群，這種Tregs亞群可以抑制自身免疫性疾病的發(fā)生[3]。研究表明，給予抗-CD3抗體可以減少動(dòng)脈粥樣硬化的形成，其機(jī)制為激活CD4+LAP+Tregs分泌TGF-β，并依賴TGF-β介導(dǎo)免疫抑制來實(shí)現(xiàn)[4]。本文就 CD4+LAP+Tregs的特點(diǎn)、作用機(jī)制以及在動(dòng)脈粥樣硬化的作用做一綜述。

1 CD4+LAP+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的特征及作用機(jī)制

1.1 CD4+LAP+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表面標(biāo)記及相關(guān)受體 CD4+LAP+T細(xì)胞表達(dá)一種隱匿性相關(guān)肽(Latency-associated peptide，LAP)在其表面，以非共價(jià)鍵連接TGF-β的氨基酸終末區(qū)域，形成一種隱匿性TGF-β復(fù)合體。Nakamura等[5]于2001年首先提出TGF-β前體在鼠的CD4+T細(xì)胞表達(dá)，業(yè)已證明小鼠的某種Treg亞群表達(dá)隱匿性相關(guān)肽(LAP)在其細(xì)胞表面。而且，Gandhi等[3]證實(shí)某種特定的T細(xì)胞亞群表達(dá)一種膜聯(lián)結(jié)構(gòu)蛋白TGF-β/隱匿性相關(guān)肽(LAP)復(fù)合體，在人外周血中也有調(diào)節(jié)功能。有研究結(jié)果表明，不成熟樹突狀細(xì)胞也表達(dá)LAP在其表面，并依賴TGF-β抑制效應(yīng) T細(xì)胞的激活[6]。輔助性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞均可分泌隱匿性TGF-β[7]，但在 T 細(xì)胞抗原受體(TCR)的刺激下，只有調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能最終捕獲隱匿性TGF-β，并將其表達(dá)在Treg表面。

CD4+LAP+Tregs可產(chǎn)生和分泌 TGF-β。關(guān)于隱匿性 TGF-β，其生成先在細(xì)胞內(nèi)合成 TGF-β前體，并經(jīng)過同二聚化等加工處理，TGF-β前體被弗林蛋白酶等前蛋白轉(zhuǎn)化酶分裂成兩個(gè)部分。一部分為成熟TGF-β，包含有羧基末端的同源二聚體，另一部分為隱匿性關(guān)聯(lián)肽(LAP)，包含有氨基末端。這兩部分以非共價(jià)鍵連接在一起，組成一個(gè)隱匿性TGF-β復(fù)合體，并釋放至胞外，經(jīng)TGF-β激活物(TGF-β activator，TA)作用解離 LAP而成為具有活性的TGF-β，這個(gè)過程涉及到 TGF-β 多個(gè)步驟的激活[8]。大量證據(jù)表明，隱匿性TGF-β是通過一組富含亮氨酸重復(fù)序列的分子(GARP/LRRC32)來固定在細(xì)胞膜表面[9]，而GARP蛋白僅限于在激活的Treg中表達(dá)，目前已證實(shí)為隱匿性TGF-β的特異性受體[10]。CD4+LAP+Tregs表面高度表達(dá)TGF-βII受體、CD69和 CTLA-4[3]。

1.2 CD4+LAP+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能特點(diǎn)及作用機(jī)制 CD4+LAP+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在免疫耐受調(diào)節(jié)中起重要作用。Gandhi等[3]證實(shí)，在體外實(shí)驗(yàn)中，CD4+LAP+Tregs的生成是通過激活天然T細(xì)胞來誘導(dǎo)，并依賴IL-8進(jìn)行擴(kuò)增，分泌TGF-β和IL-10等細(xì)胞因子對(duì)免疫活動(dòng)進(jìn)行抑制。TGF-β在天然調(diào)節(jié)T細(xì)胞的分化、維持和功能中扮演著重要角色[11，12]。CD4+CD25+LAP+細(xì)胞分泌 TGF-β 并表達(dá)在激活的Tregs表面，并通過細(xì)胞接觸依賴方式對(duì)鄰近的效應(yīng)T細(xì)胞產(chǎn)生抑制[5]。CD4+LAP+T細(xì)胞不僅可以通過細(xì)胞依賴機(jī)制對(duì)周圍鄰近的效應(yīng)T細(xì)胞起抑制作用，還擁有可溶性依賴因子抑制能力，通過分泌的細(xì)胞因子擴(kuò)大作用范圍來抑制效應(yīng)T細(xì)胞，更有效地調(diào)節(jié)免疫抑制。在侵襲小室實(shí)驗(yàn)研究中，CD4+CD25+LAP+細(xì)胞與 CD4+CD25+LAP-細(xì)胞均可顯著抑制效應(yīng)細(xì)胞的增殖，CD4+CD25+LAP-細(xì)胞主要通過細(xì)胞依賴接觸機(jī)制產(chǎn)生抑制作用，而CD4+CD25+LAP+細(xì)胞通過侵襲小室實(shí)驗(yàn)不能完全反轉(zhuǎn)其抑制功能，證實(shí)CD4+CD25+LAP+細(xì)胞的抑制功能是細(xì)胞接觸依賴性和可溶性因子依賴機(jī)制[13]。體外或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，小鼠的 CD4+LAP+Tregs都是依賴TGF-β抑制效應(yīng)性T細(xì)胞功能。在小鼠的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和糖尿病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，CD4+LAP+Tregs有抑制自身免疫疾病的作用[13-15]，而且依賴TGF-β產(chǎn)生抑制功能。

