陳 昭 畢曉黎* 邱宏聰 孫冬梅

1.廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，廣東 廣州 510095;2.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022

1 緒論

作為中華民族傳統(tǒng)文化的瑰寶，中醫(yī)藥為改善人類生活及健康狀況，預(yù)防和治療各類疾病做出了其獨特、長遠(yuǎn)而重大的貢獻(xiàn)。中藥作為一種多組分、多靶點、低毒副作用的治療藥物，以其整體性和系統(tǒng)性，越來越得到國內(nèi)外研究者、醫(yī)務(wù)工作者和患者的肯定。近年來，針對中藥及天然藥物的研究方興未艾。在藥物分析領(lǐng)域，大量中藥材及其活性成分的質(zhì)量控制與藥代動力學(xué)研究見諸各類專業(yè)及大眾媒體。相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)化和現(xiàn)代化研究，也催生了多種多樣與現(xiàn)代技術(shù)相結(jié)合的中成藥制劑[1～3]。

配方顆粒劑便是其中較為成熟安全，應(yīng)用較為廣泛的品種[4～6]。它在保持原有藥物功效及作用的前提下，實現(xiàn)了藥物便捷使用、順利服用和高效作用。通過現(xiàn)代制劑工藝將提取液制備成固體顆粒，不但可以提高中藥的接受程度，也為質(zhì)量控制和有效成分分析提供了極大的便利。

目前，對于配方顆粒劑的質(zhì)量控制，主要集中在鑒別及含量測定等關(guān)乎藥物安全性、有效性、穩(wěn)定性和可控性的內(nèi)容之上。從技術(shù)層面看，分析方法主要有:薄層色譜法 (TLC/HPTLC)，紫外法 (UV)，紅外法 (IR)及高效液相色譜法 (HPLC)、氣相色譜法 (GC)與毛細(xì)管電泳法(CE)等等[1～3，8，9]。這些方法的確較為全面、客觀、高效地完成了質(zhì)量控制的各項任務(wù)，但其中仍存在大量改進(jìn)的空間。例如，在現(xiàn)有品種中，仍有相當(dāng)數(shù)量并無完整的活性成分確證及含量測定方法;部分品種雖然對其中某些標(biāo)志性成分進(jìn)行了分離和含量測定，但其中仍有大量具有一定藥理活性的化合物沒有涉及或在提取截斷就被棄去。如此一來，不但可能影響藥物質(zhì)量控制的全面、科學(xué)和客觀性，也可能忽視其中某些毒性成分，造成質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中遺留安全隱患。

此外，對于中藥和天然藥物而言，由于內(nèi)部存在大量活性成分與干擾組分，對檢測的靈敏度和分離度提出了更高的要求。特別是在進(jìn)行血藥濃度測定和體內(nèi)藥代動力學(xué)研究的情況下，血漿或其它體液中存在著大量蛋白和干擾離子，此時，一些傳統(tǒng)方法的局限性更為突出[10～12]。

綜上所述，將中藥為代表的復(fù)雜體系制成顆粒劑后，在一定程度上排除了干擾，提高了藥物治療的特異性。但對于這里藥物及其所選藥材的質(zhì)量控制，更需要謹(jǐn)慎、客觀和全面的進(jìn)行考察和評估。特別是注重對于藥材成為制劑后可能產(chǎn)生的配伍與活性成分的變化，可能消除或引入的雜質(zhì)，制備前后各組分的含量變化等。本文將從配方顆粒劑質(zhì)量研究的整個環(huán)節(jié)，即提取分離、鑒別測定以及后續(xù)的血藥濃度檢測與藥代動力學(xué)研究入手，評估目前進(jìn)入實用化階段的各項技術(shù)在該領(lǐng)域的特點及應(yīng)用狀況，試圖探尋全面提升研究效率，使相關(guān)檢測與研究更為全面、客觀的技術(shù)與方法。

2 通行技術(shù)方法綜述

與中藥相似，配方顆粒劑也存在著復(fù)雜的成分及干擾。同時，即使單味藥材，活性成分也往往為一系列結(jié)構(gòu)類似物，這就給這些藥物的分離與測定帶來了相當(dāng)?shù)碾y度。為實現(xiàn)全面、準(zhǔn)確、高效的中藥及其制劑質(zhì)量控制，需要使用多種技術(shù)、多種方法，以提升分離度、選擇性和專屬性。

