楊 靜，楊秀竹，劉洪斌

天津市南開醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所(天津 300100）

膽汁由肝細胞分泌，膽管上皮細胞對膽汁的形成有調(diào)節(jié)作用。原纖毛是膽管上皮細胞的一個細胞器，近年來研究始發(fā)現(xiàn)膽管上皮細胞原纖毛可以發(fā)揮感受器的作用，影響膽汁的分泌[1]?，F(xiàn)代研究逐漸認識到，在某些肝臟疾病中，膽管上皮細胞發(fā)揮了重要的作用[2]。保護膽管上皮細胞及其功能是一個重要的治療靶點。我們利用膽管結(jié)扎方法制備了肝外淤膽大鼠模型，并觀察了淤膽時膽管上皮細胞原纖毛形態(tài)上的變化。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組 健康雄性Wistar大鼠15只，由天津市實驗動物科技有限公司中心提供，合格證號SCXK（津）2009-0001，體質(zhì)量（250±30）g。隨機平均分為3 組：正常對照組（ratsctr）、膽管結(jié)扎7 d 組（ratsL7）、膽管結(jié)扎10 d組（ratsL10）。

1.2 主要實驗儀器 動物手術(shù)顯微鏡，電子天平（SARTORINS，德國），手術(shù)器械。

1.3 相關(guān)試劑 多聚甲醛，戊二醛，平衡鹽溶液，生理鹽水，美藍。

1.4 模型制備與樣品處理方法 參照文獻報道[3]采用膽管結(jié)扎制備膽汁淤積模型。三組大鼠全身肝素化后用生理鹽水清除肝臟內(nèi)血液；之后行膽總管插管，灌注固定液，約10 min后至肝臟變?yōu)榛野咨?，離斷肝臟，2%戊二醛固定，送檢電鏡。

1.6 檢測指標 南開大學(xué)電鏡中心行掃描電鏡分別觀察大膽管（直徑＞100 μm）和小膽管（直徑＜50 μm）的膽管上皮細胞原纖毛形態(tài)特點。

2 結(jié)果

2.1 纖毛長度的變化 正常大鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞原纖毛的長度因膽管直徑不同而有所差異。大膽管原纖毛的長度為（7.76±1.14）μm。淤膽后，ratsL7組原纖毛長度變得不規(guī)則，90%以上明顯變短，小于10%的原纖毛長度仍> 6 μm，平均長度為（2.92±1.39）μ m；ratsL10組，原纖毛長度變短至（2.34±0.37）μm。小膽管有明顯的微絨毛結(jié)構(gòu)，其原纖毛長度約（5.15±0.89）μm。正常大鼠膽管上皮細胞原纖毛平整伸展入膽管腔內(nèi)。淤膽后，ratsL7組原纖毛頂端普遍發(fā)生卷曲，未卷曲主干部分長度為（2.52±0.96）μm。ratsL10組，卷曲的原纖毛數(shù)量明顯減少，長度縮短至（2.31±0.53）μm。（結(jié)果見圖1，表1）

2.2 纖毛數(shù)量的變化 經(jīng)掃描電鏡10 000倍放大，大膽管ratsctr組每個視野中原纖毛的數(shù)量為（12±3）根。在選取的觀察點，原纖毛的數(shù)量隨時間延長而顯著的增加：ratsL7組為每視野（87±12）根，ratsL10組為每視野（197±46）根，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。小膽管原纖毛數(shù)量的變化與大膽管相似：與ratsctr組相比，ratsL7組有所增加，每視野由（4±1）根增至（16±2）根，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。ratsL10組原纖毛數(shù)量與ratsctr組相比也有顯著增加，每視野由（4±1）根增至（15±3）根，但與ratsL7組相比無明顯差異。（結(jié)果見圖2，表2）