CD4+CD25-LAP+Tregs依賴TGF-β產(chǎn)生免疫抑制作用。給予小鼠抗-CD3抗體誘導(dǎo)CD4+CD25-LAP+Tregs生成后，通過分泌TGF-β并依賴TGF-β來抑制實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎[16]。TGF-β通過對(duì)Foxp3因子表達(dá)的誘導(dǎo)，可將天然的T細(xì)胞轉(zhuǎn)化成 CD4+CD25+Tregs[17]。研究表明，人的 Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞也表達(dá)LAP[10]。這些均說明TGF-β與免疫調(diào)節(jié)活動(dòng)的誘導(dǎo)及Foxp3表達(dá)的增加密切相關(guān)。CD4+LAP+細(xì)胞不但分泌可溶性TGF-β，還共同表達(dá)TGF-β和TGF-βRs在細(xì)胞表面，釋放激活的TGF-β，以自分泌或旁分泌方式反饋?zhàn)饔糜谶@些細(xì)胞。CTLA4、GITR和 CD103在 CD4+CD25+LAP+Tregs的刺激下表達(dá)上調(diào)，使得CD4+CD25+LAP+Tregs調(diào)節(jié)抑制能力大大提高。

總之，CD4+LAP+Tregs在體內(nèi)發(fā)揮作用機(jī)制可能是多方面的，在不同情況下可通過多種機(jī)制發(fā)揮作用，還受周圍環(huán)境如一些細(xì)胞因子、PH及溫度等的影響。

2 CD4+LAP+Tregs與動(dòng)脈粥樣硬化

Treg具有抗炎和抗動(dòng)脈粥樣硬化的功能已得到肯定。許多研究證實(shí)，CD4+CD25+Treg在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，而過繼性轉(zhuǎn)移CD4+CD25+Treg在動(dòng)物模型中則能縮小已有的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的面積[18]。

CD4+LAP+Tregs誘導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)可能發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化的保護(hù)作用。用口服的方式給予易患動(dòng)脈粥樣硬化小鼠抗-CD3抗體[4]，小鼠處死后，與對(duì)照組相比，CD4+LAP+Tregs和CD4+CD25+Foxp3 Tregs數(shù)量明顯增多，斑塊面積明顯減少，兩組具有相似的血清膽固醇水平。通過ELISA方法在小鼠腸系膜淋巴結(jié)里檢測到抗炎因子TGF-β，實(shí)驗(yàn)組小鼠中一些促炎因子如 IFN-γ和 IL-6，粘附分子如ICAM-1和 VCAM-1巨噬細(xì)胞表面標(biāo)記CD68、IL-10、IL-4等細(xì)胞因子均較對(duì)照組小鼠顯著減少，表明口服抗-CD3抗體在體內(nèi)的抑制作用至少有部分是通過TGF-β來進(jìn)行調(diào)節(jié)的。CD4+LAP+Tregs分泌TGF-β，并主要依賴TGF-β發(fā)揮調(diào)節(jié)抑制作用。

以上結(jié)果表明，通過口服的方式給予抗-CD3抗體可誘導(dǎo)CD4+LAP+Tregs的生成并到達(dá)腸系膜淋巴結(jié)和脾等其它淋巴組織器官，滅活病理性T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。盡管目前仍需要提供更多的直接證據(jù)來說明CD4+LAP+Tregs的數(shù)量及功能與動(dòng)脈粥樣硬化減少的關(guān)系。