2.1 高效液相色譜技術(shù) 作為現(xiàn)行分析技術(shù)中較為可靠、高效且用途廣泛的手段，高效液相色譜技術(shù) (HPLC)已經(jīng)成功運用于對以中藥、天然藥物為代表的各類復(fù)雜體系之中。通過其反向分離機(jī)理，不同類型甚至同一類型不同結(jié)構(gòu)、不同官能團(tuán)的化合物都能被區(qū)分開來。因此，只要色譜條件適宜，大多數(shù)中藥的活性成分都可以使用HPLC及相關(guān)方法進(jìn)行檢測[13－15]。然而，在HPLC中藥分析的報道中存在兩種趨勢:一是選取藥材中1－3種 (不超過4種)活性成分，對其進(jìn)行分離與測定[13－16];二是盡可能多地收集藥材中的成分信息，即優(yōu)化色譜條件使得其中更多成分洗脫并實現(xiàn)基線分離，而后采用化學(xué)計量學(xué)的方法 (如主成份分析)對搜集得來的數(shù)據(jù)進(jìn)行全面評估[17，18]。兩種方法均有各自的優(yōu)勢和特色，但也存在不可忽視的問題。例如，前者為保證分離度及柱效，往往會選擇盡可能少的目標(biāo)化合物，降低了質(zhì)量研究的全面性與系統(tǒng)性;而后者則存在數(shù)據(jù)量過大，針對性較差等問題，影響了藥物的快速、準(zhǔn)確和高效檢測。

2.2 氣相色譜法，氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法 此類方法使用高溫氣體作為流動相，主要用于分析氣態(tài)或揮發(fā)性成分，常見于中藥材中所含揮發(fā)油類成分，或是制劑提取過程中的溶劑殘留[19，20]。氣相色譜法在應(yīng)用上存在較多局限，如準(zhǔn)備時間長，載氣消耗大，靈敏度、選擇性不盡如人意等，外加對于不揮發(fā)性成分較難進(jìn)行檢測，故應(yīng)用不甚廣泛。氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) (GC/MS)一定程度上解決了靈敏度和干擾上存在的問題，但仍無法克服GC技術(shù)本身效率和適用性不佳的問題。對于中藥而言，集中進(jìn)行揮發(fā)油、溶劑、農(nóng)藥及其他揮發(fā)性有機(jī)成分的研究，或為GC及GC/MS技術(shù)最好的應(yīng)用方向。

2.3 毛細(xì)管電泳/電色譜法 作為微分析技術(shù)的一種，毛細(xì)管電泳/電色譜 (CE/CEC)法具有其獨特的技術(shù)優(yōu)勢及分離機(jī)制，它是一類以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型液相分離技術(shù)。毛細(xì)管電泳正是利用這種機(jī)理實現(xiàn)了待測物的分離。近年來，隨著檢測技術(shù)和柱技術(shù)的發(fā)展，此類技術(shù)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展和研究者的廣泛關(guān)注[21－23]。

近年來，隨著毛細(xì)管電泳/電色譜技術(shù)在復(fù)雜體系分離分析中的應(yīng)用更為廣泛，并在中藥和天然產(chǎn)物活性成分分離測定研究方面取得了一定進(jìn)步[24，25]。同時，由于新型柱技術(shù)的引入，毛細(xì)管電色譜不再局限于分離測定某些傳統(tǒng)分析技術(shù)無法檢測的藥物，而是已經(jīng)能夠部分甚至全部替代傳統(tǒng)技術(shù)。各種柱技術(shù)使得毛細(xì)管電色譜具有電泳－色譜雙重分離機(jī)理，使得原本依靠電性差異無法分離的各種化合物能夠被毛細(xì)管柱內(nèi)的填料或多孔聚合物分開，大大提升了CEC的應(yīng)用范圍。此外，毛細(xì)管電色譜可以將較高的電壓 (10－30kV)加在相對密集 (50－100μm內(nèi)徑，30－70cm長度)的空間內(nèi)，大大提升了分析速度和分離度，對于成分復(fù)雜，干擾較多的中藥配方顆粒具有較好的應(yīng)用前景。

2.4 提取與前處理技術(shù)