圖1 膽汁淤積前、后膽管上皮細胞原纖毛形態(tài)的變化（掃描電鏡）

表1 膽汁淤積對原纖毛長度的影響

表2 膽汁淤積對原纖毛數(shù)目的影響

3 討論

膽管上皮細胞在肝臟的多種疾病中發(fā)揮著重要的病理作用。膽管上皮細胞（biliary epithelial cell，BEC）約占肝臟細胞總數(shù)的3%～5%，它們襯覆著肝內(nèi)的一個復(fù)雜的、相互聯(lián)系的網(wǎng)狀導(dǎo)管結(jié)構(gòu)，包括毛細膽管、小葉間膽管、左右肝管，稱為肝內(nèi)膽管系統(tǒng)（IHBDS）。同時，膽管上皮細胞也襯覆著肝外膽管。BEC 在水、電解質(zhì)運輸過程中發(fā)揮的作用已得到證實。原纖毛作為膽管上皮細胞的一個重要的細胞器，理應(yīng)引起足夠的重視。研究證實纖毛形態(tài)的不同伴隨著功能的不同[4-6]。

結(jié)扎膽總管是制作梗阻性膽汁淤積模型的常用方法。而膽管增生（膽小管反應(yīng)）被認為在膽源性肝纖維化的啟動和發(fā)展中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[7]。通過實驗我們發(fā)現(xiàn)結(jié)扎膽總管致肝外淤膽時大膽管與小膽管上皮細胞原纖毛的形態(tài)與正常大鼠相比有所不同：

首先是纖毛長度的變化。據(jù)文獻報道[1]，正常大鼠大膽管上皮細胞原纖毛的長度要長于小膽管上皮細胞原纖毛，本實驗也證實了這一點。淤膽7 d，絕大多數(shù)（90%以上）的大膽管上皮細胞原纖毛長度顯著縮短，小于10%的原纖毛仍保持原長度；至淤膽10 d，全部的大膽管上皮細胞原纖毛均縮短至2～3 μm。小膽管上皮細胞原纖毛的變化與之不同，淤膽7 d 時，原纖毛頂端發(fā)生了卷曲；淤膽10 d，卷曲的原纖毛數(shù)量明顯減少，長度與ratsL7組未卷曲的主干部位一致?？赏茰y，淤膽時，小膽管上皮細胞感受著物理（壓力）滲透壓、化學(xué)及生物性的不同刺激，原纖毛可能發(fā)生了斷裂，導(dǎo)致其長度變短，大膽管上皮細胞原纖毛未見此變化，可能與時間點的選擇有一定關(guān)系。

其次是纖毛數(shù)量的變化。膽汁淤積7 d 后，大膽管上皮細胞原纖毛數(shù)量明顯增加。淤膽10 d，原纖毛數(shù)量的增加更加明顯。小膽管上皮細胞原纖毛增加的程度稍弱，推測某種程度上與膽總管梗阻模型的病理進程有關(guān)。結(jié)扎膽總管遠端后，膽汁淤積在膽總管和肝臟內(nèi)，造成肝外膽總管近端極度膨大，肝內(nèi)膽管靠近肝門處的一級分支增粗了十數(shù)倍，這一趨勢隨淤膽時間延長而愈加明顯。而在肝臟內(nèi)部，因為有肝臟細胞與組織的支撐，肝內(nèi)膽管的后級分支感受到的壓力要逐級遞減。所以膽汁淤積程度不同，給予各級膽管的刺激也不同，這可能是原因之一。

綜上所述，淤膽后，膽管上皮細胞原纖毛具有特殊形態(tài)的原因可能是：在不同直徑的膽管中，纖毛發(fā)揮著不同的作用；此外還可能與結(jié)扎膽總管所造成的肝外淤膽的病理進程有關(guān)，即在我們選擇的觀察時間點，大、小膽管受累的程度不同，因而其變化可能具有時效性。若縮短觀察的間隔時間，大、小膽管上皮細胞原纖毛是否會發(fā)生同樣的變化，原纖毛在感受膽汁淤積所造成的壓力和化學(xué)變化中又具體發(fā)揮了怎樣的作用，這將會是一個值得深入研究的課題。

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