3 結(jié)語和展望

CD4+LAP+Tregs是近年發(fā)現(xiàn)的不同于傳統(tǒng)意義上的Tregs亞群，其在抗炎、抗自身免疫方面已經(jīng)得到肯定，但對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用研究仍處在初始階段，目前主要在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，對(duì)于利用這些靶點(diǎn)研制藥物，其針對(duì)性、專一性，以及臨床療效和未能預(yù)知的副作用，不同內(nèi)環(huán)境調(diào)節(jié)通路的差異等需要進(jìn)一步探討。隨著對(duì)CD4+LAP+Tregs研究的不斷深入，可能將為動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防和治療提供新的靶點(diǎn)。

1 Weber C，Zernecke A，Libby P.The multifaceted contributions of leukocyte subsets to atherosclerosis:lessons from mouse models[J].Nat Rev Immunol，2008;8(10):802-815.

2 Tedgui A，Mallat Z.Cytokines in atherosclerosis:pathogenic and regulatory pathways[J].Physiol Rev，2006;86(2):515-581.

3 Gandhi R，F(xiàn)arez M F，Wang Y et al.Cutting edge:human latencyassociated peptide+T cells:a novel regulatory T cell subset[J].J Immunol，2010;184(9):4620-4624.

4 Sasaki N，Yamashita T，Takeda M et al.Oral anti-CD3 antibody treatment induces regulatory T cells and inhibits the development of atherosclerosis in mice[J]. Circulation， 2009; 120(20):1996-2005.

5 Nakamura K，Kitani A，Strober W.Cell contact-dependent immunosuppression by CD4(+)CD25(+)regulatory T cells is mediated by cell surface-bound transforming growth factor beta[J].J Exp Med，2001;194(5):629-644.

6 Gandhi R，Anderson D E，Weiner H L.Cutting edge:immature human dendritic cells express latency-associated peptide and inhibit T cell activation in a TGF-beta-dependent manner[J].J Immunol，2007;178(7):4017-4021.

7 Stockis J，F(xiàn)ink W，F(xiàn)rancois V et al.Comparison of stable human Treg and Th clones by transcriptional profiling[J].Eur J Immunol，2009;39(3):869-882.

8 Annes J P，Munger J S，Rifkin D B.Making sense of latent TGFbeta activation[J].J Cell Sci，2003;116(Pt 2):217-224.

9 Tran D Q，Andersson J，Wang R et al.GARP(LRRC32)is essential for the surface expression of latent TGF-beta on platelets and activated FOXP3+regulatory T cells[J].Proc Natl Acad Sci USA，2009;106(32):13445-13450.

10 Stockis J，Colau D，Coulie P G et al.Membrane protein GARP is a receptor for latent TGF-beta on the surface of activated human Treg[J].Eur J Immunol，2009;39(12):3315-3322.

11 Fahlen L，Read S，Gorelik L et al.T cells that cannot respond to TGF-beta escape control by CD4(+)CD25(+)regulatory T cells[J].J Exp Med，2005;201(5):737-746.

12 Liu Y，Zhang P，Li J et al.A critical function for TGF-beta signaling in the development of natural CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells[J].Nat Immunol，2008;9(6):632-640.

13 Chen M L，Yan B S，Bando Y et al.Latency-associated peptide identifies a novel CD4+CD25+regulatory T cell subset with TGFbeta-mediated function and enhanced suppression of experimental autoimmune encephalomyelitis[J].J Immunol，2008;180(11):7327-7337.

14 Wu H Y，Quintana F J，Weiner H L.Nasal anti-CD3 antibody ameliorates lupus by inducing an IL-10-secreting CD4+CD25-LAP+regulatory T cell and is associated with down-regulation of IL-17+CD4+ICOS+CXCR5+follicular helper T cells[J].J Immunol，2008;181(9):6038-6050.

15 Ishikawa H，Ochi H，Chen M L et al.Inhibition of autoimmune diabetes by oral administration of anti-CD3 monoclonal antibody[J].Diabetes，2007;56(8):2103-2109.

16 Ochi H，Abraham M，Ishikawa H et al.Oral CD3-specific antibody suppresses autoimmune encephalomyelitis by inducing CD4+CD25-LAP+T cells[J].Nat Med，2006;12(6):627-635.

17 Peng Y，Laouar Y，Li M O et al.TGF-beta regulates in vivo expansion of Foxp3-expressing CD4+CD25+regulatory T cells responsible for protection against diabetes[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2004;101(13):4572-4577.

18 Ait-Oufella H，Salomon B L，Potteaux S et al.Natural regulatory T cells control the development of atherosclerosis in mice[J].Nat Med，2006;12(2):178-180.