作為復(fù)雜體系樣品，如果能夠?qū)崿F(xiàn)高純度、富集甚至實時、在線分析，并在計算機(jī)控制下完成全部操作，能夠大量節(jié)約了時間與勞動，對于配方顆粒劑這樣體系較為復(fù)雜的樣品的質(zhì)量研究將會起到巨大的推動作用。本節(jié)將著重介紹兩種與中藥分析和微分析關(guān)系密切的前處理技術(shù)。

2.4.1 加速溶劑萃取技術(shù) (ASE) 加速溶劑萃取是一種高速、高效、高自動化的提取和純化新技術(shù)。通過一整套的自動化機(jī)械和智能化操作系統(tǒng)實現(xiàn)全自動提取，并通過其核心技術(shù)——高壓萃取實現(xiàn)萃取效率的大幅提升[26，27]。在ASE提取過程中，系統(tǒng)全程采用高氣壓輔助 (1000～3000psi)，保證了萃取溶劑在整個萃取過程中所施加的高溫(50～200℃)下仍舊呈液態(tài)。如此一來，溶劑分子的表面張力和粘度下降，擴(kuò)散及質(zhì)量轉(zhuǎn)移增加。使得它們與樣品基質(zhì)之間的相互滲透和相互作用更為頻繁，萃取效率也得到大幅度提升。此外，在高壓下，高溫的溶劑依舊保持液態(tài)，中藥里各活性成分的溶解度得到大幅提升，相比傳統(tǒng)分析技術(shù)而言，ASE的提取的活性成分含量更大，保證了較高的提取效率。

ASE的另一特點就是全自動的提取、采樣和純化操作，整個過程由程序控制，可以同時處理大量樣品，所得提取液無論純度還是濃度，均符合直接進(jìn)樣要求。如此一來，便可以大大節(jié)省提取分離及前處理的時間。當(dāng)然，為獲得雜質(zhì)更少的樣品，或是為了特異性提取其中某一活性成分，則仍需要諸如制備液相色譜或大孔樹酯洗脫等技術(shù)手段完成進(jìn)一步的分離與制備。

2.4.2 微透析采樣技術(shù) 作為一種植入性在線取樣技術(shù)，微透析不僅可以作為生物體內(nèi)活動的實時監(jiān)測工具[28]，也能夠用于對生物體液中各種內(nèi)源性和外源性物質(zhì)進(jìn)行檢測[29，30]。將其和毛細(xì)管電色譜相結(jié)合，從技術(shù)特點上看，微透析借助其體系中的半透膜將體液分為兩個部分，細(xì)胞外空間和生理緩沖液，而后者相較前者更為純凈和濃集。通常情況下，后者才收集后可直接使用HPLC、CE或其他分析技術(shù)進(jìn)行測定。因此，微透析通過將體液分層的手段，為持續(xù)、直接和自動的生物體液分析提供了可能，同時也因其集約型和小型化，大大提高了研究的效費比。

3 配方顆粒劑質(zhì)量研究的展望

除了活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)外，配方顆粒劑的標(biāo)準(zhǔn)化仍然存在一些障礙。包括:安全性、毒性及不良反應(yīng)，顆粒劑藥效與傳統(tǒng)中藥水煎劑的對比等。此外，配方顆粒劑仍需要對其功能主治、代謝過程及療效進(jìn)行全面而有針對性的評估。然而，中藥配伍成分復(fù)雜，基質(zhì)、雜質(zhì)和各活性成分之間的干擾及相互作用機(jī)理較為模糊;研究顆粒劑的活性成分含量，進(jìn)而對其藥代動力學(xué)及藥效學(xué)參數(shù)進(jìn)行深入研究，對于分析方法及儀器技術(shù)的要求則更為復(fù)雜和高深。當(dāng)對顆粒劑的研究深化到其血藥濃度測定及藥代動力學(xué)研究時，所檢測樣品的復(fù)雜性將大幅提升。如血漿和體液、組織液樣品，由于樣品基質(zhì)中大量存在的蛋白、干擾離子和其他成分，影響藥物的提取，降低分析方法的靈敏度和選擇性;更何況，藥物在體內(nèi)也未必以游離態(tài)存在。因此，對于體內(nèi)生物樣品的分離、純化和富集，而后進(jìn)行有針對性的檢測，是擺在藥物分析工作者面前的難題。

分離分析復(fù)雜體系需要更為快速、靈敏、高效和專屬性較高的檢測技術(shù)和分析方法，也刺激了儀器分析和相關(guān)技術(shù)及方法學(xué)研究與應(yīng)用的進(jìn)步。時至今日，高效液相色譜法 (HPLC)、液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法 (LC/MS)和紫外分光光度法 (UV)依舊是分析配方顆粒劑樣品最為成熟可靠的手段[31－33]。

3.1 新方法、新技術(shù)在配方顆粒劑研究中的應(yīng)用前景分析

從上面的敘述中可知，在研究配方顆粒劑時，應(yīng)當(dāng)更加注重藥材特別是其中某些活性成分體內(nèi)血藥濃度監(jiān)測及藥代動力學(xué)參數(shù)獲取。研究血藥濃度與時間的關(guān)系，探尋目標(biāo)成分的代謝途徑。將中藥飲片或藥材制成顆粒劑之后，對于其配伍、藥效、毒性、吸收與代謝是否發(fā)生變化，目前在藥物分析及中藥研究領(lǐng)域仍就存在較大空白。因此，更需要選擇高靈敏度、高選擇性，同時擁有成熟商品化儀器的提取分析方法。除各種儀器技術(shù)外，在具體的分析之中，還有一些方法能夠克服復(fù)雜體系分離分析中存在的雜質(zhì)干擾多、樣品信號相對較低的缺陷。

3.1.1 信號增強(qiáng)方法 由于液相色譜提高響應(yīng)值多依靠檢測器的改進(jìn)，通過設(shè)定和操作得到的提升效果有限，主要涉及毛細(xì)管電泳/電色譜分析中靈敏度的提升方法。場放大堆積技術(shù) (FASS)是其中一種常用且有效的方法，它能夠在毛細(xì)管區(qū)帶電泳 (CZE)的條件下大幅提高靈敏度。在先前的文獻(xiàn)中，該項技術(shù)曾經(jīng)成功用于待測物的信號增強(qiáng)[34]，可以解釋為利用運行緩沖液和樣品溶劑之間電導(dǎo)的差異，意味著樣品的響應(yīng)可以通過擴(kuò)大這種差異而得到提升。正如文獻(xiàn)所報道的一般，有機(jī)溶劑誘導(dǎo)的場放大堆積能夠?qū)崿F(xiàn)對樣品響應(yīng)的大幅度改善[35]。這一點，不但對于中藥材及顆粒劑內(nèi)各種有效成分的檢測與分析更為有利，在檢查某些微量甚至痕量的毒性化合物時，也能使用該方法完成分析測定。

3.1.2 雜質(zhì)排除方法 除技術(shù)部分所介紹的提取和采樣技術(shù)外，對于復(fù)雜體系，也可以聯(lián)用某些分析檢測技術(shù)，將整個分析劃為一、二相 (甚至第三相)。第一相為初步篩選或分離，即將感興趣的成分與干擾性成分分隔開來，通過柱切換技術(shù)將前者導(dǎo)入第二相，而后繼續(xù)分離[36]。類似的方法，還曾出現(xiàn)在毛細(xì)管電泳－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)中，利用CE的高效、快速，與MS的高靈敏度和分辨率相結(jié)合。此外，還也對毛細(xì)管內(nèi)壁進(jìn)行一些修飾和改性，增強(qiáng)其適應(yīng)性和分離效能[37]。

多相分離機(jī)理的引入，能夠很大程度提高復(fù)雜體系分離分析的選擇性和效率。同時，對于顆粒劑的質(zhì)量控制與機(jī)理分析，由于無關(guān)物質(zhì)的排除，分離分析其中目標(biāo)成分的技術(shù)改進(jìn)空間也會大幅提升。僅有感興趣的化合物進(jìn)入第二相之中，干擾的減少使得分離分析的難度大大降低。

4 結(jié)論

鑒于國家對中醫(yī)藥的高度重視，以及配方顆粒劑標(biāo)準(zhǔn)化研究的逐步推進(jìn)，相關(guān)研究機(jī)構(gòu)及生產(chǎn)企業(yè)，必然面對更為繁重和復(fù)雜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究、確立與提高等工作。另外，對其藥效、毒理及藥代動力學(xué)的研究，也會隨著這一過程的深化而逐步開展。

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